蛋白激酶Cθ信号途径在结核分枝杆菌抗原激活人γδT细胞增殖和分化中的作用

目的 研究蛋白激酶Cθ(protein kinase Cθ,PKCθ)信号途径在结核分枝杆菌抗原(Mycobacterium tuberculosis antigen,Mtb-Ag)激活人γδT细胞增殖和分化中的作用.方法 健康人外周血单个核细胞(PBMC)用Mtb-Ag和IL-2优势刺激和扩增γδT细胞,或预先用5.0μmol/L Rottlerin(楸毒素)预处理,培养不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测γδT细胞表面活化分子和细胞因子表达;同时采用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记细胞,流式细胞术分析Mtb-Ag刺激γδT细胞后的增殖和各子代细胞百分率.结果 PBMC经Mtb-Ag刺激后3d,γδT细胞CD69和CD25表达分别为46.2%和45.6%,而Rotderin预处理显著地抑制了CD69和CD25表达(P＜0.01);PBMC经Mtb-Ag激活培养5、10和15d,培养扩增细胞中的γδT细胞比例分别为9.6%、54.6%和82.4%,其中第5天已有少部分γδT细胞发生增殖,第10天和第15天时几乎全部γδT细胞分裂都在6代以上,用Rottlerin预处理,显著抑制了γδT细胞增殖反应,但在培养第10天后仍有少部分γδT细胞发生增殖反应;同时在培养第7天、14天和21天,用PMA(佛波酯)+Ionomycin(离子霉素)再刺激后,产生IFN-γ的γδT细胞均在80%左右;培养21d时,有2.6%的γδT细胞表达IL-4.在Rottlerin预处理组产生TH1型细胞因子IFN-γ的γδT细胞均显著减少(P＜0.05),而γδT细胞表达TH2型细胞因子IL-4则几乎完全抑制(P＜0.01).结论 PKCθ信号途径在Mtb-Ag刺激γδT细胞的增殖和分化中均起重要作用.     

PKC途径和P13K在人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ中的作用

目的 研究信号转导中的蛋白激酶C(PKC)途径与磷酸肌醇3激酶(P13K)在人外周血γδT细胞分泌Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ中的作用.方法 人PBMC先用P13K抑制剂Ly29400Z、PKC抑制剂Rottlerin或NT-κB抑制剂TPCK分别预处理1h,再加入结核杆菌低分子量多肽抗原(Mtb-Ag)和rhIL-2刺激3 d,最后用低浓度PMA Ionomycin短时再刺激后检测γδT细胞IL-2和IFN-T分泌;并同时检测,αβT细胞作为对照.结果 无抑制剂的对照组γδT和αβT细胞中分泌IL-2的比例分别为44.5%和15.2%,分泌IFN-γ的比例分别为51.1%和10.7%;Ly294002、Rottlerin、TPCK组分泌IL-2的γδT和αβT细胞均显著减少(P＜0.05或P＜0.01),后二组分泌IFN-γ的78T和αβT细胞亦显著减少(P＜0.05或P＜0.01);但Ly294002组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞反而上升至77.2%和22.3%(P＜0.01).结论 PKC途径活化促进人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ;PDK亦促进人γδT细胞分泌IL-2但在其分泌IFN-γ中起负向作用.     

结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。     

如何做好检验科实习生带教工作

检验医学专业学生的实习是学校教学的延伸,是教学中理论联系实践的重要阶段。通过实习可实现基础理论知识和临床实际的密切结合,使学生熟练掌握检验操作技能,培养其分析问题、解决问题及独立工作能力。随着检验医学的不断发展,检验科工作方式和内容发生了巨大变化。因此,如何更新观念,不断思考和改进带教方式,做好新时期下的检验医学实习生带教工作,是检验工作者必须认真思考的问题[1]。本院作为教学医院,实习生带教工作已成为日常工作中的重要任务。现将笔者近年来实习带教工作经验总结如下。     

大鼠雪旺细胞系RSC96条件培养液对少突胶质前体细胞的体外增殖作用

目的 观察大鼠雪旺细胞系RSC96细胞条件培养液(RSC96-CM)对少突胶质前体细胞(OPCs)增殖的影响,探讨其作用机制.方法 应用免疫粘附法从胚胎15d的SD大鼠脊髓分离OPCs,应用BrdU掺入实验检测OPCs的增殖,应用RT-PCR技术检测PDGF-AA和bFGF在RSC96细胞的表达,应用ELISA技术检测RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF蛋白的浓度,以特异性抑制剂阻断观察PDGF-AA和bFGF在RSC96-CM诱导OPCs增殖中的作用,以特异性抑制剂观察ERK和JNK信号途径在RSC96-CM诱导OPCs增殖中的作用.结果 不同浓度的RSC96-CM培养的OPCs,其BrdU+细胞的比例与对照组相比均显著增加(P＜0.05),其中,在含50％ RSC96-CM的培养液中培养的OPCs的BrdU+细胞的比例达高峰.RT-PCR证实RSC96细胞显著表达PDGF-AA和bFGF的mRNAs,ELISA结果发现,RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白浓度分别是我们前期报道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87倍和0.92倍.PDGFR的特异性抑制剂AG1295和bFGFR特异性抑制剂PD173074均显著降低RSC96-CM诱导的OPCs增殖;此外,Erkl/2特异性抑制剂U0126和JNK特异性抑制SP600125的预孵也显著降低RSC96-CM诱导的BrdU+ OPCs的比例(P＜0.01).结论 RSC96-CM显著诱导OPCs的增殖,其通过RSC96分泌的PDGF-AA和bFGF激活Erkl/2和JNK信号途径而发挥作用;RSC96-CM也可以作为OPCs常规培养的扩增剂.     

AFP、CEA在2种不同化学发光分析系统间的对比分析和偏倚评估

目的 探讨AFP、CEA在我院两化学发光分析系统之间检测结果是否具有可比性,并进行偏倚评估.方法 依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) EP9-A文件方案,每天选取临床样本6～9份,分别在雅培I2000SR和强生Vitrous ECI两分析系统进行测定,共测定6 d 43个样本,以雅培I2000SR分析系统为比较方法,强生Vitrous ECI分析系统作为实验方法,对检测结果进行对比分析和偏倚评估.结果 AFP、CEA在两分析系统间的检测结果线性回归方程良好,相关性较好(r2均大于0.999),但当AFP浓度在小于30 ng/ml,CEA浓度在小于15 ng/ml时,预期偏倚和相对偏倚均在允许偏倚之外,两分析系统间的结果不能被接受.其它预期偏倚均在允许偏倚内,结果可被接受.结论 在做好室内质量控制和室间质量评价的基础上,必须对不同检验系统、分析方法进行比对与偏倚评估,并根据情况进行校准,才能保证真正意义上的检验结果的一致性.     

糖尿病患者红细胞膜Na^＋,K^＋—ATP酶活性改变的观察

Na 、K -ATP酶是位于细胞膜上的一种糖蛋白，与ATP的分解和细胞内外钠、钾离子的转运密切相关。近年来研究表明［1～2］，肝硬化、甲状腺疾病患者红细胞膜Na 、K -ATP酶活性有所改变。也有糖尿病患者钠泵活性减弱的报导。本文旨在探讨糖尿病患者红细胞膜Na 、K -ATP酶的活性与血糖控制水平的关系。1 材料和方法1.1 一般资料43例糖尿病患者符合WHO(1985年)糖尿病诊断标准，均排除甲状腺、肝脏疾患，血压、心率均无异常。其中血糖控制良好组20例，通过合理的饮食、药物治疗，使糖尿病患者达到血糖严格控制目标(男16例，女4例，年龄44…     

类风湿性关节炎患者IL-2、sIL-2R、IL-6和TNF水平及其临床意义

类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,RA)是最常见的一种风湿性疾病。据估计 ,我国约有 40 0万患者。由于 RA的临床诊断缺乏特异性的实验室指标而易导致漏诊和误诊。近年来 ,细胞因子的检测对 RA诊断中的应用价值颇为人们关注。为此 ,我们测定了 5 4例 RA患者血清中的 IL - 2、s IL - 2 R、IL - 6和 TNF水平 ,以探讨其对该病的临床意义 ,并同时测定血清中 RF水平。1　资料与方法1.1　标本来源　 5 6例 RA患者血清均采自本院风湿病科已确诊的专科患者。其中活动期 2 6例 ,缓解期 2 0例 ,2 0例对照组血清采自健康人体检 ,均保存于 …     

化学发光微粒子免疫分析法在梅毒血清学检测中的应用

目的:探讨化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）在梅毒螺旋体抗体血清学检测中的应用价值。方法:采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对临床标本作梅毒螺旋体特异性抗体筛查,对筛选出的86例阳性标本进一步采用CMIA和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）检测,分析比较检测结果,并将CMIA测定值与甲苯胺红不加血清热试验（TRUST）检测结果进行比较。结果:86例ELISA试验阳性标本中,经TPPA确证试验,阳性84例,阴性2例,ELISA试验符合率为97.67%;而CMIA和TPPA检测符合率为100%。TRUST假阴性率较高,且随着CMIA的检测值增高,TRUST阳性率明显增加（P<0.01）。结论:ELISA法筛查梅毒存在一定的假阳性,CMIA可以作为梅毒螺旋体特异性抗体筛查阳性标本的确证试验,TRUST可用于疗效观察。