应用酵母双杂交系统筛选Foxp3△2相互作用蛋白

目的:应用酵母双杂交系统从人外周血白细胞cD-NA文库中筛选与转录因子Foxp3相互作用的蛋白,为进一步研究Foxp3的转录调控机制奠定基础。方法:首先构建pG-BKT7-Foxp3△2酵母双杂交诱饵载体,转化AH109酵母细胞,检测其毒性及自激活作用;然后将诱饵质粒与人外周血白细胞cDNA文库共转AH109酵母细胞,筛选了与Foxp3△2存在相互作用的蛋白。结果:成功构建了pGBKT7-Foxp3△2酵母表达载体,经转染AH109酵母细胞,无有毒性,无自激活作用。获得了40个阳性克隆,经生物信息学分析,其中9个具有开放读框。结论:应用酵母双杂交技术筛选出一组可与Foxp3△2相互作用的候选蛋白,为进一步研究Foxp3△2功能奠定了基础。     

急性呼吸道感染成年患者病原体检测结果分析

目的通过对成年患者9种呼吸道感染病原体IgM抗体的检测,了解本地呼吸道病原体的流行情况,为临床提供早期诊断和治疗依据。方法选取成都军区昆明总医院呼吸道感染住院成年患者1 855例,通过9项呼吸道感染病原体IgM抗体试剂检测住院成年患者血清病原体抗体,分析9项呼吸道感染病原体在不同季节、不同年龄段成年患者血清中的检出情况。结果 1 855例患者血清IgM抗体阳性共510例,总阳性率为27.76%(510/1 855),阳性率较高的病原体依次为:MP(19.14%)、IFB(14.18%)、PIV(9.54%)和IFA(6.47%)。MP在6、7、8月的阳性率低于其他月份(P0.05);IFA在5、6、7、10月的阳性率较高(P0.05),IFB在5月阳性率最高,达30.61%(P0.05);4、8月是PIV的高发期(P0.05)。MP、IFB和PIV在16~30岁和30~40岁这两个年龄段患者中的阳性率明显高于其他年龄段(P0.05);IFA在16~30岁患者中的阳性率明显高于其他年龄段(P0.05)。结论昆明地区成年人呼吸道感染的病原体主要为MP和各型流感病毒,并且病原体的阳性率与年龄和季节有关。     

昆明市1000例银行职员EB病毒 VCA-IgA抗体的调查与分析

EB病毒是鼻咽癌重要的致病因子,抗EB病毒相关抗体的检测常用于筛查鼻咽癌[1].我科2011年10月对昆明市某银行1000名健康体检者进行EB病毒VCA-IgA抗体检测,现将结果分析如下.     

呼吸道感染患者巨细胞病毒检测及临床意义

目的探讨呼吸道感染患者巨细胞病毒感染状况及其临床意义。方法采用荧光定量PCR法对256例呼吸道感染患者进行血清、呼吸道分泌物的巨细胞病毒DNA检测。结果256例呼吸道感染患者,血清巨细胞病毒DNA阳性率为21．1％,呼吸道分泌物巨细胞病毒DNA阳性率为34．0％,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。50名正常对照组阳性率为2．0％,感染组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。上呼吸道感染、急性支气管炎、肺炎、支气管扩张合并感染,4种疾病的巨细胞病毒DNA阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论巨细胞病毒的检测对于呼吸道感染的诊断具有重要意义。     

炭疽芽孢杆菌基因芯片探针的制备

目的制备炭疽芽孢杆菌(BA)基因芯片探针,应用于BA基因芯片的检测。方法采用PCR方法,以BA疫苗株A16R基因组DNA为模板,扩增pXO1质粒上的8个特异性片段,连接至pMD19-T Simple载体,构建分别包含8个探针序列的重组质粒,以其为PCR扩增模板获取探针DNA。结果基因测序证明,成功获得BA的3个探针。结论 BA基因探针的成功获取,为炭疽芽孢杆菌基因芯片的制备奠定了基础。     

人源Dickkopf1原核表达质粒的构建及表达产物初步鉴定

目的构建人源dickkopf1(dkk1)基因的原核表达质粒,表达、纯化、鉴定其表达产物。方法自足底皮肤组织提取成纤维细胞,抽提mRNA,RT-PCR获得人源dkk1基因片断,构建重组质粒PQE30-dkk1;转化至大肠杆菌内,诱导表达,超声裂菌、镍琼脂糖凝胶层析纯化表达产物,SDS-PAGE电泳、WesternBlot鉴定表达产物。结果RT-PCR获得片断与预期结果相符,双酶切鉴定、测序鉴定证实重组质粒PQE30-dkk1构建成功;SDS-PAGE电泳、抗Dkk1抗体WesternBlot鉴定表达产物为Dkk1蛋白。结论成功构建了人源dkk1的原核表达质粒,并表达、纯化、鉴定了该基因的原核表达产物,为下一步的Dkk1蛋白对皮肤黑素细胞的生物学活性研究奠定基础。     

门诊女性生殖道单纯疱疹病毒Ⅱ型感染情况分析

目的 了解女性泌尿生殖道感染者单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的感染情况,为早期诊断及治疗提供依据.方法 应用荧光定量PCR技术对158例女性患者生殖道分泌物进行HSV-Ⅱ-DNA检测,同时以40名健康体检妇女作为对照组.结果 在158例生殖道感染者中有48例HSV-Ⅱ阳性,阳性率为30.4%,明显高于对照组(7.5%)...     

重组人C22orf37融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的：构建人C22orf37基因的原核表达载体,表达并纯化C22orf37重组蛋白．方法：应用PCR方法从人外周血白细胞eDNA文库中获得人C22orf37基因,成功构建人C22orf37融合表达载体,诱导表达His—C22orf37融合表达蛋白并对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western Blot鉴定．应用镍螯合层析法纯化重组融合蛋白,并对纯化产物进行纯度分析．结果：成功构建了人C22orf37重组融合载体pQE30-C22orf37,工程菌pQE30-C220rf37／DH5α经IPTG诱导后的菌体蛋白经SDS—PAGE电泳分析,在Mr约18000处出现了一条新生的蛋白条带,Western Blot结果显示该条带能够与His抗体特异性结合．应用Ni—NTA层纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白经Primer Premier软件分析纯度约80％．结论：成功构建了人C22orf37的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化了人C22orf37的融合蛋白,为下一步的C22orf37 mAb的制备和C22orf37蛋白表达的组织分布及功能研究奠定了基础．     

荧光定量PCR检测孕妇巨细胞病毒感染情况分析

人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HC-MV)广泛存在于宿主的组织器官内,可以随血流通过胎盘侵犯胎儿,特别是在妊娠早期,孕妇感染HC-MV后,可通过胎盘垂直传播给胎儿,引起先天感染,引起流产、死胎、早产,新生儿可发生体重减轻、肝脾肿大、黄疸、血小板减少性紫癜和溶血性贫血等[1]。为了早期快速、准确地诊断HCMV感染,为