指数富集的配基系统进化技术及其在血管研究中的应用

指数富集的配基系统进化技术是一种生物文库技术,它利用人工合成的、容量约为1014~1015的随机寡核苷酸文库与靶物质结合,经过多轮筛选获得靶物质的DNA或RNA适配子,具有实用范围广、筛选过程简便、适配子有高特异性和高亲和性等特点。在血管研究方面主要是针对血管内膜增生和新生血管形成开展的,在该领域发展潜力巨大。     

钴60与紫外线复合诱变选育L-鸟氨酸高产菌株

目的 诱变选育L-鸟氨酸高产菌株.方法 以谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株,经60Co γ射线和紫外线复合诱变处理,选育出L-鸟氨酸的高产菌株,研究其最佳发酵条件.结果 选育出一株L-鸟氨酸的高产菌株HG106-25,遗传标记为精氨酸营养缺陷型 磺胺胍抗性(Arg- SGr).结论 突变株HG106-25在优化发酵条件后,摇瓶发酵4-5 d,L-鸟氨酸平均产量为14.7 g·L-1,达较高水平,可进行放大试验.     

环氧氯丙烷拆分菌株的选育

 目的 通过N⁺注入和紫外诱变选育拆分环氧氯丙烷的菌株。方法 从污泥中筛选得到一株拆分环氧氯丙烷的菌株并诱变选育。结果 该菌株生理生化鉴定为巨大芽孢杆菌,最适生长盐度为20 g·L^-1。经过N⁺注入和紫外诱变,该菌株的目标产物含量达到 99.2%, 产率达到42%。结论 海洋巨大芽孢杆菌具有较好的工业应用潜力。     

促进细胞内胆固醇流出抑制单核细胞源性泡沫细胞凋亡

目的：研究细胞内胆固醇流出对单核细胞源性泡沫细胞凋亡的影响。 方法： 用50 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育建立泡沫细胞模型，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，油红O观察细胞内脂滴的形成情况，用［3H］-胆固醇标记法检测细胞内胆固醇流出率，HPLC检测细胞内胆固醇含量。 结果： 用50 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育48 h后，细胞内形成大量脂滴，细胞内胆固醇酯含量由(6.8±3.6)mg/g升至(101.7±4.5)mg/g,细胞凋亡率由8.14%升至42.6%（P<0.05）。HDL3处理组和β-环糊精处理组细胞内仅见少量脂滴，胆固醇流出率由（5.2±2.1）%分别升至（36.7±4.6）%和（42.2±3.1）%，细胞凋亡率由42.6%分别降至14.3%和12.0%（P<0.05）。 结论： HDL3、β-环糊精均可通过促进巨噬细胞内胆固醇流出从而抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞凋亡。     

泡沫细胞寡核苷酸适配子PM2的特异性研究

目的 研究寡核苷酸适配子对动脉粥样硬化病变组织结合的特异性.方法 将前期研究获得的特异性适配子命名为PM2,FITC标记后,荧光显微镜分别观察适配子与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞、巨噬细胞源性泡沫细胞结合情况.采用高脂方法建立兔的动脉粥样硬化模型.利用PCR方法和荧光显微镜观察适配子与动脉粥样硬化病变结合情况.结果 PM2适配子与巨噬细胞源性泡沫细胞高度特异性结合,但不与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞结合 PM2适配子能特异性结合动脉粥样硬化斑块组织,而不结合正常动脉组织结合.结论 筛选出的PM2适配子特异性结合巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变.     

阿司匹林、阿托伐他汀联合普罗布考治疗颈动脉粥样硬化54例

颈动脉粥样硬化在心脑血管疾病中非常普遍,后果严重,可导致脑梗死[1].本文采用阿司匹林、阿托伐他汀联合普罗布考治疗颈动脉粥样硬化,观察其疗效. 1资料与方法 1.1对象2010年8月到2011年8月我院收治的108例颈动脉粥样硬化患者[均经CT和(或)MRI确诊].排除标准:①恶性肿瘤;②心源性脑梗死;③严重肝肾功能不全及心力衰竭;④三个月内使用过影响纤溶系统的药物;⑤急性损伤、免疫性疾病、感染或风湿热等.男75例,女33例.年龄42～ 73岁,平均62.9岁.108例患者分为观察组和对照组,每组54例.一般资料组间比较无显著性差异,具有可比性.     

巨噬细胞源性泡沫细胞适配子PM1的特异性

目的研究特异性寡核苷酸适配子PM1与巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变结合的特异性,为动脉粥样硬化的体内靶向治疗提供实验依据。方法对适配子PM1进行FITC标记,荧光显微镜分别观察适配子与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞、巨噬细胞源性泡沫细胞结合情况。采用高脂方法建立兔动脉粥样硬化模型,利用PCR方法和荧光显微镜观察适配子与动脉粥样硬化病变结合情况。结果适配子PM1与巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变组织高度特异性结合,但不结合血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞和正常动脉组织。结论筛选出的适配子PM1能特异性结合巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变。     

巨噬细胞极化与动脉粥样硬化

巨噬细胞可极化成两种亚型,促炎的M1型和抗炎的M2型,通过调控炎症反应可影响动脉粥样硬化发展进程。研究表明,巨噬细胞极化在动脉粥样硬化病理生理中发挥了重要作用,但目前调控巨噬细胞极化决定动脉粥样硬化炎症反应转归的机制尚不十分清楚。本文重点就动脉粥样硬化发展过程中影响巨噬细胞极化的因素做一阐述,为调节炎症反应防治动脉粥样硬化提供一个新研究方向。     

miR-19a靶向PTEN调控肝癌细胞增殖、凋亡的实验研究

目的 研究miR-19a靶向第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)调控肝癌细胞增殖、凋亡的作用.方法 培养肝细胞癌细胞株HepG2、人正常肝细胞株HL-7702,采用qRT-PCR检测miR-19a的表达量,Western blotting检测PTEN的表达量;HepG2细胞分组后转染miR-19a mi...     

Adipophilin通过ERK1/2-AP-1途径诱导炎症因子的表达

目的:观察巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白(adipophilin)对炎症因子表达的影响,阐明adipophilin促进巨噬细胞炎症因子表达的机制。方法:将已构建成功的adipophilin稳定高、低表达逆转录病毒载体转染入PA317包装细胞,制备adipophilin高和低表达的RAW264.7细胞;收集已转染成功的各组细胞上清液,用ELISA方法检测IL-6、TNF-α、MCP-1等炎症因子在细胞培养液中的浓度。Western blot检测各组细胞AP-1、p-AP-1、ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白水平;用ERK1/2抑制剂PD98059或AP-1抑制剂curcumin孵育细胞,检测各组细胞中以上指标的变化情况。结果:高表达adipophilin的细胞上清液中炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α浓度明显增高,adipophilin siRNA组细胞中的炎症因子降低;高表达adipophilin的细胞中p-ERK1/2和p-AP-1的蛋白水平增高,adipophilin siRNA组则减少;ERK1/2抑制剂PD98059使AP-1蛋白活性明显下调;给予AP-1抑制剂curcumin后,细胞培养液中的IL-6、MCP-1和TNF-α浓度明显下降。结论:Adipophilin在RAW264.7巨噬细胞中能够促进炎症因子的表达。