TaqManTM实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的初步研究

目的：建立实时荧光TaqMan^TM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法，为食品中蜡样芽胞杆菌污染的调查及食物中毒的快速准确定量检测提供手段。方法：通过分析蜡样芽胞杆菌16SrDNA、23SrDNA、16S-23S ITS、gyrB、groEL、cereolysin AB、HBL（hblA、hblC、hblD）、NHE（nheA、nheC、nheD）、bce—T等目的基因，对比所选取的不同目的基因优缺点，最终选择合适的目的基因16S-23SITS进行同源性分析，并根据GenBank公布的蜡样芽胞杆菌16S-23SITS基因的保守序列，用引物与探针专业设计软件自行设计引物和TaqMan^TM探针，并利用硅胶模型^TM 基因组DNA提取法制备DNA标准品，通过对TaqMan^TM实时荧光PCR退火温度、探针浓度、引物浓度、Mg^2＋离子浓度、缓冲液浓度及酶用量等反应条件的优化，初步建立蜡样芽胞杆菌的实时荧光TaqMan^TM,陕速定量检测方法，并利用该方法对模拟样品进行检测。结果：选取的16S-23S ITS基因同源性达到99％以上，特异性好；所有蜡样芽胞杆菌均含有两段16S-23S ITS基因，有利于提高反应的灵敏度。通过对各实验条件的优化，得出蜡样芽胞杆菌TaqMan^TM实时荧光PCR的最佳反应条件，初步建立起实时荧光TaqMan^TM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法，该方法能在3h左右完成整个检测过程。结论：实时荧光TaqMan^TM定量检测法不但灵敏度好，而且特异性高，检测时间短，能提高蜡样芽胞杆菌的检出率和检测准确性，可望应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的快速准确定量诊断。     

前列回春对实验性大鼠前列腺组织显微结构和超微结构的影响

目的 :探讨前列回春对实验性大鼠前列腺组织显微结构和超微结构的影响。方法 :采用大鼠去势后注射丙酸睾酮引起前列腺增生法造模 ,灌胃给药 30d后 ,处死大鼠取前列腺组织用光镜和电镜观察 ,并在光镜下测量各实验组前列腺腺体管腔直径和上皮细胞高度。结果 :模型组腺上皮增生呈复层及假复层凸向管腔 ,使管腔缩小 ,管壁增厚 ,电镜下上皮细胞呈高柱状 ,粗面内织网高度扩张 ,其他各组增生不明显 ,各组前列腺腺体管腔直径和上皮细胞高度与模型组比较均有显著性差异或非常显著性差异 (P<0.05,P<0.01)。结论 :前列回春可抑制实验性大鼠前列腺组织上皮细胞增生。     

80岁以上高龄胆道结石患者的腹腔镜治疗

在腹腔镜胆囊切除术（LC）逐步取代传统胆囊切除术成为临床首选术式的同时,腹腔镜联合胆道镜行胆道取石也逐渐取代部分传统的开腹胆道探查术。由于高龄胆道结石患者合并症多,病程时间长,病情复杂,手术难度大,术后并发症较多,故临床上对此类患者行胆道手术存在顾虑。笔者2006年8月—2011年10月对14例80岁以上的高龄胆道结石患者行胆道手术,总结报告如下。     

腹腔镜甲状腺次全切除术52例临床疗效观察

目的 探讨腹腔镜甲状腺次全切除术的临床应用价值.方法 回顾性分析2009年3月至2012年5月昆明医科大学第二附属医院腹部微创外科完成的52例腹腔镜甲状腺次全切除术的手术患者方法及临床效果.结果 52例患者均顺利完成手术,术中无大出血及中转开放,胸前皮肤红肿、瘀斑5例,声音嘶哑3例,吞咽疼痛2例,头晕、呕吐5例,瘢痕增生1例,术中、术后均无死亡病例.手术时间53～ 150 min,术后第3～7天出院.结论 虽然腹腔镜甲状腺切除术操作困难,但安全可行,其具有明显的美容效果、创伤小、恢复快等优点,有技术条件的腔镜中心可选择合适的病例开展.     

胰管支撑外引流与非引流在胰十二指肠切除术后疗效对比的Meta分析

目的:评估胰管外引流在胰十二指肠切除术(PD)后的应用临床效果。方法:检索PubMed、Cochrane Library、EMBASE、Web of Science等相关数据库,纳入2000年1月—2017年12月的有关在PD术中比较胰管支撑外引流与非引流的研究,对每个试验进行评估并且提取数据后行Meta分析。结果:共纳入4项随机对照试验(RCT),共458例患者,其中227例为胰管支撑外引流组,231例为非引流组。Meta分析结果显示,胰管支撑外引流组较非引流组总体胰瘘发生率明显降低(RR=0.57,95%CI=0.40～0.82,P=0.002),且主要降低B/C级胰瘘的发生率(RR=0.57,95%CI=0.38～0.85,P=0.006)以及主要对胰管直径≤3 mm的患者有效(RR=0.55,95%CI=0.37～0.82,P=0.003),此外,在行导管黏膜吻合术患者中,胰管支撑外引流组的胰瘘发生率也较非引流组明显降低(RR=0.42,95%CI=0.22～0.80,P=0.008)。胰管支撑外引流组术后总体并发症较非引流组明显降低(RR=0.79,95%CI=0.64～0.98,P=0.03)。两组患者在胃排空延迟、腹腔出血、腹腔积液、伤口感染与总体术后病死率等方面均无统计学差异(均P0.05)。结论:胰管支撑外引流的使用能有效减少PD术后胰瘘及术后总体并发症的发生,但该结论仍需大样本、高质量的RCT研究进一步验证。     

重视临床真菌感染问题

临床真菌病是目前常见的疾病。近10年来,真菌病的发病率呈迅速上升趋势,尤其在重症监护病房和伴有免疫缺陷的、以及患有癌症和白细胞减少症的患者。加之抗生素的滥用,约有8％的医院感染者均由真菌感染所致,大多数与假丝酵母属有关。其中,白假丝酵母和新型隐球菌是真菌感染的较常见病原菌,光滑假丝酵母、热带假丝酵母、乳酒假丝酵母、近平滑假丝酵母,     

血清肌酸激酶自主研发生化诊断试剂的临床研究

目的 进行自主研发的血清肌酸激酶(CK)生化诊断试剂自身的性能评价及研发试剂与进口优质CK生化诊断试剂对CK实验诊断检测的可比性及偏倚评估,确认研发试剂是否符合临床要求,能否应用于临床.方法 自主研发血清CK生化诊断试剂自身的性能评价:做空白吸光度、重复性和线性检测.两种试剂的比对和偏倚评估依据美国临床实验室标准化协会 EP9-A文件标准,科学设计试验方案,以进口德国Olympus(Olympus)的诊断试剂为对照组(X),国内中生北控生物科技公司(中生)诊断试剂为实验组(Y),在日本Olympus AU5421自动生化分析仪上测定血清CK含量.标本选择高、中、低值CK含量的临床患者血清100份,每天10份,每份标本正序、倒序各测定1次,记录测定结果,作统计学分析.结果 自主研发血清CK生化诊断试剂空白吸光度、重复性和线性检测符合要求,X组试剂和Y组试剂对临床标本血清CK的检测结果经统计学处理显示:方法内重复性检查DX′i≤4DX′、DY′i≤4DY′,离群点检查Eij≤4 E,Eij′≤4E′,线性回归r=0.999 3、系统误差的估计值及其置信区间|Clow,Chigh|小于允许误差,系统误差符合国际标准要求.结论 自主研发的CK生化诊断试剂与公认的优质进口Olympus生化诊断试剂两者间具有良好的相关性;自主研发的CK生化诊断试剂自身性能良好,安全性和有效性符合临床应用要求.     

两种血清铁生化诊断试剂的临床比对分析

目的进行自主研发的国产铁(Fe)生化诊断试剂与进口优质Fe诊断试剂对Fe实验诊断检测的可比性及偏倚评估,确认研发试剂是否符合临床要求。方法按照美国CLSI EP9-A文件,每天选择高、中、低值临床血清标本10份,分别用北京九强生物科技公司试剂和ROCHE试剂在日本OLYMPUS AU5421自动生化分析仪上测定Fe,以进口ROCHE试剂为对照组,北京九强生物科技公司生化试剂为实验组。每份标本正序、倒序各测定1次,连测10d每天10份,共计100份标本。记录测定结果,做统计学分析。结果进口ROCHE和国产中生两种Fe检验试剂对临床标本Fe的检测结果显示,方法内重复性检查DX′i≤4DX′、DY′i≤4DY′,离群点检查Eij≤4E、Eij′≤4E′,线性回归r=0.999、系统误差的估计值及其置信区间│BClow,BChigh│小于允许误差,系统误差符合临床要求。结论自主研发的Fe生化诊断试剂与公认的优质进口ROCHE诊断试剂两者间具有良好的可比性和相关性。自主研发Fe生化诊断试剂符合临床应用要求,用于检测血清铁,其结果准确可靠。     

肝移植术后他克莫司血药浓度与尿α1微球蛋白及微量白蛋白的相关性研究

目的选择能够早期反映同种异体原位肝移植术后他克莫司（FK506）对患者肾功能损伤的灵敏指标。方法回顾性分析我院自2000年2月至2005年5月的15例肾功能正常的肝移植患者的临床资料，重点分析其尿α1微球蛋白（α1-MG）和微量白蛋白（mAlb）以及血肌肝（Cr）和尿素氮（BUN）与FK506血药浓度之间的关系。结果15例肝脏移植患者，尿α1-MG及mAlb含量与FK506血药浓度呈正相关（r=0．939，P〈0．005；r=0．893，P〈0．05），血Cr及BUN与FK506血药浓度无相关性（r=0．490，P〉0．05；r=0．382，P〉0．05）。结论尿α1-MG和mAlb可作为反映肾功能损伤的早期的灵敏指标，有利于监测肝移植术后FK506的理想全血浓度，能够为临床早期诊断和治疗肾功能损伤提供参考指标。     

乙肝血清学标志物定量检测及其临床意义

目的通过对乙肝病毒五项血清学标志物定量和定性检测的敏感性、特异性和阳性检出率对比,验证定量检测在临床乙肝诊治中具有重要的应用价值。方法应用时间分辨荧光定量(TRFIA)法和ELISA法检测,均严格按照试剂盒各自说明书和《全国临床检验操作规程》[1]中的要求进行,并运用Excel管理数据库和SPSS11.0软件判别分析处理数据。结果两种方法比较得出定量检测的敏感性、特异性均高于定性检测,阳性检出率具有显著差异:HBsAg P<0.05(P=0.035),抗-HBe,抗-HBc P<0.01(P=0.009)。结论乙肝病毒五项血清学标志物定量检测更适合于临床诊治的应用,定性检测更适合于常规筛查体检。乙肝病毒血清学标志物定量检测在临床乙肝早期诊断和疗效的观察等方面,具有一定的临床意义。