结核分枝杆菌DNA分型技术及其应用

在结核分枝杆菌基因组插入序列中，IS6110是最有特点的插入序列，同时结核分枝杆菌基因组内除IS6110插入序列外。还有多个插入序列和重复元件。如IS1081、PGRS、VNTR、DR等等，利用这些插入序列或重复序列，通过扩增或酶切杂交获得象人体指纹一样的特异带型，即DNA指纹图谱，由此建立的方法就称为DNA指纹技术。     

北京市复治结核病患者非北京基因型菌株谱系及耐药分析

目的 了解北京市复治结核病患者非北京基因型菌株谱系及耐药情况,为复治非北京基因型结核病患者有效防治提供科学依据。方法 采用RD105基因缺失法对复治患者所分离的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）进行检测,筛查出非北京基因型菌株,使用可变数目串联重复序列基因分型实验分析非北京基因型菌株的遗传特征,再使用比例法药敏实验及全基因组测序分析其耐药情况。结果 134例复治结核病患者所分离的MTB中,北京基因型为 125例（93.3%）,非北京基因型为9例（6.7%）。9例非北京基因型MTB呈现9种不同的基因型,均不成簇,为独特型。9例非北京基因型MTB均为谱系4,其中,亚谱系L4.4有4株,亚谱系L4.5有5株。耐药预测结果显示,9例非北京基因型中,6例为全敏感菌株（66.7%）,1例单耐异烟肼,耐药突变位点为ahpC_c.-48G>A,1例同时耐异烟肼与乙硫异烟胺, 耐药突变位点为fabG1_c.-15C>T,1例单耐氟喹诺酮,耐药突变位点为gyrA_p.Asp94Asn与gyrA_p.Ala90Val。全基因组测序预测耐药结果与比例法药敏结果完全一致。结论 复治结核病患者非北京基因型菌株主要为谱系4,呈明显的多态性。耐药突变位点均为常见突变位点。     

NRAMP1基因3′UTR多态现象与汉族结核病易感性的研究

目的 研究人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白(NRAMP1)基因3’UTRR多态现象与汉族结核病易感性的关系。方法 选取汉族活动性结核病患147例，正常对照145人，用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR—RFLP)的方法对NRAMP1基因3’UTR进行基因分型，根据基因型对样本分组，经统计学处理，研究3’UTR多态现象与结核病易感性的关系。结果 在活动性结核病患中3’UTR TGTG／TGTG基因型95例(64．6％)，TGTG／TTTG缺失基因型50例(34．0％)，TGTG缺失／TGTG缺失基因型2例(1．4％)；正常对照TGTG／TGTG基因型则为115例(79．3％)，TGTG／TGTG缺失基因型29例(20．0％)，TGTG缺失／TGTG缺失基因型1例(0．7％)。正常对照组TGTG／TGTG基因型明显高于结核病患(x^2＝7．79；P＜0．01)。研究发现TGTG的等位基因频率为0．85，TGTG缺失的等位基因频率为0．15。结论 NRAMP1基因3’UTR多态现象与结核病易感性相关，汉族3’UTR TGTG缺失等位基因频率明显高于白种人，可部分解释汉族比白种人更易患结核病。     

分枝杆菌的多相分类鉴定

分枝杆菌属除麻风分枝杆菌外,主要包括结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌.近年来,随着结核病(结核分枝杆菌复合群为其致病菌)的回潮,非结核分枝杆菌感染率由4%急速上升到10%,快速和准确地鉴定它们显得非常重要.在我国非结核分枝杆菌的表型鉴定一直沿用以生化实验为核心的传统鉴定方法,且欠缺数值分类的补充分析.全细胞脂肪酸气相色谱分析这种表型鉴定方法仅在有条件的省份开展.随着分子生物学的发展以及系统发育理论的提出,与之相应的基因分型方法也被用于分枝杆菌属的鉴定.本文详细阐述了系统发育的理论以及应用于非结核分枝杆菌的遗传学分类鉴定方法,即DNA-DNA杂交和16S rDNA基因序列分析.为进一步提高表型鉴定的准确性,又详细介绍了一些用于数值分类的应用软件.总之,多相分类鉴定已被广泛应用于非结核分枝杆菌的分类鉴定中.本文也介绍了一些结核分枝杆菌复合群基因分型鉴定方法及其在结核分子流行病学中的广泛应用.     

γ-干扰素诱导蛋白10在结核性胸膜炎辅助诊断中的应用价值

目的 探讨胸腔积液γ-干扰素诱导蛋白10（IP-10）在结核性胸膜炎中的诊断价值。 方法 选择2010年10月至2011年10月在北京胸科医院门诊及收住入院的胸腔积液患者195例,其中结核性胸腔积液患者112例(结核性胸腔积液组),恶性肿瘤胸腔积液患者83例（恶性胸腔积液组）,采用双抗夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者胸腔积液IP-10浓度,研究两组患者IP-10浓度的差异。 结果 结核性胸腔积液组IP-10浓度［196 855（4518～1 512 550） pg/ml］明显高于恶性胸腔积液组［7432（173～97881）pg/ml］,差异有显著统计学意义（U=575.00,P<0.001）;结核性胸腔积液组IP-10阳性患者构成比为82.14%（92/112）,恶性胸腔积液组IP-10阳性患者构成比为6.02%（5/83）,两组比较差异有显著统计学意义（χ²=110.49,P<0.001）。ROC曲线分析结果显示,胸腔积液中IP-10的诊断临界值为10 964 pg/ml,诊断敏感度为82.14%（92/112）,特异度为93.98%(78/83),准确度为87.18%(170/195)。 结论 胸腔积液IP-10水平检测对结核性胸膜炎的早期诊断与鉴别诊断具有重要价值。     

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药相关基因突变研究

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA、ahpC、kasA及oxyR基因突变特点。方法对144株结核分枝杆菌临床分离株(耐异烟肼菌株101株;异烟肼敏感株43株)的katG、inhA、kasA、ahpC及oxyR基因进行DNA片断扩增及DNA序列分析,与GeneBank中结核分枝杆菌标准序列进行比较。结果(1)耐异烟肼菌株中未发现katG完全缺失,81株耐药株(80.2%)katG存在点突变、缺失或插入,其中16个突变位点未见报道;39株(38.6%)耐药株第315位点突变,低耐药菌株(1μg/ml)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10μg/ml;χ2=9.31,P<0.05);58株(57.4%)耐药株第463位点突变。23株(53.3%)敏感株第463位点突变。(2)5株(4.9%)耐药株inhA发生突变。敏感株inhA无突变。(3)3株(2.9%)耐药株ahpC发生突变。敏感株ahpC无突变。(4)17株(16.8%)耐药株kasA发生突变。敏感株中3株菌株Gly312Ser突变。(5)在全部菌株中未发现oxyR基因突变。(6)综合本项研究中各基因的突变情况,共有91株耐异烟肼菌株发生与异烟肼耐药相关的突变。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG、inhA、ahpC及kasA基因突变之间的关系,并且提示还有其他机制参与异烟肼耐药。     

天津地区临床分离株结核分枝杆菌分子流行病学研究

目的探讨天津地区结核分枝杆菌临床分离株分子流行病学特征。方法连续收集天津市海河医院2005年8月16日～11月25日就诊病人痰培养阳性的结核分枝杆菌100株，采用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）和数目可变串联重复序列（VNTR）两种方法进行基因分型，并运用软件对二者的结果进行分析。依据北京分化支的定义。运用多重和实时定量PCR方法将其区分为W菌/典型北京家族菌株和非典型北京菌株，x^2检验分析两种亚群与患者年龄和耐药性之间的联系。结果排除污染菌株，共对96株结核分枝杆菌临床分离株进行两种方法的基因分型，Spoligotyping结果为91．7％为北京基因型（含3株类北京基因型）结核分枝杆菌（88／96）。VNTR分型可将北京基因型分为60种基因型。在北京分化支结核分枝杆菌中，W菌/典型北京家族菌株占93．2％（82／88）。两种北京分化支亚群与患者年龄和耐药性没有显著性统计学差异（P〉0.05）。结论天津地区结核病患者临床分离的结核分枝杆菌中，北京基因型呈现较为明显的优势。VNTR的分辨率明显高于Spoligotyping。北京分化支的两种亚群在天津地区临床结核病患者中均存在流行，但以W菌/典型北京家族菌株为主。     

侧裂入路显微手术治疗危重型高血压基底节区脑出血

基底节区是高血压脑出血最常见的出血部位,主要在壳核,占高血压的半数以上[1].高血压脑出血死亡率较高,预后差,特别是出血量较多且伴有脑疝形成患者,如果不及时采取手术或手术方式不当,患者生存几率较小或预后很差.我院自2008年1月-2010年6月采用经侧裂入路显微手术清除血肿,同时行标准大骨瓣减压治疗40例高血压基底节区出血伴有脑疝形成患者,取得了满意效果,现将报告如下.     

新型抗结核化合物体内外活性评价方法的研究进展

结核病( tuberculosis , TB )是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性呼吸道传染病,是全球十大死因之一,也是由单一传染源导致死亡的 主要原因,排名高于艾滋病.2019 年因 TB 死亡的人数 是 120 万人[1].MTB 具有特殊的生理特征,包括生长...     

腰大池置管持续引流治疗脑脊液漏

大部分脑脊液漏经保守治疗均可治愈,超过4周仍不愈合者需考虑手术治疗,手术创伤大,复发率在6%～25%之间[1].我科自2005年10月～2007年10月采取腰大池置管持续引流治疗脑脊液漏取得了良好效果,报告如下: