表皮生长因子对人子宫颈癌细胞形态及噻唑蓝还原的影响

表皮生长因子(EGF)10μg/L作用于人子宫颈癌(Hela)细胞,24h、48h未见细胞数量改变,第5d时可观察到细胞由原来的呈椭圆形克隆样生长变为有树突样胞质突出的长梭状较均匀地分布生长:EGF作用下,Hela细胞噻唑蓝还原呈剂量依赖性增加.提示EGF不能促进Hela细胞增殖,但可引起细胞形态改变及线粒体脱氢酶活性增高,这可能与EGF促分化作用有关.     

谷胱甘肽对顺铂致猴和大鼠肾细胞毒性的影响

目的 探讨顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞的毒性及半胱氨酸和GSH合成抑制剂BSO对其影响。方法 从猴和大鼠的肾脏分离培养的肾小管上皮细胞接种于96孔培养板，培养24h后加入一系列浓度的顺铂，或在加入顺铂前16和4h，分别加入GSH合成抑制剂BSO和GSH的前体物半胱氨酸，继续培养，分别在8、24和48h3个时间点用MTT方法检测细胞存活率。结果 顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞有明显的毒性，在不同的时间点有各自的剂量—反应关系，顺铂对大鼠肾小管上皮细胞在8、24和48h 3个时间点半数抑制浓度(IC50)分别为1105．12、513．25和71．24μmol/L；BSO能使3组IC50均降低，分别为66．00、21．43和7．23μmol/L，而半胱氨酸则使3组IC50均升高，均大于5000μmol/L；顺铂对猴肾小管上皮细胞在3个时间点IC50分别为3026．00、1238．35和664．44μmol/L；BS0使3组ICD分别降为480．10、108．61和31．43μmol/L，而半胱氨酸则可使3组IC50均大于5000μmol/L。结论 顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞均具有明显毒性作用，对猴的毒性低于大鼠；BS0可增强顺铂的细胞毒性，对大鼠的影响大于猴，而半胱氨酸对两种细胞的保护作用无显著性差异，提示细胞内GSH对顺铂所致肾小管上皮细胞毒性有保护作用。     

不同恶性行为卵巢癌细胞系DPP IV基因的表达

目的探讨二肽肽酶IV(D PP IV)基因在卵巢癌细胞系中的表达并分析其与卵巢癌细胞恶性行为的关系。方法利用细胞增殖、粘附、侵袭和迁移能力试验鉴定A2780、SKO V-3、H O-8910、H O-8910PM卵巢癌细胞系的恶性行为差异;应用酶活性测定、流式细胞和半定量R T-PCR技术检测DPP IV基因在A2780、SK OV-3、H O-8910和H O-8910PM细胞系中的表达并分析它与卵巢癌细胞恶性行为的关系。结果4种卵巢癌细胞的增殖、粘附、侵袭和迁移能力由高到低依次为:H O-8910PM、H O-8910、SK OV-3、A2780细胞系。DPP IV基因在A2780、SK OV-3、H O-8910和H O-8910PM细胞系中m R NA转录水平分别为0.7512±0.0012、0.5596±0.0015、0.3369±0.0009和0.2777±0.0006;酶活性分别为0.79±0.02、0.64±0.03、0.21±0.02和0.18±0.01;流式细胞术测定D PP IV基因蛋白表达水平分别为657.83±1.14、538.53±5.29、130.50±1.46和33.14±0.47。卵巢癌细胞的粘附、侵袭和迁移能力与D PP IV基因的m R NA转录水平相关系数分别为:-0.987、-0.983和-0.991;与蛋白表达水平相关系数分别为:-0.959、-0.988和-0.968;与酶活性相关系数分别为:-0.952、-0.868和-0.983。结论D PP IV基因的m RN A转录、蛋白表达水平以及酶活性与卵巢癌细胞系的粘附、迁移和侵     

DPP Ⅳ基因影响卵巢癌细胞生物学行为的机制探讨

目的探讨DPPⅣ基因高表达对卵巢癌细胞系恶性行为的影响及其机制。方法应用体外增殖能力、黏附和侵袭试验检验HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP Ⅳ细胞恶性行为差异;利用流式细胞技术、吖啶橙染色、DNA ladder、透射电镜以及Western blot检测Fas/Bcl-2基因蛋白表达水平,探讨HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP Ⅳ细胞中凋亡状况。结果 DPPⅣ基因高表达可显著抑制卵巢癌细胞的增殖、黏附和侵袭能力;同时HODPP Ⅳ细胞的凋亡率、Fas基因蛋白表达水平明显高于HOPcDNA和HO-8910PM细胞(P<0.05);HO-8910PM和HOPcDNA细胞的Bcl-2基因蛋白表达水平明显高于HODPP Ⅳ细胞(P<0.05)。结论 DPPⅣ基因高表达可抑制卵巢癌细胞的恶性行为;凋亡可能是DPPⅣ基因发挥生物学作用机制之一。     

肾脏谷胱甘肽代谢系统及其毒理学意义

谷胱甘肽 (GSH)主要在肝脏合成 ,经肠肝和肾肝循环运送到肾脏 ,经肾小球滤过后 ,可被位于肾小管细胞刷状缘的降解酶水解为氨基酸 ,重吸收后再合成GSH ,但主要是在肾小管细胞基底膜侧经载体介导以完整的三肽形式吸收。在细胞内有两个重要的GSH池 ,一个是细胞浆 ,一个是线粒体 ,线粒体不能合成GSH ,细胞浆GSH通过线粒体内膜的有机阴离子载体转运到线粒体内 ,在保护细胞免受氧化损伤中起重要作用。肾近曲小管细胞和远曲小管细胞对氧化损伤的敏感性不同 ,与细胞内GSH的含量不同和线粒体内膜的阴离子载体对GSH的转运能力的不同有关。GSH代谢系统具有解毒和活化的双重毒理学意义     

CD26/DPP Ⅳ基因表达对卵巢癌移植瘤生物行为的影响

目的 探讨CD26/DPP Ⅳ基因过表达在体内、体外对卵巢癌细胞株恶性表型的影响.方法 将重组的PcDAN3.1(+)-CD26/DPP Ⅳ基因和空载体PcDAN3.1(+)采用阳离子脂质体转染HO-8910PM母系细胞,通过G418筛选获得稳定表达CD26/DPP Ⅳ基凶的HODPP Ⅳ细胞株和转染空载体的HOPcDNA细胞株,经RT-PCR和Western blot鉴定CD26/DPP Ⅳ基因表达.利用增殖曲线、黏附、侵袭和移动试验在体外进行三种细胞恶性行为比较;同时将包括母系HO-8910PM细胞在内的三种细胞株注射于裸鼠皮下研究它们在体内皮下成瘤性和远处转移能力的差异.结果 建立了稳定表达CD26/DPP Ⅳ基因的细胞株HODPP Ⅳ.HODPP Ⅳ细胞株在体外的增殖速度、侵袭能力、迁移能力、黏附能力、皮下移植瘤体积和淋巴结转移率低于HO-8910PM和HOPcDNA细胞株(P均<0.05).结论 CD26/DPP Ⅳ基因过表达抑制卵巢癌细胞体内、体外生长和远处转移,有望成为治疗卵巢癌的一种新手段.     

顺铂对大鼠肝细胞毒性及谷胱甘肽的保护作用

目的探讨顺铂对原代培养的大鼠肝细胞的毒性及谷胱甘肽对其影响.方法从大鼠的肝脏分离培养肝实质细胞接种于96孔培养板,培养3h后加入一系列浓度的顺铂,或在加入顺铂前16和4h,分别加入谷胱甘肽(glutathione,GSH)合成抑制剂DL-buthionine-(S,R)-sulfoximine(BSO)和GSH的前体物半胱氨酸,继续培养,分别在8,24和48 h 3个时间点用噻唑蓝(MTT)方法检测细胞存活率.结果顺铂对大鼠肝细胞有明显的毒性,在不同的时间点有各自的剂量-反应关系,顺铂对大鼠肝细胞在8,24和48 h 3个时间点半数抑制浓度(IC50)分别为1.13,0.21和0.15 mmol/L;BSO能使3组IC50均降低,分别为0.017,0.011和0.013 mmol/L,而半胱氨酸则可使3组IC50均升高,均大于5mmol/L.结论顺铂对大鼠肝细胞具有明显的毒性作用,且呈时间和剂量依赖关系;BSO可增强顺铂的肝细胞毒性,而半胱氨酸对顺铂引起的肝细胞毒性有保护作用,提示细胞内GSH对顺铂所致肝细胞毒性有保护作用.     

姜黄素与氟尿嘧啶抗人结肠癌细胞株HT-29增殖的协调作用研究

目的:检测姜黄素能否增强氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)抗结肠癌细胞的增殖作用,并探讨其与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的关系。方法:应用中位效应原理和联合作用指数法来定量姜黄素与FU的联合作用。应用Westernblot分析联合应用两种药物之后对于COX-2蛋白表达的影响。结果:姜黄素和FU的半数生长抑制率(IC50)分别为15.9±1.96和17.3±1.85μmol/L。当姜黄素与FU联合应用时,在较高的作用水平可以定量地观察到对HT-29细胞的协同抑制作用。并且这种协同作用随COX-2蛋白表达水平下调。结论:姜黄素可以增强FU的化学治疗效果,在结肠癌的临床治疗方面联合应用这两种药物可能具有实际意义。     

维生素E琥珀酸酯体外防护顺铂肝细胞毒性并增强其抗肿瘤细胞增殖活性

目的　研究维生素E琥珀酸酯 (VES)对顺铂(CP)肝细胞毒性及联合用药增强抗肿瘤活性的可能。方法　用二步灌流法分离人和大鼠肝细胞 ,接种于胶原铺被的 96孔板 ,细胞贴壁后 ,分别加入一系列浓度的CP ,VES及CP +VES ,于 4 8h用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率 ,并计算半数抑制浓度 (IC50 ) ;同样方法用于检测CP ,VES及CP +VES对人前列腺癌细胞系DU 14 5和人大肠癌细胞系CCL2 2 9的抗增殖作用。结果　CP ,VES ,CP +VES 1mg·L- 1,CP +VES 5mg·L- 1,CP +VES 10mg·L- 1对人肝细胞的IC50 分别为 2 .35 ,>10 0 ,2 .2 6 ,4 .2 5 ,6 .93mg·L- 1;CP ,VES ,CP +VES 5mg·L- 1,CP +VES 10mg·L- 1,CP +VES 2 5mg·L- 1对大鼠肝细胞的IC50 分别为 4 .70 ,>10 0 ,10 .94 ,17.5 7,2 3.2 4mg·L- 1;CP ,VES ,CP +VES 5mg·L- 1,CP +VES 10mg·L- 1,CP +VES 2 5mg·L- 1对DU 14 5和CCL2 2 9的IC50 分别为6 .36 ,5 5 .36 ,5 .0 4 ,4 .85 ,0 .5 8和 9.5 8,39.4 7,7.2 9,4 .2 2 ,2 .4 3mg·L- 1。结论　VES能明显减低CP所致人和大鼠肝细胞毒性 ,增强CP对DU 14 5和CCL2 2 9细胞的抗增殖作用