基因工程重组耻垢分枝杆菌研究进展

耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)是一种在自然界中普遍存在的非致病性分枝杆菌。随着基因工程技术的发展,选择MS作为载体已在细菌、病毒、肿瘤和寄生虫等领域得到广泛应用,本文就基因工程重组MS的构建及免疫效果的研究进展作一综述。     

细粒棘球绦虫Eg95基因工程疫苗研究进展

细粒棘球蚴病(echinococcosis)是由细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)的中绦期幼虫寄生在人体肝、肺等脏器引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病.手术及药物治疗都因其局限性而受到限制,有保护作用的疫苗将成为控制该病流行的有效工具.目前最为成功的棘球蚴病疫苗为Eg95疫苗,作者综述了细粒棘球绦虫Eg95基因工程疫苗的研究进展.     

重组双歧杆菌研究进展

双歧杆菌是人和动物肠道内重要的益生菌。近年来,随着基因工程技术的发展,选择具有益生功能的双歧杆菌作为载体传递系统,在细菌、病毒、肿瘤、寄生虫等领域构建了一系列重组双歧杆菌,具有广泛的应用前景。     

人体寄生虫学教学改革

随着高校学生的扩招和寄生虫学课时数的减少,近年来,授课教师在人体寄生虫学教学中,就如何保证教学质量,从提高教师素质,优化教学内容,开展多媒体教学,充分利用网络资源,充分调动学生学习的积极性,改革新的实验教学模式和考试方式等方面进行了改革,取得了良好的教学效果.     

猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌疫苗的稳定性分析

目的 研究猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)疫苗的人工传代稳定性。方法 将重组质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18电转入L.lactis,经PCR鉴定阳性菌株pMG36e-TSOL18/L.lactis、pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis,在无红霉素抗性和含红霉素抗性条件下,连续人工传代20次,通过测定质粒遗传稳定率和双酶切鉴定,分析质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中的稳定性情况。结果 质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中连续传代20代后,在无红霉素抗性条件下,质粒稳定率均为100%,在含红霉素抗性条件下,质粒稳定率均为99%。将各代次的质粒采用限制性内切酶SacI/HindIII进行双酶切鉴定,琼脂糖凝胶电泳显示大小正确,连续传至20代时,与原代质粒相符。结论 提示质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中连续传代20代时,均有较好的遗传稳定性,为猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌疫苗的进一步研究奠定了基础。     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗构建及鉴定

目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,定向克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,抽提质粒进行双酶切鉴定,电穿孔法转化两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb),构建细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT-PCR扩增出约1 016bp的Eg95-EgA31融合基因;重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小片段,以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到约1016bp的Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,为该疫苗的开发利用奠定了实验基础。     

黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠TNF-α和sICAM-1的调节作用

目的 研究黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）和可溶性细胞黏附分子1（sICAM-1）的调节作用。 方法 49只SD大鼠随机均分7组,分别为正常对照组（A组）、免疫抑制对照组（B组）、有效药物对照组（C组)、黄芩苷预防组（D组）、黄芩苷低（E组）、中（F组）和高剂量治疗组（G组）。A组不做任何处理,其他各组均于腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠（每次3.5 mg/只,每周2次,连续注射6周),诱导其免疫抑制建立大鼠卡氏肺孢子虫感染动物模型。D组注射地塞米松磷酸钠3周后,灌胃黄芩苷100 mg/(kg?d)连续5周。C、E、F和G组于连续注射地塞米松磷酸钠6周后给药,其中C组灌胃磺胺甲基异恶唑（SMZ）250 mg/(kg?d)和甲氧苄胺嘧啶（TMP） 50 mg/(kg?d),连续2周; E、F和G组分别灌胃黄芩苷100、200和400 mg/(kg?d),均连续2周。B组不给药。各组大鼠均于第8周末摘眼球取血、分离血清,用放射免疫分析法检测TNF-α含量,ELISA法检测sICAM-1含量。同时剖杀大鼠取肺组织制作印片（六胺银染色）和病理切片（HE染色）,观察其病理学变化。 结果 大鼠血清TNF-α含量,黄芩苷预防组［（2．14±0.14） ng/ml］及低［（2.57±0.15） ng/ml］、 中［（1.46±0.14） ng/ml］和高［（1.12±0.13） ng/ml］剂量治疗组均高于正常对照组［（0.70±0.21） ng/ml］（P<0.05）, 低于免疫抑制对照组［（3.65±0.73） ng/ml］（P<0.01）。有效药物对照组［（1.59±0.14） ng/ml］明显高于正常对照组（P<0.01）, 低于免疫抑制对照组（P<0.01）。血清sICAM-1含量, 黄芩苷预防组［（618.68±52.42） pg/ml］及低［（814.29±61.11） pg/ml］、 中［（498.08±32.56） pg/ml］、 高［（377.06±56.56） pg/ml］剂量治疗组均低于免疫抑制对照组［（1 247.39±288.57） pg/ml］（P<0.05）,有效药物对照组［（386.95±44.98） pg/ml］低于免疫抑制对照组（P<0.01）。黄芩苷各治疗组肺组织炎症较免疫抑制对照组明显减轻,肺间质炎性细胞浸润及肺泡腔泡沫样渗出物均明显减少。 结论 黄芩苷能降低PCP大鼠血清TNF-α和sICAM-1含量,减轻肺部炎性反应。     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合蛋白诱导小鼠免疫应答

目的研究细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合蛋白免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法 56只SPF级雌性Balb/c小鼠随机均分7组,分别为重组Bb-Eg95-EgA31皮下注射组(A组)、肌肉注射组(B组)、鼻腔内接种组(C组)、口服灌胃组(D组)、空载体对照组(E组)、Bb对照组(F组)和Bb培养用液体培养基(MRS)对照组(G组)。免疫后8周各组鼠用50个Eg原头节攻击,攻击25周后,处死小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE和脾细胞上清液IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平;MTT法测定脾细胞增殖反应;流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T细胞百分比和脾细胞凋亡发生率。结果重组Bb-Eg95-EgA31免疫组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgG1水平升高,IgG3和IgE降低;脾IFN-γ、IL-12和TNF-α水平升高,IL-10水平降低;脾T淋巴细胞明显增殖;脾CD4+和CD8+T细胞显著增加;脾细胞凋亡发生率显著降低。结论细粒棘...     

细粒棘球绦虫重组Bb—Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞增殖变化的研究

目的探讨细粒棘球绦虫（Eg）重组双歧杆菌（Bb）-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞增殖的变化。方法将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB／c小鼠,免疫后8周每鼠用50个Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原（EgAg）或刀豆素A（ConA）刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测免疫小鼠脾细胞增殖反应,同时设有空载体、Bb和MRS对照。结果以上4种疫苗接种组小鼠的囊重抑制率分别为45．33％、41．33％、70．67％和62．67％;疫苗接种组的脾细胞明显增殖;鼻腔内接种和口服免疫组的脾细胞增殖显著高于皮下和肌肉注射组。结论细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生特异性的细胞免疫反应。     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞增殖变化的研究

目的 探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞增殖的变化.方法 将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后8周每鼠用50个Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原(EgAg)或刀豆素A(ConA)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠脾细胞增殖反应,同时设有空载体、Bb和MRS对照.结果 以上4种疫苗接种组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;疫苗接种组的脾细胞明显增殖:鼻腔内接种和口服免疫组的脾细胞增殖显著高于皮下和肌肉注射组.结论 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生特异性的细胞免疫反应.