不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生长增殖及生物学特性的影响

背景：目前用于分离骨髓间充质干细胞的方法主要有全骨髓贴壁法、密度梯度离心法、流式细胞仪分离法、免疫磁珠法，后两种方法可获得较为纯化的骨髓间充质干细胞，但对细胞活性影响较大，甚至导致细胞完全失去活性。 目的：观察不同分离方法、培养条件下，兔骨髓间充质干细胞生长增殖及生物学特性的变化。 设计、时间及地点：细胞学体外对比观察，于2006-01/2007-06在中国医科大学附属盛京医院感染病实验室完成。 材料：日本雄性大耳白兔3只，由中国医科大学实验动物中心提供。Mesen Cult干细胞培养基为Vancouver BC公司产品，DMEM/F12（1∶1）培养基、LG-DMEM培养基均为Hyclone公司产品。 方法：无菌抽取兔髂前上棘骨髓，采取两种方法分离骨髓间充质干细胞。全骨髓贴壁分离法是将骨髓液注入等体积的Hanks液中，4 ℃ 1 000 r/min离心5 min，弃上清，用Hanks液重复洗涤。Percoll密度梯度分离法是将相当于2倍骨髓液体积的1.073 g/mL Percoll分离液加入15 mL无菌离心管内，再将抗凝的骨髓沿管壁缓慢加至分离液面上，4 ℃ 800 r/min离心 30 min，吸取分离液面上的白色云雾状单个核细胞层，用无血清L-DMEM培养液冲洗。将分离的骨髓间充质干细胞浓度调整为1×106，设立3组，分别加入Mesen Cult干细胞培养基、DMEM/F12培养基、L-DMEM培养基，各组培养基中均含有20%的胎牛血清、100 u/mL青霉素、100 u/mL链霉素，于37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养。 主要观察指标：不同分离方法、培养条件对细胞形态、生长特征、增殖的影响，细胞超微结构变化，传代后冻存复苏情况。 结果：全骨髓贴壁分离法1周后可见少许贴壁细胞伸出伪足，10~12 d形成散在细胞集落，16~18 d融合成单层；Percoll密 度梯度分离法培养1~2 d后可见部分细胞贴壁，5~7 d形成散在细胞集落，2周后融合成单层并铺满平底。不同培养条件下 的第3代骨髓间充质干细胞，Mesen Cult组细胞增殖能力、贴壁率、BrdU标记指数均略优于DMEM/F12组、LG-DMEM组，但差异无显著性意义（F=0.179，P > 0.05；F=0.098，P > 0.05；χ2=0.39，P > 0.05）。透射电镜下可见核仁，细胞器少，为低分化的幼稚细胞。复苏第9代冻存的细胞，4 h后贴壁率约60%，细胞增长活跃。 结论：Percoll密度梯度法和全骨髓贴壁法分离的兔骨髓间充质干细胞，前者可获得较均匀一致的单核细胞，在细胞增殖、清除造血细胞干扰等方面明显优于后者；Mesen Cult、DMEM/F12、LG-DMEM培养液均适用于兔骨髓间充质干细胞的培养；细胞冻存复苏后生长增殖状况良好。     

IMMUNOACTIVITY OF ANTIBACTERIAL IMMUNE-RNA AND ITS CLINICAL APPLICATION

Antibacterial immune-RNA preparations ex tracted from sheep immunized with Pscudomonas aeruginosa, Escherichia coli and Staphylococcus aureus are used to treat opportunistic infections caused by enterobacteria such as E. coli and Ps. aeruginosa. 22 patients with bacterial septicemia or pneumoni. tis caused by combined or secondary infection were treated. Most failed to respond to treatment with various antibiotics, but showed dramatic improvement after changing to antibacterial immune-RNA. In 27 severely burned patients (mean body sur- face burn area larger than 5%) treated by antibac terial immune-RNA, not a single case was com- plicated with septicemia or septicopyemia caused by opportunistic Gram negative bacteria,in contrast with the controls. The results show that antibacterial immune-RNA has sigmficant protective effect against bacterial infections.     

不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生长增殖及生物学特性的影响

背景:目前用于分离骨髓间充质干细胞的方法主要有全骨髓贴壁法、密度梯度离心法、流式细胞仪分离法、免疫磁珠法,后两种方法可获得较为纯化的骨髓间充质干细胞,但对细胞活性影响较大,甚至导致细胞完全失去活性.目的:观察不同分离方法、培养条件下,兔骨髓间充质干细胞生长增殖及生物学特性的变化. 设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2006-01/2007-06在中国医科大学附属盛京医院感染病实验室完成.材料:日本雄性大耳白兔3只,由中国医科大学实验动物中心提供.Mesen Cult干细胞培养基为Vancouver BC公司产品,DMEM/F12(1∶1)培养基、LG-DMEM培养基均为Hyclone公司产品.方法:无菌抽取兔髂前上棘骨髓,采取两种方法分离骨髓间充质干细胞.全骨髓贴壁分离法是将骨髓液注入等体积的Hanks液中,4 ℃ 1 000 r/min离心5 min,弃上清,用Hanks液重复洗涤.Percoll密度梯度分离法是将相当于2倍骨髓液体积的1.073 g/mL Percoll分离液加入15 mL无菌离心管内,再将抗凝的骨髓沿管壁缓慢加至分离液面上,4 ℃ 800 r/min离心 30 min,吸取分离液面上的白色云雾状单个核细胞层,用无血清L-DMEM培养液冲洗.将分离的骨髓间充质干细胞浓度调整为1×106,设立3组,分别加入Mesen Cult干细胞培养基、DMEM/F12培养基、L-DMEM培养基,各组培养基中均含有20%的胎牛血清、100 u/mL青霉素、100 u/mL链霉素,于37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养.主要观察指标:不同分离方法、培养条件对细胞形态、生长特征、增殖的影响,细胞超微结构变化,传代后冻存复苏情况.结果:全骨髓贴壁分离法1周后可见少许贴壁细胞伸出伪足,10～12 d形成散在细胞集落,16～18 d融合成单层;Percoll密度梯度分离法培养1～2 d后可见部分细胞贴壁,5～7 d形成散在细胞集落,2周后融合成单层并铺满平底.不同培养条件下的第3代骨髓间充质干细胞,Mesen Cult组细胞增殖能力、贴壁率、BrdU标记指数均略优于DMEM/F12组、LG-DMEM组,但差异无显著性意义(F=0.179,P > 0.05;F=0.098,P > 0.05;χ2=0.39,P > 0.05).透射电镜下可见核仁,细胞器少,为低分化的幼稚细胞.复苏第9代冻存的细胞,4 h后贴壁率约60%,细胞增长活跃.结论:Percoll密度梯度法和全骨髓贴壁法分离的兔骨髓间充质干细胞,前者可获得较均匀一致的单核细胞,在细胞增殖、清除造血细胞干扰等方面明显优于后者;Mesen Cult、DMEM/F12、LG-DMEM培养液均适用于兔骨髓间充质干细胞的培养;细胞冻存复苏后生长增殖状况良好.     

免疫球蛋白G快速提纯方法的研究

前言免疫球蛋白G是主要抗体之一。不论在基础免疫学还是临床免疫学的研究中,提纯抗体——免疫球蛋白G是重要的基础工作之一。提纯方法有很多,如盐析法、柱层析法、电泳法等等。前者操作手续多,     

“肠型胃癌”与肠上皮相关抗原(a_2GP)的免疫组织学观察

自从1972年我们开始探索胃癌的一组α_2区带糖蛋白(α_2GP)以来,通过临诊及普查,看到它在胃癌病人血清中有一定的阳性率但也伴有一些非特异性反应。免疫化学及免疫组织学证实。α_2GP也存在于胎儿胃肠及其他组织内。在深入研究过程中,发现α_2GP与胃粘膜的肠化生有密切关系因而提示我们,α_2GP这一组糖蛋白中,与胃癌有关的主要组分可能是肠上皮抗原,为了阐明α_2GP与胃癌及其它胃上皮细胞的关系,应用萤光抗体技术进行免     

应用免疫学方法诊断胃粘膜肠上皮化生的研究

胃粘膜肠上皮化生是一种常见病变。很早就有人看到这种病变往往合并于慢性胃炎和其他胃病,并注意到了肠上皮化生与胃癌的发生有一定联系。另外,对于胃癌的重要癌前病变——异型上