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目的 建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGS mRNA表达的方法,研究MTX对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异,并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGS mRNA表达水平的变化.方法 用SYBR Green Ⅰ为荧光染料,以β-actin作参照,建立检测FPGS mRNA的实时荧光定量PCR方法.根据Ct值、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价.并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的14例白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA的表达.结果 建立的标准曲线Ct值与模板浓度有良好的线性关系,FPGS和β-actin标准曲线相关系数分别为0.996 8和0.998 7,斜率分别为-3.595和-3.740,批内CV为1.27%~2.95%,批间CV为3.82%;熔解曲线均呈单个特异峰,扩增效率相似(斜率为0.021 7);L-(+)-MTX耐药细胞和D-(-)-MTX耐药细胞中FPGS mRNA相对含量分别为(3.51±0.66)和(0.16±0.01),A549亲本细胞(S)中FPGS mRNA相对含量为(1.00±0.31),差异有统计学意义(F=64.45,P<0.01);L-(+)-MTX耐药细胞和D-(-)-MTX耐药细胞间FPGS mRNA相对含量差异有统计学意义(q=9.29,P<0.01).白血病患者应用MTX治疗耐药后,FPGS mRNA表达水平为(0.35±0.04),用药前为(1.00±0.44),差异有统计学意义(t=8.83,P<0.01).结论 建立的实时荧光定量PCR检测FPGS mRNA的方法重复性好、特异度高,可用于FPGSmRNA含量分析.MTX诱导耐药后细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA表达发生了变化,MTX 2种对映体形式在细胞耐药机制中可能发挥了不同的作用. 相似文献
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一步法实时荧光RT-PCR在快速检测甲型流感病毒中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种能快速检测甲型流感病毒的一步法实时荧光PCR方法,对样本进行准确检测。方法以甲型流感病毒特异M基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,建立一步法实时荧光RT-PCR方法,并对乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒Long株、冠状病毒OC43及229E、副流感病毒1、2、3型以及季节性流感病毒H1、H3进行检测,验证该方法的特异性和灵敏度,并对临床样本进行检测应用。结果所建立的一步法实时荧光RT-PCR可对甲型流感病毒进行特异扩增,操作方便快速,对H1和H3亚型的最低检出限可达0.01TCID50/ml;对384例临床咽拭子样本的检测准确度达99.5%。结论本研究建立的一步法实时荧光RT-PCR方法可实现对甲型流感病毒快速准确的检测,有助于对临床流感病例的快速诊断。 相似文献
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非小细胞肺癌患者hnRNPA2/B1检测的临床意义 总被引:3,自引:2,他引:1
目的本研究的目的是通过非小细胞肺癌肿瘤组织和外周血hnRNPA2/B1的检测探讨临床预后。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法分别对30例NSCLC患者肿瘤组织和外周血及8例非恶性肿瘤患者的正常肺组织进行hnRNPA2/B1检测。随访一年后对无复发患者外周血hnRNPA2/B,复查。结果30例NSCLC患者经过一年随访复查,死亡和复发组的肿瘤组织hnRNPA2/B1与正常肺组织组和无瘤生存组比较有显著差异(P〈0.05),而外周血在死亡和复发组与无瘤生存组间无差异(P〉0.05),同样TNM临床分期之间也无差异(P〉0.05)。但一年后复查无瘤生存组外周血hnRNPA2/B1明显降低,与死亡和复发组以及无瘤生存组手术前的血hnRNPA2/B1比较有显著差异(P〈0.05)。结论NSCLC患者肿瘤组织的hnRNPA2/B1明显增高,显著增高预示预后极差,但外科手术治疗后预后好的患者外周血hnRNPA2/B1则明显降低,因此NSCLC患者的肿瘤组织和外周血hnRNPA2/B1检测可以用来指导术后的进一步治疗和判断预后。 相似文献
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乙型肝炎病毒基因型的国内研究进展 总被引:2,自引:2,他引:0
乙型肝炎病毒基因型分布有地理差异,并与肝病的发生、发展,以及抗病毒药物的疗效,都有一定的相关性。对近年来国内乙型肝炎病毒基因型的有关研究作一综述。 相似文献
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目的探讨人3号染色体短臂(3p)等位基因位点杂合性缺失(LOH)多区域联合检测的意义。方法采用实时荧光定量PCR方法分别对32例非小细胞肺癌患者及8例非恶性肿瘤患者外周血有核细胞进行3p位点LOH检测,对试验结果统计学分析。结果32例非小细胞肺癌外周血有核细胞LOH联合检出率为65.625%,各目的基因检出率分别为18.75%(3p25)、31.25%(3p14)、50%(3p21.3),相比对照组检测结果差异具有显著性,联合检出率高于各位点单纯检出率,差别具有显著性。结论非小细胞肺癌外周血有核细胞3p位点LOH检测对于肺癌的无创诊断有意义,且多区域联合检测有助于提高检测的敏感性。 相似文献
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背景与目的 已有研究表明,3号染色体短臂(3p)等位基因的杂合性缺失(loss of heterozygaity,LOH)是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生中常见且早期发生的分子生物学改变,可以造成该染色体所包含的多种抑癌基凶的失活.本研究的目的是探讨人3p LOH在非小细胞肺癌(NSCLC)临床检测中的意义.方法采用荧光定量PCB方法分别对32例非小细胞肺癌肿瘤组织及8例非恶性肿瘤肺组织和外周血有核细胞进行3p位点LOH检测,对试验结果进行非参数检验.结果 32例肺癌标本中LOH联合检出率为78.125%,外周血有核细胞LOH联合检出率为65.625%,其中肺癌组织标本各位点LOH检出率分别为43.75%(3p25)、56.25%(3p14)、56.25%(3p21.3),外周血有核细胞检出率分别为18.75%、31.25%、50%,相比对照组结果具有差异,组织及外周血有核细胞联合榆出率高于各位点单纯检出率,差别具有统计学意义;同一患者的肺癌肿瘤组织与外周血有核细胞3p基因LOH联合检测结果存在一致性.结论 肺癌组织及外周血有核细胞3p基因LOH检测对于肺癌的无创诊断具有较好的临床意义,且多位点联合榆测有助于提高检测的敏感性. 相似文献
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目的研究氨甲蝶呤(MTX)对映体耐药人非小细胞肺癌A549细胞的迁移能力以及表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达。方法用细胞划痕试验检测L-(+)-MTX/A549细胞和D-(-)-MTX/A549细胞的迁移能力;双层软琼脂克隆试验检测L-(+)-MTX/A549细胞和D-(-)-MTX/A549细胞的克隆形成率并观察集落的形态;用RT-PCR检测亲本A549细胞、L-(+)-MTX/A549细胞和D-(-)-MTX/A549细胞中EGFR mRNA的表达。结果加入MTX 72 h后D-(-)-MTX/A549细胞的迁移能力(1 230.1±40.2)高于L-(+)-MTX/A549细胞(530.3±25.4);D-(-)-MTX/A549细胞、L-(+)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞的克隆形成率(%)分别为(1.38±0.17)、(1.36±0.13)和(1.37±0.15),差异无统计学意义(P>0.05);亲本A549细胞、L-(+)-MTX/A549细胞均有EGFR mRNA表达,其光密度值(IDV)分别为(6 630±64)、(3 697±27),差异有统计学意义(t=103.42,P<0.01)。而D-(-)-MTX/A549细胞不表达EGFR。结论 D-(-)-MTX诱导的A549细胞的迁移能力大于L-(+)-MTX。EGFR基因表达具有手性差异。 相似文献
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甲氨蝶呤对映体诱导的肺癌A549耐药细胞株中VEGF及其受体表达差异的研究 总被引:6,自引:1,他引:5
目的:通过探讨甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)对映体耐药细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的差异,以反映MTX对映体耐药细胞在肿瘤中血管形成能力的不同.方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)技术分别检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组中VEGF、血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR) - 1和VEGFR - 2 mRNA的表达水平;皮下接种裸鼠,成瘤后取瘤体切片,行CD34免疫组织化学检测,新生微血管密度(microvessel density,MVD)计数;采用双层软琼脂克隆形成实验检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组细胞的克隆形成率.结果:RFQ-PCR检测结果显示,D-(-)-MTX/A549组VEGF、VEGFR-1和VEGFR-2 Ct值/β-actin Ct值分别为1.668±0.127、1.872±0.133和1.919±0.107,L-(+)-MTX/A549组的比值分别为2.035±0.185、2.221 ±0.157和2.255 ±0.140,亲本细胞组的比值为2.057±0.123、2.291±0.138和2.354±0.131;3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计MVD显示亲本细胞为3.29±1.11,L-(+)-MTX/A549细胞为8.00±2.14,D-(-)-MTX/A549细胞为57.88±13.87;软琼脂实验检测克隆形成率发现D-(-)-MTX/A549组为(0.625±0.088)%,L-(+)-MTX/A549组为(1.050±0.095)%,亲本细胞组为(1.250±0.248)%.研究结果显示D-(-)-MTX/A549组和L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组之间差异均有统计学意义(P<0.05),而L-(+)-MTX/A549组与亲本细胞组之间则差异无统计学意义(P>0.05).结论:D-(-)-MTX诱导肺腺癌A549耐药细胞在肿瘤血管形成上的能力大于L-(+)-MTX诱导的细胞. 相似文献
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目的了解人乳头瘤病毒感染患者HPV6,11型和HPV16,18型的分布。探讨HPV—DNA分型检测的临床应用价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)方法检测1567例HPV感染者疣体组织或分泌物中的HPV6,11型和HPV16,18型。结果男女性均可感染HPV6,11和HPV16,18型,男性感染者以HPV6,11型为主,感染率为27.68%(157/567)。女性1000人次中,确诊感染HPV有659人,HPV阳性320人次,检出率为32%,其中低危型208例,即HPV6,11型阳性率为31.56%;高危型112例,即HPVl6,18型为16.99%。结论FQ—PCR具有灵敏度高、特异性强、简捷方便的特点,适于临床推广应用。HPVDNA分型检测技术可以快速区分高危型及低危型HPV感染,有助于对尖锐湿疣的复发和宫颈癌变作出可能性预测。 相似文献