非特异磁性分离法在血小板制品污染菌富集中的应用研究

目的建立非特异磁性分离法富集血小板制品中的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,以提高应用核酸扩增方法检测血小板制品污染菌的效率。方法应用6种磁珠(80 nm羧基、200 nm羧基、2.8μm氨基、2.8μm羧基、2.8μm环氧基、2.8μm甲苯磺酰基磁珠),分别对高浓度(102—103CFUs.ml-1)、低浓度(<102CFUs.ml-1)血小板制品中的大肠杆菌进行非特异性富集,选取富集效率最高的磁珠,进一步对不同稀释浓度的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌(10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6)进行富集,与直接离心法进行对比,比较不同细菌富集方法对后续聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测灵敏度的影响。结果 6种磁珠对高、低浓度的血小板制品中大肠杆菌均有富集作用,其中80 nm羧基磁珠的富集效率最高(P<0.05);应用直接离心法和80 nm羧基磁珠富集样品后,PCR检测大肠杆菌的灵敏度分别为588 CFUs.ml-1、1 CFUs.ml-1,检测金黄色葡萄球菌的灵敏度分别为1 130 CFUs.ml-1、40 CFUs.ml-1。结论应用磁性分离法富集血小板制品中污染菌,其操作简单,所获细菌纯度高,为后续PCR检测方法在血小板制品污染菌检测中的临床应用提供帮助。