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耐核糖核酸酶内含HCV RNA病毒样颗粒的表达 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 构建可以表达耐核糖核酸酶(RNase)的内含HCV RNA病毒样颗粒的载体质粒。方法 将表达载体pI NCCL用Hind Ⅲ酶切后,与用相同内切酶酶切的HCV RNA非编码区(5′-UTR)扩增产物,在T4 DNA连接酶的存在下连接,构建一新的表达载体pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR,再转化BL21-DE3 E.coli进行原核表达。结果 成功构建得到了新的表达载体pI NCCL-HCV RNA5′-UTR,经原核表达为耐RNase的内含HCV RNA病毒样颗粒。结论 得到的pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR表达载体及原核表达系统,可作为一个耐RNase的HCV RNA标准品和质控品的构建和制备表达载体平台。 相似文献
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生部临床检验中心发放的抗-HAV IgM质控品相当,S/CO值分别为2.96、3.12,能够作为抗-HAV IgM检测的阳性质控.该嵌合抗体在4℃及-20℃条件下均能稳定保存至少6周.IgG、IgM及交联剂不影响嵌合抗体的阳性检测结果,且该嵌合抗体与抗-HBc IgM、抗-HEV IgM检测不存在交叉反应.使用临床上常见的检测试剂盒检测结果均为阴性.结论 通过化学交联的方法成功构建了人-人嵌合抗体,可用作为抗-HAV IgM检测质控物. 相似文献
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目的联合应用TOPSIS(technique for order preference by similarity to ideal solution,TOPSIS)法和秩和比法(rank-sum ratio,RSR法),综合评价5家血站血液筛查实验室(简称血站实验室)抗-HIV、抗-HCV和HBsAg EIA检测质量。探讨联合应用TOPSIS和秩和比方法对评价血站实验室过程能力的适用性和可行性。方法分析计算5家血站实验室抗-HIV、抗-HCV和HBsAg EIA 3个检测项目的灵敏度和特异性,并以此作为指标,使用TOPSIS法、秩和比法和2者的模糊加权联合法对5家血站实验室的EIA检测能力进行综合评价排序。原始数据来自于5家血站实验室按照常规检测方法,使用2种抗-HIV、抗-HCV和HBsAg EIA检测试剂盒分别对同1批样本进行检测的结果。结果通过TOPSIS法、秩和比法和2者的模糊加权联合法综合评价,5家实验室抗-HIV、抗-HCV和HBsAg EIA 3项检测质量的综合排名为EA、CBD。结论 TOPSIS法和秩和比法的联合应用可以为血站实验室检测结果的准确性提供综合量化结果,客观评价不同血站实验室的检测能力,为血站实验室综合能力评估提供基础。 相似文献
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目的:评估新型冠状病毒(2019-nCoV)样本混采对提取、扩增步骤的影响。方法:取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中,充分混匀后1∶2、1∶10稀释,加入灭活2019-nCoV病毒培养液,以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A~E 5种模板上样量和检测灵敏... 相似文献
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2000~2002年丙型肝炎病毒核酸逆转录聚合酶链反应测定室间质量评价 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 评价2000年至2002年临床基因扩增检验实验室在丙型肝炎病毒(HCV)RNA逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测中的质量。方法 从2002年至2003年每年进行质评两次,每次发放HCVRNA样本5份,其中阳性样本3—4份,含量在10^4-10^7拷贝数/ml范围内。阴性样本1~2份,均为冻干品。要求各个实验室按规定时间检测并回报结果,然后统计分析。结果 对质评样本测定全部正确的比率从2000年的001批的53.3%(24/45)、002批的4.8%(2/42)和2001年011批的73.8%(31/42)、012批的79.2%(42/53),上升到2002年021批的89.7%(105/117)和022批的91.6%(109/119)。假阳性率也从2000年和2001年的高至26.7%和14.3%降至2002年的8.0%以下。对在10^5和10^4拷贝数/ml数量级的质评样本,测定假阴性率从2000年的15.6%(0011)、19.0%(0025)和81.0%(0023)下降到2001年的11.9%(0112)、11.3%(0125)和9.5%(0115),到2002年更是下降到了4.6%(0221)、3.7%(0223)和3.8%(0212)。从试剂盒的临床使用评价来看,从2000年到2002年各厂家试剂的临床检测特异性、灵敏度和符合率均有明显改善。结论 从2000-2002年全国临床HCV RNA RT-PCR测定假阳性和假阴性明显降低。说明所建立的HCV RNA临床RT-PCR测定室间质量评价项目能很好的监测实验室存在质量问题,从而促使其加以改进。 相似文献
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王露楠 《中华检验医学杂志》2003,26(11)
答 :1.应在四个测定区域之外的地方或区域内接收。 2 .接收的标本应收集在原始容器中 ,不能接收从其他检测如生化、免疫检验等分出来的标本。 3.在核酸提取时 ,由基因扩增检验实验室人员将标本带入至标本制备区。临床基因扩增检验对临床标本接收的要求是什么?@王露楠 相似文献
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目的掌握和提高全国医院及血站实验室对抗-HCV的检验质量。方法将1993~1994年参加卫生部临床检验中心抗-HCV血清学检验室间质量评价(质评)的回报结果进行分析和总结。结果1994年全国有243家医院及74个血站参加抗-HCV室间质评活动,同1993年相比质评成绩有明显提高。血站系统对1994年所发4份抗-HCV弱阳性样本的平均检出率为81.9%。对使用单位(包括医院和血站)在10家以上的抗-HCV试剂盒进行临床使用评价,9个生产单位的抗-HCV试剂盒符合率在90.0%以上,其中5个在95.0%以上。结论医院系统的质评成绩受所选用的试剂盒质量影响比较大,血站系统对弱阳性样本的检出率还有待进一步提高。 相似文献
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目的 探究人巨细胞病毒(HCMV) pp65是否可以诱发正常C57BL/6小鼠产生系统性红斑狼疮(SLE)相关实验室诊断指标的变化.方法 构建HCMV pp65原核表达质粒与真核表达质粒,然后进行HCMV pp65原核蛋白表达与纯化.间接法ELISA检测anti-pp65 IgG、dsDNA、抗核抗体(ANA),竞争法ELISA检测血浆中IL-1b、IL-6、TNF-α浓度.结果 成功获得HCMV pp65原核表达蛋白和真核表达质粒,免疫小鼠后血清中anti-pp65、抗dsDNA抗体、ANA、IL-6均有明显上升趋势.结论 HCMVpp65可以使C57BL/6小鼠SLE相关检测指标发生明显改变,这一结果有助于进一步研究自身免疫病的发病机制与影响因素. 相似文献
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