一种新的质粒介导的IMI-1型碳青霉烯酶

目的　确立亚胺培南耐药阴沟肠杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法　采用Etest测定抗菌药物最低抑菌浓度 (MIC) ,通过等电点聚焦电泳 (IEF)、三维试验、接合试验、Southern杂交、聚合酶链反应 (PCR)、克隆测序对酶的活性及编码基因进行研究。结果　阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶 ,等电点为 8.1。该酶能被克拉维酸抑制 ,不被氯唑西林、EDTA抑制 ,存在 2f类酶的某些特性 ,其耐药基因位于 80kb左右的质粒上。克隆测序显示与染色体介导的IMI 1有 99%的同源性。结论　阴沟肠杆菌对亚胺培南耐药是由一种新的质粒介导的与染色体介导的IMI 1类似的碳青霉烯酶所致。     

多重耐药阴沟肠杆菌β-内酰胺酶编码基因的研究

目的了解北京朝阳医院临床分离的多重耐药阴沟肠杆菌的β-内酰胺酶编码基因. 方法对12株临床分离的多重耐药的阴沟肠杆菌进行琼脂稀释法药敏试验、改良三维试验法和聚合酶链反应克隆测序. 结果 12株阴沟肠杆菌对多种抗生素耐药,改良三维试验法证实同时产生AmpC酶和ESBLs;其中,9株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为SHV-2、SHV-12、CTX-M-3和CTX-M-14型ESBLs;对另外3株进行粗酶等电点测定发现,存在7.89和8.0等电点条带,并被克拉维酸抑制;12株细菌ampD和ampC基因PCR扩增均呈阳性,将6株耐药菌进行ampD基因的克隆测序发现均存在羧基端可疑的突变位点. 结论 12株多重耐药的阴沟肠杆菌同时产生≥1种的ESBLs及高产AmpC酶.     

医院感染现患率调查分析

目的 了解医院感染现状,为改进现患率调查方法提供依据。方法 对2012年11月2日住院的1 224例患者进行医院感染现患率调查,并与2008年现患率调查进行比较,对调查方法进行质量改进分析。结果 全院实查1 204例,实查率98.37%,其中发生医院感染95例,现患率7.89%,较2008年医院感染现患率6.24%有所上升;抗菌药物使用率由2008年的53.35%降低至2012年的38.21%,微生物标本送检率由49.04%升高至72.02%,且抗菌药物使用率和微生物标本送检率的改变差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 通过比较分析2008年与2012年现患率调查结果及方法,提出对2013年现患率调查的改进方法。     

16S rRNA甲基化酶基因在鲍曼不动杆菌中的分布

目的调查国内6个省市25家医院临床分离鲍曼不动杆菌中介导高水平氨基糖苷类抗生素耐药的16SrRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB的分布情况。方法收集2004年12月-2005年12月国内6省市8家省级医院、浙江省11个地区17家市级医院临床分离的700株鲍曼不动杆菌。琼脂稀释法测定其对妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、异帕米星、奈替米星5种氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度（MIC）值；PCR筛选三种甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB，克隆测序明确基因型；脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的同源性；质粒抽提、接合试验及Southern杂交确定armA基因定位。结果对妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、异帕米星、奈替米星的耐药率分别为67．7％、70．9％、75．7％、63．5％和71．5％。对5种氨基糖苷类抗生素全部耐药的菌株有377株，其中334株检出armA基因；未发现rmtA、rmtB阳性菌株。armA基因阳性菌株PFGE分型以A、B、C为主。碱裂解法反复抽提未得到质粒，多次接合试验未成功；Southern杂交显示，armA基因分别位于克隆A、B、c菌株染色体ApaⅠ酶切PFGE约220、300、220kb大小的PFGE片段上。结论16SrRNA甲基化酶基因armA在鲍曼不动杆菌中广泛存在，armA基因位于鲍曼不动杆菌的染色体上。     

中国部分地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶基因型研究

目的了解中国产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型分布。方法收集北京、浙江、新疆及郑州等共400株临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，采用接合试验，聚合酶链反应，克隆测序等方法明确ESBLs基因型。结果400株细菌中356株细菌ESBLs的基因型明确。其中328株细菌产1种ESBLs，主要为CTX-M型，包括CTX-M-14型ESBLs占52．25％，CTX-M-3型占14、25％，CTX-M-24型占7．25％，CTX-M-22型占2％，CTX-M-28和CTX-M-9型分别占0．75％，CTX-M-13、CTX-M-27和CTX-M-29型各占0．25％；其次为SHV型，其中SHV-12占2．5％(10／400)，SHV-5占1．00％，SHV-2占0．5％。28株细菌同时携带2种或3种ESBLs，占7．00％(28／400)，其中以同时产CTX-M-14和CTX-M-3最常见。结论中国产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型以CTX-M-14型为主；其次为CTX-M-3型，部分菌株同时产两种及两种以上ESBLs。     

溶血葡萄球菌对抗菌药物的敏感性和mecA基因的检测

目的　了解溶血葡萄球菌的耐药情况 ,以指导临床合理用药。方法　对 133株临床分离的溶血葡萄球菌采用微量肉汤稀释法测定 16种抗菌药物的最低抑菌浓度 (MIC) ,多聚酶链反应 (PCR)法检测mecA基因 ,并与普通药敏试验比较 ,对不相符的菌株进行抑制、诱导试验。结果　 133株溶血葡萄球菌对利奈唑胺、万古霉素、去甲万古霉素无耐药 ,对替考拉宁的耐药率为 6 .0 % ;对阿米卡星、异帕米星、米诺环素、利福平、氟氧头孢的耐药性较低 ,耐药率 <2 0 % ;对青霉素、苯唑西林的耐药率 >90 %。除米诺环素、青霉素外 ,住院患者分离菌株的耐药率高于门诊患者分离的菌株。mecA基因阳性率为 90 .2 3% ,且PCR产物经克隆测序证实为mecA特异性产物。对 2株mecA基因阳性而苯唑西林MIC≤ 0 .2 5 μg/ml的菌株进行诱导试验后其MIC≥ 0 .5 μg/ml;对 3株mecA基因阴性而MIC≥ 0 .5 μg/ml的菌株进行抑制试验后其MIC值下降 8倍以上。 结论　溶血葡萄球菌对大多数抗菌药物均有较高的耐药性 ,对糖肽类抗生素的敏感性也在下降 ,需引起临床重视。     

中国部分地区铜绿假单胞菌耐药性及主要β内酰胺酶基因型分布

目的 了解中国各地区铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况及其主要β内酰胺酶基因型的分布.方法 收集中国16个城市28家医院2006年7月至2007年7月临床分离的铜绿假单胞菌645株.采用Etest法或Kirby-Bauer纸片扩散法测定其对11种常用抗菌药物的敏感性,应用PCR扩增及序列分析确定所有菌株TEM、SHV、CTX-M、OXA等β内酰胺酶的基因型.统计学处理采用SPSS 11.0软件.结果 645株铜绿假单胞菌对11种抗菌药物的耐药率高,仅对阿米卡星及美罗培南的耐药率＜30%.其中对亚胺培南和(或)美罗培南不敏感的菌株为275株,占42.64%,多重耐药铜绿假单胞菌368株,占57.05%,对所检测抗菌药物全部耐药的铜绿假单胞菌菌株为20株,占3.10%.从基因型分布情况来看,阳性率最高的为OXA-10群共51株,其次CARB型37株,TEM型36株,PER型35株,CTX-M型11株,VEB型9株,SHV型5株,金属酶基因型阳性的24株,GES基因型1株,未检测到质粒介导的AmpC酶及其他碳青霉烯酶基因型.并在铜绿假单胞菌中发现了CTX-M-13、CTX-M-14、CTX-M-15、CTX-M-3基因型的超广谱β内酰胺酶基因.结论 中国28家医院临床分离的铜绿假单胞菌耐药情况比较严重.β内酰胺酶基因型以OXA-10及PSE-1为主.在对碳青霉烯类抗菌药物不敏感的或敏感的铜绿假单胞菌中,β内酰胺酶基因型分布也有所不同.     

Drug-resistance mechanisms and prevalence of Enterobacter cloacae resistant to multi-antibiotics

The main drug-resistance mechanism of gram-negativebacteria is producing β-1actamases. Two kinds of enzymes cause drug resistance bycephalosporinsencoded AmpCand aztreonam : β-1actamases,hydrolyzing oxyimino-one is chromosomally encoded AmpC β-lactamases,     

拉曼光谱在微生物研究中的应用

微生物研究依赖于微生物分离和鉴定,传统技术是以培养作为金标准,但是存在耗费时间、影响因素多、培养失败等情况。拉曼光谱能够快速、准确、无损伤的鉴定目标微生物,结合单细胞分离技术还能获得单细胞菌株,进行后续培养、单细胞分析等。虽然还存在一些难题未解决,但拉曼光谱技术已经展现出了革命性的潜力。本综述整理了拉曼光谱的原理、分类、优缺点、目前的科研应用及新进展等。