心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)提纯及ELISA的建立

目的心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiactroponinⅠ,cTnⅠ)的提纯及酶联免疫分析方法的建立。方法从猝死健康人心脏中,提取人心肌肌钙蛋白Ⅰ作为抗原,用其免疫新西兰雌性大耳白家兔,制备出抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ抗体,采用夹心方法,建立cTnⅠ酶联免疫吸附分析法。结果从人心肌中提取出11.7mgcTnⅠ,心肌肌钙蛋白Ⅰ抗血清滴度达1∶100000,Ka=2.38×109Lm/ol。方法学指标:灵敏度为0.2ngm/l;精密度,批内、批间变异系数分别为CV=3.8%和CV=8.2%;准确度,平均回收率99.7%;特异性,与心肌肌钙蛋白T、心肌肌钙蛋白C、肌酸磷酸激酶(CK)、肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)均无交叉反应。用该方法和进口试剂盒对32例急性心肌梗死(AMI)患者和40例健康人血中cTnⅠ水平进行检测,两者符合率分别为93.7%、95.0%。结论该方法适于临床常规检验及科研工作需要,具有广泛应用前景。     

人心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及鉴定研究

目的 :探究一种简便易行的人心肌肌钙蛋白T(cTnT)的提纯方法并进行鉴定。　方法 :采用匀浆、离心、70℃加热、冰浴、饱和硫酸铵盐析、透析、DEAE 纤维素层析等方法提纯cTnT ,并进行鉴定和免疫活性检测。　结果 :1 0 0g心肌组织中获得cTnT 2 1 .35 6mg ,纯度最高达 91 .7%。　结论 :建立的方法能成功提取纯度较高 ,且具有免疫活性的人心肌cTnT ,为建立适用于临床的cTnT检测方法奠定基础     

重组人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备重组人心肌肌钙蛋白I(rhcTnI)的单克隆抗体,并对其单克隆抗体的特性进行鉴定.方法 利用纯化后的rhcTnI作为免疫原,常规免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与同系骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,用甲基纤维素半固体培养基法获得单克隆抗体杂交瘤细胞株,利用ELISA、Western blot等方法对单克隆抗体的特性进行鉴定.结果 筛选出3株稳定分泌抗rhcTnI的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为4B3、7D5和3E6.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1(4B3、7D5)和IgG2b(3E6).3株单克隆抗体与rhcTnI发生特异性结合,而与大肠杆菌菌体蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)无特异性交叉反应,3株单克隆抗体的亲和力常数分别为1.76×109Umol、143×109L/mol和1.04×109L/mol.结论 获得了效价高、特异性好的抗rhcTn I的单克隆抗体,为cTnI诊断试剂盒的研制奠定了基础.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测及药敏结果分析

目的:通过对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测及药敏结果的分析,对本地区的细菌分布以及耐药的情况有了进一步的了解,给临床医生选用抗生素药物时一个优化选择。方法:通过对我院2010年7月~2012年7月分离出来的93株金黄色葡萄球菌进行通过纸片(K-B)法、琼脂筛选法、仪器法(法国梅里埃公司VTEK32全自动微生物分析系统)进行耐药性分析。结果:在本资料中93株金黄色葡萄球菌中有51株耐甲氧金黄色葡萄球菌(MRSA)检出,阳性率为54.83%,通过仪器法检出的50株也符合,仪器法的符合率为98.03%(50/51),纸片法检出的49株也均符合,符合率为96.08%(49/51)。对万古霉素,MRSA和MSSA均非常敏感;对于阿米卡星和利福平,MRSA的耐药性比较低。耐药率为<30%。对于其他药物都有较高的耐药性。结论:临床医生应该根据本地区实际情况结合药敏检测的结果,合理的使用抗生素类的药物,有效地控制金黄色葡萄球菌的感染和爆发流行。     

对比评价紫檀芪和白藜芦醇的抗辐射活性

目的对比评价等摩尔当量紫檀芪和白藜芦醇对ICR小鼠的抗辐射作用。方法以6～8周龄ICR雄性小鼠为研究对象,给予6.5 Gyγ-射线一次性全身照射。空白照射组(给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液),阳性对照组(给予茜草双酯100 mg.kg-1),白藜芦醇低、高剂量组(分别给予白藜芦醇50,150 mg.kg-1),紫檀芪低、高剂量组(分别给予紫檀芪56,168 mg.kg-1),均在照射前3 d内连续3次灌胃给药,照射后连续给予5 d,并在照射7 d后眼眶取血,解剖取胸腺、肝、脾、肺及两侧股骨。称重计算相关脏器系数,血清生化分析仪测白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT),以及股骨有核细胞(BMNC)和骨髓DNA,考察目标化合物紫檀芪和白藜芦醇的抗辐射损伤效应。结果与空白对照组比较,各实验组的各项指标均有所增加,且大部分差异有统计学意义(P<0.05),相同摩尔当量的紫檀芪实验组的抗辐射活性优于白藜芦醇组,尤其是紫檀芪低剂量组效果最佳,与白藜芦醇低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫檀芪对6.5Gy辐射损伤ICR小鼠的防护作用优于白藜芦醇,且紫檀芪低剂量组辐射防护效果最佳。     

人Hexastatin基因的优化、蛋白的表达纯化及初步应用

目的 优化人Hexastatin基因,并进行表达、纯化及体外的活性实验,为人Hexastatin进一步深入研究提供理论依据.方法 优化并合成人Hexastatin基因,然后与pET28a表达载体连接,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化诱导表达的条件.在超声破碎细菌和包涵体后,用Ni-NTA层析柱纯化蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)和Western Blot分析,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析肿瘤的抑制作用.结果 得到pET28a-Hexastatin表达质粒,在BL21菌体中高效表达,表达的可溶性Hexastatin蛋白占总蛋白量的45.1％,纯化后的人Hexastatin蛋白的纯度可达90％,质量浓度为80 μg/ml;Western Blot分析证实表达蛋白为目的蛋白;人Hexastatin蛋白对肿瘤细胞C6、人乳腺腺瘤细胞(MCF-7)以及人血管内皮细胞(HMEC)的生长有明显的抑制作用,抑制率分别为72.9％±3.6％、48.8％±2.9％、52.7％±2.5％.结论 成功地表达了优化的人Hexastatin蛋白,证实人Hexastatin蛋白对肿瘤细胞的抑制作用,为肿瘤的抗血管疗法提供了新途径.     

新体系对比评价常见鲜品山药的补益及健康效应

目的:以玉米低营养饲料喂养小鼠为实验动物模型,结合已建立的食品BDI-GS评价新体系对比评价3种市售常见鲜品山药食用的补益及健康效应。方法:以线性生长期的健康ICR小鼠为研究对象,空白对照小鼠喂食单纯玉米饲料,受试物小鼠喂食含20%鲜品普通怀山药、铁棍山药和山药豆的玉米掺和饲料,共喂养12d。隔天称取体重1次,末次称重后眼眶取血、处死解剖,通过统计9项脏器组织重量、系数及其BDI和GS等指标进行评价,并进行血清生化分析测试。结果:山药豆喂养小鼠在促进生长发育方面表现最佳,其综合补益效应(累计GSW)也明显优于铁棍山药及普通怀山药;而综合健康效应略低于铁棍山药。山药豆及铁棍山药对部分脏器指标存在补益和有益健康的效应,主要表现在心脏、胸腺、脾脏、胰腺和肾脏的BDI均高于1.0,部分指标与空白对照比较存在显著性差异(P<0.05及P<0.01)。然而,普通怀山药与空白小鼠脏器指标BDI比较虽有一定差异,但统计学上均无显著性,表明其补益及健康相应相对较低。结论:本研究表明山药豆的补益效应最佳,其次是铁棍山药;铁棍山药的健康效应最佳。二者对Ⅱ型糖尿病均具有一定的食疗预防功效,相关的保健食品值得开发。     

对甲基桂皮丹酚酯的合成及抗辐射活性研究

目的研究对甲基桂皮丹酚酯（4a）的合成方法及其抗辐射活性。方法通过制备酰氯的方法,在碱性条件下与丹皮酚进行酯化得到目标产物,并确证结构。以6～8周龄ICR小鼠为研究对象,经γ-射线一次性全身照射后,以30 d存活率及保护指数、平均存活天数,以及相关脏器系数、白细胞（WBC）、血小板（PLT）为指标,考察目标化合物4a低、中、高3个剂量的抗辐射损伤效应。结果小鼠经137Csγ-射线8.5 Gy一次性全身照射后,4a低、中、高剂量组的存活率由空白对照组的14.29%分别提高到28.57%、42.86%、35.71%,阳性对照组为28.57%,平均存活天数明显延长,与空白对照组比较,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）,尤其是中剂量组,和阳性对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。保护指数分别为1.50、2.01、1.60,阳性对照组为1.48,各组间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;对受6.5 Gyγ-射线全身照射后辐射损伤ICR小鼠生理指标影响的检测,结果显示4a在不同程度上增加PLT和DNA含量及胸腺系数、脾系数。结论本研究表明对甲基桂皮丹酚酯化合物具有一定的抗辐射损伤作用。     

新型多肽聚酰胺-胺型靶向药物载体的载药性能及细胞吸收和毒性

背景：前期研究通过噬菌体展示体内筛选方法获得了一条NCI-H460非小细胞肺癌特异结合的多肽（Lung cancer targetingpe ptide,LCTP）,将该多肽与修饰的聚酰胺-胺型（Polyamidoamine,PAMAM）树枝状高分子材料连接制备了纳米靶向药物载体PAMAM-Ac-FITC-LCTP,该载体在体内外对非小细胞肺癌NCI-H460具有很好的靶向性。目的：在前期研究基础上,进一步研究PAMAM-Ac-FITC-LCTP靶向载体对阿霉素的包埋、释放及其细胞吸收和毒性性能。方法：以筛选到的多肽LCTP为靶向剂,构建了PAMAM-Ac-FITC-LCTP靶向载体。采用物理包埋法将PAMAM-Ac-FITC-LCTP与阿霉素连接,通过体外透析实验观察载体对药物的缓释功能,共聚焦显微镜观察细胞对药物的吸收。以游离阿霉素作为对照,MTT法观察载体载药后对NCI-H460细胞的作用。结果与结论：PAMAM-Ac-FITC-LCTP对阿霉素的最大包埋率为7.46%。载体对药物具有明显的缓释作用,离子浓度、pH和温度对药物的释放具有影响,说明PAMAM-Ac-FITC-LCTP主要是通过静电相互作用与阿霉素结合。PAMAM-Ac-FITC-LCTP/阿霉素短时间内较单独药物更高效进入NCI-H460细胞,而复合物24h的细胞毒性与阿霉素对细胞的毒性基本一致。以上结果说明PAMAM-Ac-FITC-LCTP可能是一个肿瘤治疗和诊断中很有用的药物靶向传输载体。