乙肝病毒HBx-d382与HBx-d431突变体特异性抗体检测方法的建立及临床应用

目的建立检测乙肝病毒X基因突变体HBx-d382和HBx-d431特异性抗体的方法,探讨其在诊断HBV相关性肝细胞癌中的应用价值。方法通过生物信息和多肽合成的方法,制备HBx-d382和HBx-d431特异性多肽抗原。采用间接ELISA法对正常人和慢性乙肝病毒感染者和肝细胞癌病人血清中抗HBx-d382和抗HBx-d431特异性抗体进行检测。结果肝细胞癌病人血清中抗HBx-d382和抗HBx-d431抗体的阳性率均高于正常人、慢性乙肝病毒感染者（P<0.05）,慢性乙肝病毒感染者抗HBx-d382和抗HBx-d431抗体的阳性率高于正常人（P<0.05）。慢性乙肝病毒感染者HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)模式抗HBx-d382阳性率明显低于HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)模式和HBsAg(+)/HBcAb(+)模式（P<0.05）,而抗HBx-d431和抗HBxP阳性率在这些血清学模式之间无显著性差异（P>0.05）。结论抗HBx-d382和抗HBx-d431是乙肝病毒感染的一种特异性抗体,可以用于HBV携带者及慢性乙肝病人的监测,对预测肝细胞癌的发生有一定的意义。     

HBsAg阳性的血清学少见模式病毒学分析

目的　对HBsAg阳性血清学少见模式病毒学进行分析 ,了解各少见模式的HBV -DNA水平 ,以此估计其传染性程度 ,为乙肝的预防、诊断和治疗提供实验室依据。方法　采用ELISA、定量PCR和定性PCR等方法 ,分别检测HBsAg阳性各少见模式病人的血清学标志物 (HBVM )和HBV -DNA。 结果　在各少见模式中 ,均不同程度地检出HBV -DNA ,阳性率介于 4 5 %～ 10 0 %之间 ,其中以HBsAg(+) /HBeAg(+)模式HBV -DNA阳性率最高 (10 0 % )。与HBsAg(+) /HBeAg(+) /HBcAb(+)组比较 ,HBsAg(+) /HBeAg(+)组和HBsAg(+) /HBsAb(+) /HBeAg(+) /HBcAb(+)组HBV -DNA含量差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,其余各少见模式HBV -DNA含量显著性降低 (P <0 .0 5 )。结论　在HBsAg阳性的血清学少见模式中 ,各种模式均存在病毒的复制。s系统或e系统抗原和抗体的同时存在 ,预示着病人正处在感染相和恢复相动态消长过程中 ,或存在不同的亚型及突变株。HBsAg阳性而抗HBc阴性 ,提示HBV -DNA前C区可能出现突变。     

外周血单个核细胞分泌Th细胞因子IFN-γ,IL-10在原因不明反复流产患者的研究

目的探讨原因不明反复流产妇女外周血单个核细胞分泌Th细胞因子。方法采用细胞分离,混合淋巴细胞培养实验和用酶联免疫吸附法检测20例反复自然流产患者血液中的分泌Th细胞因子水平,并以20例正常健康早孕组为对照。结果反复自然流产患者IFN-γ高于对照组,IL-10低于对照组数据经统计学比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论反复自然流产患者的Th的分泌的IFN-γ,IL-10细胞因子失衡可能是反复自然流产的原因之一。     

4657例深圳市盐田区户籍人口珠蛋白生成障碍性贫血基因分析

目的：通过研究深圳市盐田区户籍人口珠蛋白生成障碍性贫血基因型及人群携带率,为开展深圳盐田区地中海贫血的遗传咨询、产前诊断和预防计划提供科学依据。方法抽取3 mL EDTA-K2抗凝血进行全血细胞分析,以平均红细胞体积（MCV）＜80 fL 作为初筛试验,初筛后可疑病例进行 DNA 提取后用于基因检测。其中α-地中海贫血基因检测使用4对 PCR 引物,在同一反应体系进行扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定,根据条带分析结果。β-地中海贫血基因型检测,采用 PCR 产物测序进行分析。结果初筛后可疑病例4657例全部进行基因检测,检出地中海贫血基因携带者510例,地中海贫血基因携带率10．95％;其中α-地中海贫血基因携带者389例,携带率8．35％,以α-3．7、α-4．2、α-SEA,为主;β-地中海贫血基因携带者121例,携带率2．59％,以 CD41/42、LVS-Ⅱ-654、box-28、CD17、CD71为主。结论盐田区户籍人口珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率与省内其他地区基本接近,检测出的8种地中海贫血基因类型均为常见类型。     

慢性乙肝血清免疫学检测阴性的原因分析

目的通过对慢性乙肝患者进行血清免疫学检测、基因检测与肝组织免疫组化检测,探讨临床上慢性乙肝血清免疫学检测阴性产生的原因,从而有利于临床医生对慢性乙肝的诊断及治疗。方法采用美国雅培Elisa试剂盒检测患者血清HBsAg、HBsAb、HBeAg三项,通过PCR方法定量检测血清HBV-DNA,采用menghini法穿刺取肝组织,用免疫组化法检测HBV抗原表达。同时采用组织学活动指数（HAI）评估肝细胞损伤程度;按慢性肝炎病理诊断标准进行分级（G）和分期（S）。结果24例血清HBVM阴性者（即HbsAg、HBeAg均阴性）被临床疑为慢性乙肝携带者10例,其中7例有10^4-10^5 copies／ml病毒负荷,3例有10^4copies／ml病毒负荷。剩余14例中,6例被临床原疑为慢性肝炎,有3例为10^5-10^6copies／ml、3例〉10^6copies／ml;剩下的8例临床疑为病毒负荷量低于10^4copies／ml的肝硬化者,均有HbsAg、HbcAg单独或同时在细胞质或细胞膜上表达,其中4例分级、分期为G2、S1,4例分级、分期为G3、S2。结论对可疑病例必须联合血清HBV-DNA检测和肝组织免疫组化检测才能明确诊断,弥补血清学检测的不足,从而使临床医生作出准确的诊断及预后判断。