CD4+CD25+调节性T细胞与系统性红斑狼疮病情活动性关系的研究

目的：检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD8^＋调节性T细胞亚群，探讨其与疾病活动性、肾脏损伤、血清抗ds-DNA抗体及免疫球蛋白和补体C3含量的关系。方法：采用流式细胞术检测北京协和医院住院和门诊SLE患者（n=37）外周血CD4^＋CD25^＋T、CD4^＋CD8^＋T细胞群比例，以15例RA和15例SS组成自身免疫性疾病对照，30例健康体检者作为正常对照，观察调节性T细胞亚群与SLE患者疾病活动性指标SLEDAI、IgG、C3及血清抗ds-DNA抗体的关系。结果：①疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞群比例显著低于正常对照组（P〈0.01），疾病稳定期和风湿性疾病对照组与正常对照组结果差异无统计学意义。疾病活动期和稳定期SLE患者CD4＋CD8＋T细胞群比例都略高于正常对照组，但未发现结果差异有统计学意义（P〉0.05）。②疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于稳定期患者（P〈0.01）。SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值与SLEDAI、补体C3呈低度相关（r分别为-0.491、0.368，P〈0.05），CD4^＋CD25^＋T细胞数量与SLEDAI呈负相关（r=-0.578，P〈0.05）。③SLE并发肾病组外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于非肾病组（P〈0.01；P〈0.05）。同一SLE患者治疗前后CD3^＋CD4^-CD8^-细胞和NK细胞降低，CD4^＋CD25^＋细胞、CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值及CD8^＋T细胞增加，但未发现这些结果差异有统计学意义。本次研究未发现NK细胞、CD4^＋CD8＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞群比例在ds-DNA＋组与ds-DNA-组之间结果差异有统计学意义。结论：SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例与SLEDAI成负相关，与肾脏的损害也有密切关系，但与血清抗ds-DNA抗体产生的关系不明显。活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞减少，稳定期CD4^＋CD25^＋T细胞比例回升，因此推测CD4^＋CD25^＋T细胞的变化可能是导致疾病发生和病情发展及相关器官（如肾脏）损伤的关键环节之一。     

葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA在RA患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）mRNA在类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达及其与RA疾病活动性的关系。方法对30例RA活动期患者、30例RA缓解期患者、30例其他风湿性疾病患者及30名健康体检者，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测PBMCs中GPImRNA的表达水平。结果RA活动期患者GPImRNA的表达水平明显高于RA缓解期患者、其他风湿性疾病患者及正常对照组（P〈0．05），在RA活动组和RA缓解组，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论GPImRNA在部分RA患者中高表达，其可能在RA发病机制中起作用，并与疾病的活动性相关。     

蛋白芯片技术在自身抗体检测中的应用

目的建立应用蛋白芯片技术检测抗核抗体谱中11种自身抗体的方法，并对蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性和特异性进行评价。方法通过蛋白芯片技术与间接免疫荧光法（IIF）和酶联免疫吸附法（ELISA）自身抗体检测试剂盒进行比对，验证抗核抗体谱检测蛋白芯片（抗SSA-52抗体、抗SSA-60抗体、抗SSB抗体、抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗Scl-70抗体、抗Jo-1抗体、抗dsDNA抗体、抗rRNP抗体、抗着丝点抗体和抗核抗体）在临床应用中的敏感性和特异性。除抗Jo-1抗体阳性样品较罕见，仅检测阳性样品32份，其他10种自身抗体，每种选择各阳性样本70份，阴性样本294份；并对检测结果进行统计学分析。结果除抗SSA52抗体和抗SSB抗体的检测敏感度分别为95．7％和98．6％外，其他9种自身抗体的检测敏感度均为100％；除抗SSB抗体、抗RNP-68抗体、抗Scl-70抗体、抗dsDNA抗体、抗CEN-B抗体、抗核抗原提取物抗体（ANA）的检测特异度分别为98．0％、98．0％、99．7％、99．7％、99．7％、98．3％外，其他5种自身抗体的检测特异度均为100％。结论蛋白芯片技术检测11种抗核抗体谱自身抗体的检测敏感度（均〉95．0％）和特异度（均〉98．0％）均较高，且与IIF和EHSA法有较高的符合率，能满足临床检测自身抗体谱的要求。此外，蛋白芯片技术检测自身抗体时具有高通量、简单快速、敏感度好和特异度强等优点，值得临床推广应用。     

去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位基因片段的克隆表达及其检测自身免疫性肝炎的价值

Objective To clone and express the human asialoglycoprotein receptor(ASGPR) H1 subunit, purify and identify the immunoreactivity of the recombinant protein, and establish the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-ASGPR antibodies in diagnosis of autoimmune hepatitis. Methods The CRDHI cDNA (435 bp) was subcloned into eukaryotic vector PEGH, and the recombinant protein expression was induced by D (+)-Galactose. The recombinant CRDH1 was purified with Glutathione Sepharose 4B, and its immunoreactivity was identified by SDS-PAGE and western blot as well as MALDI-TOF. ELISA was established to detect the anti-ASGPR antibodies in serum samples of 45 patients with AIH, 30 patients with SLE, 30 patients with RA, 10 patients with SS and 30 normal controls. Results The sequencing of recombinant plasmid showed the CRDH1 gene was successfully inserted to the eukaryotic expression vector with correct sequence and open reading frame. The fusion protein showed a molecular weight of 42 500 Da on SDS-PAGE gel and confirmed to be the human ASGPR by MALDI-MS through peptide mass fingerprint analysis with Mascot in human protein database. It shared 98. 34% homology with ASGPR H1 subunit. Western blot analysis showed that the fusion protein had the same immunoreactivity as human ASGPR. The results of ELISA indicated that the positive rate of anti-ASGPR was 35.6% ( 16/45 ), but the ELISA was negative in other control. There was significant difference of positivity of the autoantibodies between AIH and non-AIH controls (χ2 = 31.85,P < 0. 01 ). Conclusions The human plasmid containing ASGPR is successfully clone into Saccharomyces cerevisiae Y258. The recombinant autoantigen owns good antigenicity and specificity. ELISA established with the purified protein shows good specificity for diagnosis of AIH.     

类风湿关节炎患者蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22基因多态性的研究

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(the protein tyrosine phosphatage nonreceptor 22,PTPN22)基因1123G＞C(rs2488457)单核苷酸多态性(SNP)与类风湿关节炎(RA)的关系.方法 采用实时荧光定量PCR对200例RA患者,100例其他风湿病患者,200名健康体检者PTPN22基因进行分型.用SPSS 11.0软件进行统计学分析和行×列表X2检验.结果 RA组PTPN22 CC基因型频率(0.120)与其他风湿病组(0.020)及健康对照组(0.015)比较差异有统计学意义(X2 值分别为18.708和24.337,P均＜0.01),而其他风湿病组与健康对照组比较,差异无统计学意义(X2值为1.066,P＞0.05);RA组C等位基因频率(0.360)明显高于其他风湿病组(0.190)及健康对照组(0.215),且差异有统计学意义(P＜.005).结论 PTPN22基因可能是RA的易感基因和RA等自身免疫病治疗的靶基因之一.     

系统性红斑狼疮患者树突状细胞CD11c^＋，CD123^＋亚群与疾病活动性的关系

目的 探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血树突状细胞CD11c+,CD123+亚群与疾病活动性、肾脏损伤及血清抗ds-DNA抗体产生的关系.方法 选定SLE疾病组51例、疾病对照组30例(类风湿关节炎、舍格伦综合征患者各15例)和正常对照组30例,采用流式细胞术检测上述指标.结果 ①SLE患者外周血树突状细胞CD11c+,CD123+亚群比例均显著低于正常对照组(P<0.01),而疾病对照组与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).②疾病活动期SLE患者外周血树突状细胞CD123+亚群比例显著高于稳定期患者(P<0.01),而两者CD11c+亚群比例之间差异无统计学意义(P>0.05).③SLE肾病组外周血树突状细胞CD123+亚群比例显著高于非肾病组患者(P<0.01),两者CD11c+亚群比例之间差异无统计学意义(P>0.05);ds-DNA+组SLE患者外周血树突状细胞CD11c+,CD123+亚群比例均显著低于ds-DNA-组(P<0.05).结论 树突状细胞CD11c+,CD123+亚群的变化可能是SLE发病机制中的关键环节之一.     

高密度蛋白微阵列芯片技术及其在疾病研究中的应用

许多具有高通量特点的蛋白质组学分析技术成为大规模研究蛋白分子间相互作用,快速高效地揭示机体许多生命活动现象的必备手段,并在近几年得到迅猛发展,高密度蛋白微阵列芯片(Protein microarrays chip)技术就是其中之一。大规模同时检测分析一个物种的蛋白,以及对这些蛋白进行亚细胞定位和相关功能的分析,同时提供不同蛋白间的相互作用是高密度蛋白微阵列芯片的用途之一。     

应用SELDI质谱技术筛选胰腺癌患者的血清标志蛋白

目的:探讨应用SELDI质谱技术对胰腺癌患者血清中特异性标志蛋白的筛选方法。方法:采用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术，选择WCX磁珠及蛋白芯片阅读机对胰腺癌及健康人(对照组)和胰腺良性疾病组的血清进行检测，以筛选胰腺癌患者血清中特异表达差异蛋白。结果:发现胰腺癌血清表达差异的潜在标志物（蛋白）4个，相对分子质量分别为5 705 Da，4 935 Da,5 318 Da和3243 Da，其中4 935 Da，3 243 Da差异表达蛋白质在对照组中低表达，而在胰腺癌组中高表达，5 705 Da和5 318 Da差异表达蛋白质在胰腺癌组中低表达而对照组中高表达。结论:应用SELDI技术筛选胰腺癌患者血清中的特异性生物标记物的方法快速、有效;检测到的4个差异蛋白质可能是胰腺癌患者血清特异性生物标记物。     

AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能评价

目的 评价Luminex公司基于多元微珠流式点阵分析(MBA)技术研制的AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能.方法 用AtheNA Multi-Lyte系统检测146例确诊的自身免疫性疾病患者,200例本实验室常规送检的连续标本和90例献血者血清中的抗SSA、抗SSB、抗ds-DNA、抗rRNP、抗Sm、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体和ACA,与传统的ANA Hep-2 IFA和单个可提取核抗原(ENA)标志物的ELISA法比较.结果 AtheNA系统与Hep-2 IFA法和ELISA法在自身免疫疾病、常规送检标本、献血者的符合率为分别为:81.5%、79.5%、96.7%和95.9%、96.5%、98.9%.436份标本分析中AtheNA系统与ELISA单个标志物抗(SSA、SSB、ds-DNA、rRNP、Sm、Jo-1、Scl-70、组蛋白)抗体和ACA的符合率分别为:95.2%、95.0%、96.1%、89.9%、85.1%、93.1%、97.0%、94.3%、97.9%.结论 AtheNA Multi-Lyte检测系统在特异性自身抗体检测上提供了均相、多元而且客观的崭新方法,在单一微孔中实现同时对多种自身抗体的定性、定量分析,与ELISA结果相比,有较高的敏感性、特异性和一致性.使传统的抗核抗体检测实现了自动化.     

Diagnosis of tumor-like polypoid lesions of gallbladder by serum proteomic fingerprint

Objective:To search the specific serum proteins in tumor-like polypoid lesions of the gallbladder(PLG)patients. Methods:Surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (SELDI-TOF-MS)technique and WCX Magnetic Beads were used to detect the serum proteomic fingerprint of 23 patients with tumor-like PLG,21 patients with non tumor-like PLG and 26 normal persons.Biomarker Wizard and Biomarker Patterns Software were used in combination to analyze the data.Results:In the preliminar...