猴表皮干细胞的分离和培养

目的： 探索猴表皮干细胞分离纯化和培养方法。 方法: 将猴皮肤标本剪成皮条,加入0.25％胰酶浸泡过夜；然后去除角质层，刮上皮面获取表皮细胞进行培养。取第2-4代的细胞,经消化后，用Ⅳ型胶原黏附法获得为快吸附的表皮细胞。对快吸附的表皮细胞行流式细胞仪、免疫组化和RT-PCR检测。 结果: 快吸附细胞从mRNA转录水平及蛋白表达水平均呈现表皮干细胞的特性：β1整合素、K15和α6整合素阳性，而CD71和K1/K10阴性。 结论: 所采用的分离纯化方法和培养条件适合猴表皮干细胞的分离纯化及生长。     

谈我国图书情报事业发展进程中的问题及对策

INTERNET这一全球最大的国际互联网的开通 ,使得有些人惊呼 INTERNET就是信息高速公路。计算机技术、光盘技术、网络技术和通信技术的发展 ,引发了第二次社会信息革命 ,加快了人类进入信息进代的步伐。由此带来的网络信息检索、网上虚拟图书馆建设和数字图书馆建设建设等一浪高过一浪的热潮 ,远程医疗和远程教育等 ,都理所当然地成为人们关注的热点 ,我国图书情报事业何去何从 ?WTO环境下有什么新的挑战和机遇 ,该如何发展 ?都是需要考虑的问题。1　现状我国的图书情报事业起步较晚 ,但是发展迅速 ,成绩可观。从中央到地方 ,不仅设…     

人表皮细胞与角膜上皮细胞蛋白质组的差异表达初步研究

目的：应用蛋白质组技术比较人表皮细胞与角膜上皮细胞之间的蛋白质表达差异。方法：实验于2005-11，2006-10在中山大学中山眼科中心国家眼科学重点实验室完成。分别培养人表皮细胞与角膜上皮细胞，裂解原代细胞抽提总蛋白，精确定量后进行双向电泳，扫描电泳凝胶获得二维总蛋白图谱。图谱使用软件辅助比较分析，找出差异表达点，从凝胶中抠取差异点，胶内酶解后用基质辅助激光解吸附，电离飞行时间串级质谱法鉴定差异蛋白。结果：人表皮细胞与角膜上皮细胞蛋白质凝胶分析获得600余个清晰的蛋白质斑点，在比较分析出的26个差异点中初步鉴定出4个差异表达蛋白，分别是细胞内氯离子通道1、Psodasin、乳酸脱氢酶B和丝氨酸蛋白酶抑制因子。结论：人表皮细胞与角膜上皮细胞在蛋白质表达上有较高的相似性以及较好的可比性，为探索表皮细胞横向分化成角膜上皮细胞的分子机制做出了有益的尝试，并提供了具有一定可操作性的实验方法。     

应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点

目的:探索一种简单易行的方法分离表皮干细胞,为组织工程学的进一步研究奠定基础。方法:实验于2005-07/12在中山大学眼科中心国家眼科学重点实验室完成。健康3个月龄恒河猴2只,分离与培养猴表皮细胞,获取第2～4代的细胞,消化后,将细胞重新放回原瓶中,培养箱中静置20min,获得的贴壁细胞即为快吸附的表皮细胞。①于光学显微镜下观察分选前细胞和快吸附细胞。②对20min快吸附的表皮细胞进行整合素α6和CD71流式细胞仪检测,以未经吸附分选的细胞作为对照。③20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞分别制作3组细胞爬片,进行整合素β1、K15、和K10的免疫组织化学染色。④20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞进行K15、整合素β1和K1(K10对应角蛋白)的mRNA反转录聚合酶链反应的检测。结果:①分选后的细胞体积较小,核浆比例较大。②流式细胞仪的结果显示快吸附细胞以干细胞为主(α6briCD71dim为82.5±1.641),也含有少量的短暂扩增细胞(α6briCD71bri为4.9±2.125),有丝分裂后细胞及终末细胞则检测不到(α6dim)。③免疫组化可见快吸附细胞呈K15和整合素β1阳性,K10阴性;分选后未黏附细胞K10为阳性,而K15和整合素β1均为阴性。④反转录聚合酶链反应示吸附分选后的快吸附细胞高表达K15和β1整合素,K10没有表达;而分选后剩余的细胞只表达K10。结论:原瓶黏附分选方法是一种简单可行的分选表皮干细胞的方法。     

骨形态发生蛋白2载体材料在脊柱融合方面的研究与应用

背景：骨形态发生蛋白2在临床中单独应用存在一些不良反应,因此迫切需要研制理想的载体材料,来减少骨形态发生蛋白2引起的不良反应。目的：全面了解不同骨形态发生蛋白2载体材料的性能,综述其在脊柱融合方面的研究进展。方法：以“tissue engineering,Bone morphogenetic protein-2,spinal fusion,scaffold”或“组织工程,骨形态发生蛋白2、脊柱融合、支架”等作为检索词,由第一作者检索PubMed及万方数据库1995-07-01/2015-07-01有关脊柱融合中骨形态发生蛋白2支架方面的文献,排除重复性研究。结果与结论：骨形态发生蛋白2的载体材料主要包括4大类,天然生物材料、人工合成有机材料、人工合成无机材料及复合材料,每一类都有几种代表性的支架材料,用于动物脊柱融合中各有缺点,比如天然生物材料普遍力学性能较差,人工合成有机材料有可能引起炎症反应,人工合成无机材料机械强度较差,复合支架材料制作工艺较复杂等,因此骨形态发生蛋白2载体材料的选择仍需进一步的实验研究。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

深低温反复冻融杀伤人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞的机制

【目的】研究-70℃反复冻融体外杀伤人眼脉络膜黑色素瘤细胞系OCM-1的机制。【方法】OCM-1细胞反复冻融后，用噻唑蓝比色法及克隆形成实验检测细胞的杀伤情况和细胞生长活力，免疫组织化学方法检测细胞P16表达的变化，电镜及共聚焦显微镜观察冻融后细胞凋亡和坏死的形态学改变，并测定细胞的凋亡比率，流式细胞仪检测冻融前后细胞CD40表达比率及细胞膜电位的变化。【结果】噻唑蓝比色法检测及克隆形成实验显示，冻融可以直接杀伤OCM-1细胞，且残存的细胞生长能力也明显受抑制。免疫细胞化学染色见对照组的细胞呈P16阳性，而冻融后的细胞均呈阴性，冻融后培养的细胞部分呈阳性。电镜下观察到冰晶的结构特征及细胞的坏死和凋亡等变化。激光共聚焦显微镜观察发现凋亡细胞随着冻融次数的增加而增多。流式细胞仪测定显示冻融后细胞膜电位下降，冻融前后CD40阳性细胞比率差异明显，且呈一定的量效关系。【结论】冻融不仅可以明显杀伤OCM—1瘤细胞，还能抑制残存瘤细胞生长。反复冻融能诱导大量的肿瘤细胞发生凋亡，此为杀伤肿瘤及诱导肿瘤退变的直接原因，其机制与线粒体膜电位及P16表达下调有关。冻融后瘤细胞坏死因子CD40表达增强，可能是增强机体的免疫应答，介导机体免疫杀伤瘤细胞的机理。     

深低温反复冻融杀伤人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞的机制

 【目的】研究-70℃反复冻融体外杀伤人眼脉络膜黑色素瘤细胞系OCM-1的机制。【方法】OCM-1细胞反复冻融后，用噻唑蓝比色法及克隆形成实验检测细胞的杀伤情况和细胞生长活力，免疫组织化学方法检测细胞P16表达的变化，电镜及共聚焦显微镜观察冻融后细胞凋亡和坏死的形态学改变，并测定细胞的凋亡比率，流式细胞仪检测冻融前后细胞CD40表达比率及细胞膜电位的变化。【结果】噻唑蓝比色法检测及克隆形成实验显示，冻融可以直接杀伤OCM-1细胞，且残存的细胞生长能力也明显受抑制。免疫细胞化学染色见对照组的细胞呈P16阳性，而冻融后的细胞均呈阴性，冻融后培养的细胞部分呈阳性。电镜下观察到冰晶的结构特征及细胞的坏死和凋亡等变化。激光共聚焦显微镜观察发现凋亡细胞随着冻融次数的增加而增多。流式细胞仪测定显示冻融后细胞膜电位下降，冻融前后CD40阳性细胞比率差异明显，且呈一定的量效关系。【结论】冻融不仅可以明显杀伤OCM—1瘤细胞，还能抑制残存瘤细胞生长。反复冻融能诱导大量的肿瘤细胞发生凋亡，此为杀伤肿瘤及诱导肿瘤退变的直接原因，其机制与线粒体膜电位及P16表达下调有关。冻融后瘤细胞坏死因子CD40表达增强，可能是增强机体的免疫应答，介导机体免疫杀伤瘤细胞的机理。     

小鼠酪氨酸酶siRNA的体外有效性实验研究

目的通过RNAi技术,筛选出针对小鼠酪氨酸酶的有效siRNA,为酪氨酸酶异常等人类疾病的动物模型制作及该类疾病的预防和治疗奠定基础。方法利用针对小鼠酪氨酸酶mRNA的不同干扰片段分别转染小鼠黑色素瘤B16细胞系,同时采用阴性干扰片段转染作为阴性对照,单纯脂质体转染作为空白对照。使用实时荧光定量PCR、酪氨酸酶活性测定和黑色素含量测定3种方法分3个时间点于转染后24、48、72 h对不同组的细胞干扰结果进行检测。结果siNM_011661_001、siNM_011661_002、siNM_011661_003三个干扰片段均能在转染后发挥一定的干扰作用,其中siNM_011661_001在转染后发挥的干扰效果最强,在降低酪氨酸酶基因mRNA表达、酶活性、以及黑素含量三方面分别能起到82.81%、64.73%、52.53%的抑制作用。结论针对小鼠酪氨酸酶的siNM_011661_001序列能在转录后水平发挥高效、稳定的基因沉默作用,是发挥RNAi的优势序列。     

应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点

目的：探索一种简单易行的方法分离表皮干细胞，为组织工程学的进一步研究奠定基础。方法：实验于2005—07／12在中山大学眼科中心国家眼科学重点实验室完成。健康3个月龄恒河猴2只，分离与培养猴表皮细胞，获取第2-4代的细胞，消化后，将细胞重新放回原瓶中，培养箱中静置20min，获得的贴壁细胞即为快吸附的表皮细胞。①于光学显微镜下观察分选前细胞和快吸附细胞。②对20min快吸附的表皮细胞进行整合素α6和CD71流式细胞仪检测，以未经吸附分选的细胞作为对照。③20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞分别制作3组细胞爬片，进行整合素β1、K15、和K10的免疫组织化学染色。④20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞进行K15、整合素β1和K1（K10对应角蛋白）的mRNA反转录聚合酶链反应的检测。结果：①分选后的细胞体积较小，核浆比例较大。②流式细胞仪的结果显示快吸附细胞以干细胞为主（α6^briCD71^dim为82．5&;#177;1．641），也含有少量的短暂扩增细胞（α6^briCD71^bri为4．9&;#177;2．125），有丝分裂后细胞及终末细胞则检测不到（α6^dim）。③免疫组化可见快吸附细胞呈K15和整合素β1阳性，K10阴性；分选后未黏附细胞K10为阳性，而K15和整合素β1均为阴性。④反转录聚合酶链反应示吸附分选后的快吸附细胞高表达K15和β1整合素，K10没有表达；而分选后剩余的细胞只表达K10。结论：原瓶黏附分选方法是一种简单可行的分选表皮干细胞的方法。     

前列舒通胶囊联合坦索罗辛治疗轻度良性前列腺增生患者的效果

目的：观察前列舒通胶囊联合坦索罗辛治疗轻度良性前列腺增生（BPH）患者的效果。方法：回顾性分析2021年3月至2023年3月该院收治的120例轻度BPH患者的临床资料,按照治疗方法不同将其分为对照组和观察组各60例。对照组予以坦索罗辛治疗,观察组在对照组基础上联合前列舒通胶囊治疗,两组均治疗12周。比较两组临床疗效,治疗前后排尿功能指标（残余尿量、平均尿流率、最大尿流率）水平、炎性指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)]水平、国际前列腺症状评分表（IPSS）评分、国际勃起功能指数-5(IIEF-5)评分,以及不良反应发生率。结果：观察组治疗总有效率为91.67%(55/60),高于对照组的76.67%(46/60),差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后,观察组残余尿量少于对照组,平均尿流率、最大尿流率水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后,观察组IL-6、TNF-α、COX-2水平均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后,观察组IPSS评分低于对照组,IIEF-5评分高于对照组...