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目的:通过转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)诱导的人肺泡上皮细胞A549观察脱氧核糖核酸(DNA)甲基化酶和端粒酶的变化。方法:采用TGF⁃β1诱导A549细胞建立体外肺纤维化模型,分为对照组、TGF⁃β12μmol/L干预组、TGF⁃β15μmol/L干预组和TGF⁃β110μmol/L干预组。采用β⁃gal染色法检测细胞衰老程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)法和逆转录荧光定量聚合酶链式反应(RT⁃qPCR)检测炎症因子白细胞介素⁃1β、白细胞介素⁃6表达变化;RT⁃qPCR检测I型胶原蛋白(COL⁃I)、纤维连接蛋白1(FN1)、张力蛋白C(Tensin⁃C)、DNA甲基转移酶(DNM)T3a、DNMT3b、钙黏蛋白(CDH1)及端粒酶逆转录酶信使核糖核酸(mRNA)的表达;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测端粒酶逆转录酶蛋白表达。结果:对照组几乎未见衰老细胞,干预组细胞衰老程度随TGF⁃β1浓度升高而增加;TGF⁃β1干预组白细胞介素⁃1β、白细胞介素⁃6含量明显升高(P<0.05);对照组A549细胞形态呈典型的上皮细胞样形态,TGF⁃β1干预组出现典型的间质细胞样形态,Masson染色结果显示对照组细胞几乎未见蓝色胶原蛋白,而TGF⁃β1干预组蓝染胶原蛋白表达明显增多,发生纤维化改变;TGF⁃β1干预组与对照组比较,COL⁃I、FN1、Tensin⁃C、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达明显升高(P<0.05),端粒酶逆转录酶和CDH1基因mRNA的表达降低(P<0.05),Western Blot进一步验证端粒酶逆转录酶蛋白表达降低(P<0.05)。结论:TGF⁃β1导致A549细胞发生衰老,并促进炎症因子和致纤维化因子高表达发生纤维化改变;TGF⁃β1促进了DNA甲基化酶的表达,抑制了端粒酶逆转录酶的表达。 相似文献
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目的探讨衰老相关肺纤维化与免疫功能的关系及细菌溶解产物对老年小鼠肺纤维化的影响。方法 24只老年健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(N组)、肺纤维化组(M组)、肺纤维化+细菌溶解产物干预组(P组), M、P组于气管内注射博来霉素(5 mg/kg)建立小鼠肺纤维化模型, N组注射生理盐水, P组建模后经口注入细菌溶解产物0.4 ml, 1次/d, 造模28 d后取肺组织和血液。通过苏木精-伊红(HE)和马松三色(Masson)染色检测小鼠肺组织病理变化并进行Ashcroft评分, 免疫组化检测肺组织CD4+、CD8+表达, 酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清干扰素-γ(INF-γ)、白细胞介素-13(IL-13)和免疫球蛋白A(IgA)蛋白含量, 实时定量反转聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肺组织INF-γ、IL-13 mRNA的含量, 蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织型金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达水平。结果 P组小鼠在细菌溶解产物干预下肺纤维化程度较M组明显减轻;与N组比较, M组CD4+T... 相似文献
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