小鼠睾丸组织移植物二次移植后的生长发育研究

目的 通过将第一次移植后的移植物进行再移植,探讨二次移植的睾丸组织生长发育情况,为今后采用睾丸组织裸鼠移植模型探讨性成熟期较长动物(包括人类)睾丸组织的体外成熟提供实验依据.方法 将1～2 d龄昆明小鼠睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后2周取出移植物,并将其立即移植到另一只去势裸鼠背部,并在二次移植4周后取出移植物,制作HE染色切片,在光镜下观察二次移植后睾丸组织的生长发育情况;同时采用检测鱼精蛋白-2 mRNA的方法对二次移植物的生长发育程度进行鉴定.结果 移植2周后的小鼠睾丸组织再次移植后,仍可观察到移植物中的血管组织再生以及生精小管的继续发育;二次植入的44块组织经4周生长发育后收集到22个二次移植物,回收率为50%;在仅含有精原细胞和精母细胞的移植物二次移植后收集到的移植物中,观察到了圆形精子细胞甚至长形精子细胞,并在所有的二次移植物中检测到鱼精蛋白-2 mRNA的表达.结论 新生小鼠睾丸组织移植物转移到另一只受体中后可继续存活并生长发育.     

新型冠状病毒肺炎（COVID-19）热灭活咽拭子及热灭活后提取核酸样本在 4℃保存的稳定性研究

目的　研究 56℃ 30 min 热灭活后的新型冠状病毒肺炎 (COVID-19) 咽拭子及提取的核酸在 4℃保存的稳定性。方法　采用多重荧光定量 PCR 方法对一例 COVID-19 患者的咽拭子样本，56℃ 30 min 热灭活后进行 COVID-19 双靶点(ORF1ab 和 N 基因 ) 核酸检测，把原始咽拭子样本及提取的核酸保存在 4℃，分别于 24，48，72 和 96h 再次检测咽拭子样本及提取核酸中新冠病毒核酸的含量（Ct 值），分析热灭活后咽拭子样本及提取核酸在 4℃保存的稳定性。结果COVID-19 患者的咽拭子样本，56℃ 30 min 热灭活后核酸检测结果为 ORF1ab 和 N 基因双阳性，Ct 值分别为 31.27 和30.64，咽拭子样本 4℃保存 24，48，72 和 96h 后再次检测 ORF1ab 和 N 基因的结果为 24h (31.41 和 30.68)，48h (34.13和 34.28)，72h (34.06 和 34.11) 和 96h (36.22 和 40.02)。 提取的核酸 4℃保存 24，48，72 和 96h 后的检测结果为 24h (31.64和 30.06)，48h (31.62 和 29.95)，72h (31.72 和 29.75) 和 96h (31.36 和 30.09)。56℃ 30 min 热灭活的咽拭子样本在 4℃保存 24h 后，对 COVID-19 核酸的检测无明显影响 ( 偏倚 <1%)，但 4℃保存 48~72h，ORF1ab 基因核酸降解约 7 倍，N 基因降解约 11 倍，4℃保存 96h, ORF1ab 和 N 基因核酸分别降解 30.91 倍和 666.29 倍。但是提取的核酸 4℃保存 24~96h 后，对核酸的检测结果无明显影响 ( 偏倚均小于 3%)。结论　研究结果表明 56℃ 30 min 热灭活后提取的核酸的稳定性比原始咽拭子样本好，热灭活后的咽拭子样本可在 4℃保存 24h。     

荧光定量PCR检测5种常见性传播疾病DNA结果分析

目的了解我院2009年-2010年2年来5种常见性传播疾病(STD)的感染情况,以期对性病患者的治疗有指导意义。方法应用实时荧光定量PCR技术对我院两年来有可疑性传播疾病病例3457例患者进行5种最常见的性传播疾病病原体—淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、单纯疮疹病毒Ⅱ型和人乳头状病毒进行检测,并进行统计分析。结果人乳头状病毒、解脲支原体和单纯疮疹病毒Ⅱ型阳性率较高,淋球菌、沙眼衣原体阳性率较低。淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、单纯疮疹病毒Ⅱ型和人乳头状病毒阳性率分别为1.66%、2.90%、43.3%、37.2%、60.4%。结论性传播疾病仍处于高发阶段,性病患者为病毒病原体者较难治愈,为细菌病原体者较易治愈,此结果应引起医务工作者的高度重视,同时加强青年人群的健康教育及行为干预是控制性传播疾病蔓延的重点。     

溶血对检测不同含量乙肝病毒DNA干扰作用的研究

目的 研究不同程度的溶血对荧光定量PCR检测不同含量的HBV DNA的干扰作用.方法 采用PEG沉淀法和直接煮沸法提取血清中HBV DNA,用荧光定量PCR方法研究不同程度的溶血对检测不同含量HBV DNA的干扰作用.结果 采用沉淀法提取HBV DNA,重度溶血明显抑制低拷贝组至高拷贝组HBV DNA的扩增;中度溶血使低拷贝组至中拷贝组的HBV DNA含量明显降低;轻度溶血降低了低拷贝组的HBV DNA含量.采用直接煮沸法提取HBV DNA,重度及中度溶血均明显抑制低拷贝组至高拷贝组HBV DNA的扩增;对低拷贝103组的抑制最显著,完全抑制其HBV DNA的扩增.轻度溶血使低拷贝组至中拷贝组的HBV DNA含量明显下降.结论 重度溶血对低拷贝组到高拷贝组的HBV DNA 的荧光定量检测均有明显的抑制作用,对于重度溶血标本,临床应重新留样检测HBV DNA,轻度溶血主要影响低拷贝组HBV DNA的检测结果,对低拷贝的轻度溶血样本,临床应重新留样检测,对高拷贝的轻度溶血样本,可以不重新留样.溶血对直接煮沸法的影响比沉淀法更大.     

多重等位基因特异性PCR-熔解曲线分析快速定型β珠蛋白基因突变

目的建立自动化、高通量、准确快速检测β珠蛋白基因突变的技术。方法在反应体系中加入新型荧光染料LC Green进行实时荧光聚合酶链反应,反应结束后,以0.1℃/s变化速度从60℃至95℃每隔3 s记录一次荧光值,获得熔解曲线,根据得到的熔解曲线和Tm值分析定型β地中海贫血的CD41-42、IVS 2nt654、CD17、CD71-72四种等位基因突变。结果根据Tm值能准确判断基因型,检测CD41-42、IVS 2nt654、CD17、CD71-72四种等位基因的Tm值分别为78±1℃、80±1℃、76±1℃、79±1℃。结论该技术具有自动化程度高、不需荧光标记探针、成本低、易质控、防污染、高通量等优点,适于临床推广应用。     

糖尿病患者血清超敏C反应蛋白、白细胞介素-6及白细胞介素-10的变化

目的:研究血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)在糖尿病患者中的变化,及其对心血管并发症的预示作用.方法:收集99例糖尿病患者血清,其中胆固醇正常者68例,胆固醇升高者31例,及50例正常体检人员的血清.使用乳胶增强免疫透射比浊法检测hs-CRP,一步酶法检测胆固醇,同时采用ELISA双抗体夹心法测定血清IL-6、IL-10.结果:正常对照组血清hs-CRP、IL-6和IL-10浓度分别为(1.66±0.95)mg/L、(24±8)ng/L和(27±7)ng/L,胆固醇正常糖尿病组血清hs-CRP、IL-6和IL-10浓度分别为(2.77±1.19)mg/L、(25±10)ng/L和(28±8)ng/L,胆固醇升高糖尿病组血清hs-CRP、IL-6和IL-10浓度分别为(5.70±1.81)mg/L、(34±10)ng/L和(21±5)ng/L.与正常对照组、胆固醇正常糖尿病组相比,胆固醇升高糖尿病组hs-CRP、IL-6和IL-10表达水平差异均有统计学意义(分别为P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05).与正常对照组比较,胆固醇正常糖尿病组hs-CRP高表达(P＜0.05),而这两组间IL-6和IL-10表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论:炎症因子hs-CRP在预测糖尿病患者并发冠心病中具有重要的临床意义.     

两种荧光定量PCR 仪检测HBV、HCV核酸结果的一致性

目的 探讨不同荧光定量PCR仪检测肝炎病毒 DNA 及RNA结果的一致性。 方法 参照美国NCCLS EP9-A2文件,以MJ Opticon 2为参比仪器,ABI 7300为实验仪器,检测HBV DNA 及 HCV RNA,分析结果的相关性及预期偏倚,评价两种仪器检测结果的一致性。 结果 MJ Opticon 2 及ABI 7300检测HBV DNA 及 HCV RNA具有良好的相关性 （rHBV=0.995;rHCV=0.993）,预期偏差在可接受范围内。 结论 MJ Opticon 2 及ABI 7300检测结果具有较好的一致性,可用于同时检测HBV DNA或HCV DNA。     

骨髓增生异常综合征的细胞遗传学研究

骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndrome,MDS)是一组获得性的、造血功能严重紊乱的、造血干细胞的恶性克隆性疾病。这种异常的干细胞克隆以失调和低效的方式分化成熟,导致外周血细胞数量减少、功能及形态异常,最终可丧失分化成熟能力演变成急性白血病[1],目前其病因及发病     

481例珠蛋白生成障碍性贫血疑似患者基因突变类型分析

目的 了解珠蛋白生成障碍性贫血(THal)疑似患者中α-THal与β-THal基因型分布情况.方法 采用单管多重gapPCR技术检测3种常见的缺失型α-THal基因,PCR结合反向点杂交法检测β珠蛋白基因17个突变位点.结果 481例疑似患者中,α-THal检出率为29.5%(142/481),--SEA /αα型α-THal基因总检出率最高,为22.7%(109/481);β-THal 检出率为23.9%(115/481),CD41-42、IVS 2nt654、CD17、-28型β-THal基因检出率依次为7.5%、5.0%、4.2%、2.5%;检出3例αβ复合型THal.结论 该地区THal疑似患者中α和β-THal检出率较高;基因诊断能够为遗传咨询、临床治疗和婚育指导提供有价值的基础资料,对优生优育、干预重型THal患儿的出生具有重要意义.     

血清降钙素原与c反应蛋白联合检测在新生儿感染性疾病中的应用

目的：对血清降钙素原与c反应蛋白联合检测在新生儿感染性疾病中的应用进行探讨。方法：选择2009至2011年入院的90例细菌性感染的新生儿,其中男48例,女42例,体重在2650至3740g左右,日龄为2～14d,胎龄在（38＋2）～（39＋5）w左右,并分为重症感染组48例和局部感染组42例。另外选取45例没有任何感染依据的新生儿作为非感染组。检测重症感染组、局部感染组和非感染组患儿血清PCT、CRP的含量及动态变化。结果：42例局部感染组患者血清CRP、PCT浓度平均值分别为（22．5±9．6）mg/L和（5．25±2．55）ng／mL;48例重症感染组患者血清CRP、PCT浓度平均值分别为（36．45±13．35）mg／L和（37．95±15．4）5ng／mL;与45例非感染组患者进行比较,差异有统计学意义（P〈0．001）。经过医护人员对于患者进行行之有效的抗菌治疗后,42例局部感染组患者和;48例重症感染组（共计90例患者）的血清CRP、PCT浓度平均值与治疗前相比,呈现明显下降的趋势,差异有统计学意义（P〈0．001）;PCT的特异性（83％）高于CRP（63．3％）,PCT的敏感性和CRP相似（93．3％）。结论：临床上在对患儿使用抗生素的时候,务必要以PCT水平高低作为动态检测的指标。