IN VITRO ANALYSIS OF τ PHOSPHORYLATION SITES AND ITS BIOLOGICAL ACTIVITY

INTRODUCTIONThemicrotubule－associatedprotein蚲ishyperphos－phorylatedandglycosylatedinAlzheimerdisease（AD），andtheseabnormalmodificationsformedthebasisofprogressivelyretrogradeneurofibrillarydegenerationseeninADbrainandtherebythedementia（１，２）．ADab－normallyphosphorylated蚲notonlyismicrotubuleas－semblyincompetent，butalsoinhibitsassemblyanddis－assemblesthepreassembledmicrotubulesinvitro（３）．Inthetangle－bearingneuronsinADbrain，thenormalcytoskeletonisdisruptedandreplacedwi…     

Meynert基底核注射冈田酸致大白鼠空间记忆障碍

目的：研究蛋白磷酸酯酶2A (PP2A)下调能否引起大白鼠空间记忆障碍。方法：向大白鼠Meynert基底核注射冈田酸(OA) 0.4 μmol，检测PP2A、PP1的活性，脑内乙酰胆碱(Ach)水平及大白鼠空间记忆。结果：OA 0.4 μmol对PP2A活性的抑制率约60.0%，可致大白鼠空间记忆缺损，注射后24 h鼠脑Ach水平降低。结论：PP2A的下调在阿尔茨海默病(AD)病理变化中起着重要的作用。     

β-连环素融合绿色荧光蛋白真核表达质粒的构建及表达

目的构建β-连环素融合绿色荧光蛋白真核表达质粒，为进一步研究β-catenin在神经细胞内与其它蛋白质如tau、PSI的相互作用以及在阿尔茨海默病发病机制中的作用提供一种有用的工具。方法用亚克隆的方法将β-连环素基因插入到真核表达栽体pEGFP-C1，重组质粒pEGFP-cat瞬时转染野生型鼠成神经瘤细胞株．并在荧光倒置显微镜下观察转染效率。结果酶切鉴定和测序结果证实编码β-catenin的重组质粒构建成功，免疫荧光技术和免疫印记结果显示β-catenin-GFP融合蛋白在真核细胞中获得表达。结论成功构建β-连环素融合绿色荧光蛋白真核表达质粒，并在鼠成神经瘤细胞中表达了β-catenin—GFP融合蛋白。     

Tau蛋白在老年性痴呆症神经细胞退行性变性中的作用

自从德国病理学家Alois Alzheimer于1906年首次报道了老年性痴呆症(Alzheimer disease,AD)的主要临床和组织病理改变至今,已整整一个世纪,但对AD的研究在近20余年才取得明显进展.     

去势雌性大鼠海马区Tau蛋白Alzheimer样磷酸化的变化

目的探讨去势雌性大鼠海马区Tau蛋白Alzheimer样磷酸化的变化。方法建立大鼠双侧卵巢切除(OVX)模型,分别于术后1、2、3、4和8周取大鼠海马组织,WesternBlot检测Tau蛋白的磷酸化程度。结果与假手术组相比,OVX组去势后4和8周在海马区的PHF1位点异常磷酸化Tau蛋白显著升高(P<0.01),而相同时间点和相同区域的Tau1位点非磷酸化Tau蛋白的水平显著降低(P<0.01)。结论雌激素缺乏可导致雌性大鼠海马区Tau蛋白Alzheimer样过度磷酸化。     

持续光照对大鼠海马Aβ含量和超微结构的影响

目的 探讨持续光照对大鼠海马Aβ含量及海马超微结构的影响.方法 雄性Wistar大鼠36只.随机分为3组:正常对照组12只(正常昼夜节律);弱光组12只(24 h持续光照,照度400 lux);强光组12只(24 h持续光照,照度800 lux).光照30 d后,放射免疫法检测海马Aβ含量,透射电镜观察海马超微结构改变.结果 放免法Aβ测定结果显示:弱光组和强光组大鼠海马Aβ含量均增高,与正常对照组比较有显著差异(P<0.05).透射电镜结果显示:弱光组和强光组大鼠海马线粒体肿胀,线粒体嵴消失,结构紊乱,神经髓鞘内神经细丝稀少.神经突触密度增加.突触膜增厚,突触间隙不清.结论 持续光照可导致大鼠海马Aβ含量增高,且可致大鼠海马超微结构改变,上述改变与光照强度无关.     

蝙蝠葛碱拮抗缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的作用

目的 胞内钙离子浓度升高是Alzheimer病(AD)显著的病理生理学变化之一，本研究讨论蝙蝠葛碱对缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的影响。方法 采用钙荧光探针Fura-2／AM定量测试了蝙蝠葛碱(Dau)对缓激肽诱导的人成神经细胞瘤细胞(SH-SY5Y)胞内钙升高作用的影响。结果 Dau可显著抑制缓激肽所致胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i)升高，并存在剂量-效应关系。结论 Dau有抑制AD样[Ca^2 ]i升高的作用，为AD的发病机制和防治提供了新的线索。     

浅议新形势下病理与病理生理学学科建设的目标与措施

我国高等医学教育正面临着一系列新的发展,学校"国际化"办学目标的达成,必然依赖于一部分学科的优先发展和其带动作用.本文结合国际先进学科发展建设的模式与理念,对我院传统优势学科-病理与病理生理学学科建设目标与措施进行了深入的探讨,为高等医学教育改革进一步完善与深化提供了一些新的思路与行之有效的方法.     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达对神经细丝磷酸化的影响

背景：阿尔茨海默病的主要神经病理学特征之一是由过度磷酸化的细胞骨架蛋白（如6，神经细丝）组成的神经原纤维缠结，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5可催化6蛋白的磷酸化，但神经细丝是否可被细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5磷酸化及其在阿尔茨海默病发病中的作用却知之甚少。目的：在细胞水平观察细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5过度表达对神经细丝磷酸化的影响。设计：随机对照实验。单位：华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系。材料：实验于2001—02／10在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系实验室完成。观察对象为培养的鼠成神经瘤细胞株（N2a）细胞。方法：培养N2a细胞，分为2组，一组为转染组，一组为未转染组。转染组用脂质体转染技术将细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶．5基因转入N2a细胞株中，并建立稳定表达细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5的N2a／cdk-5细胞株，免疫沉淀法及酶活性测定检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5活性，免疫荧光和免疫印迹技术检测它的表达和神经细丝的磷酸化状态。主要观察指标：两组细胞内神经细丝磷酸化的程度。结果：在N2a细胞株转染组中，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5表达增加，并使抗体SMI31显色增强，SMI32显色减弱，提示神经细丝被过度磷酸化。与此同时，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5酶活性较未转染组提高3．5倍。结论：提示细胞水平的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达会导致细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度激活和神经细丝过度磷酸化，而过度磷酸化的神经细丝可能参与了阿尔茨海默病的病理过程。