骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质上的生长及分化***★

背景：传统方法多采用平滑肌细胞和移行上皮细胞构建组织工程膀胱，并进行支架材料的双面种植，但由于平滑肌细胞取材培养困难，且体外传代有限，双面种植较为困难。 目的：实验拟验证以骨髓间充质干细胞及膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的可行性。 设计：基础实验研究。 单位：中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心。 材料：实验于2006-03/2007-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成。实验室级别为卫生部部属医院开放实验室。1月龄SD大鼠，雌雄不限，体质量80~ 100g，由中山大学实验动物中心提供。新鲜猪膀胱取自南方医科大学动物实验中心。 方法：采用全骨髓培养连续贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，并应用流式细胞仪检测其表面抗原。采用去污剂洗涤法制备猪膀胱脱细胞基质，并测定其纯度及特性。将第3代骨髓间充质干细胞接种到膀胱脱细胞基质上，以添加25 ng/L血管内皮生长因子（VEGF165）的培养液进行体外、体内复合培养，检测其相容性。体内实验以细胞单独培养为对照，体外实验以未植入细胞的材料为对照，并模拟合适的微环境诱导骨髓间充质干细胞生长分化，分别在4，8周后取出动物体内的复合材料行组织切片检查，并进行免疫组织化学角蛋白染色，检测上皮细胞再生情况。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性。 结果：①采用全骨髓法成功培养出骨髓间充质干细胞，行流式细胞仪检测细胞表面抗原显示，传代第3代细胞CD29阳性细胞为99.43%。②制备的膀胱脱细胞基质具有良好的生物特性，镜下见均质状态的基质和细丝状的胶原纤维。体内外相容性实验表明骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的相容性，细胞生长状态良好。③4周后组织切片检查可见组织中较多炎症细胞浸润，胶原及弹性纤维排列紧密，免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、不连续的单层上皮生长，8周后可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应，胶原及弹性纤维排列紧密，免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、连续的多层上皮生长。 结论：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的生物相容性，并且在体内与周围组织有良好的生物相容性，可以作为构建组织工程膀胱的材料。     

精子染色质扩散试验检测在早期不明原因复发性流产中的临床价值研究

目的评价男性精子染色体扩散试验在早期不明原因复发性流产中的临床价值。方法对40例早期不明原因复发性流产夫妇的男性精液进行常规检查和精子染色体扩散试验,40例有正常生育能力的夫妻的男性精子作对照组。结果二组精液密度、活力、正常形态精子率比较差异无统计学意义,精子碎片率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论精子染色体扩散试验是检测早期不明原因复发性流产男性精子因素的重要手段。     

精子DNA损伤对试管婴儿助孕结局的影响

目的:评估精子DNA损伤对试管婴儿助孕结局的影响。方法:对实施试管婴儿的男方精子进行DNA损伤率检测,根据精子DNA损伤率分为损伤组(精子DNA损伤率≥15%)和正常组(精子DNA损伤率15%),观察比较2组病例的受精率、优质胚胎率、活产率、流产率等指标。结果:损伤组的精子浓度、精子活力、正常形态精子百分率、精子顶体酶活性、体外受精率、优质胚胎率和活产率均明显小于正常组(P0.01);损伤组的精子卵浆内注射技术受精率大于正常组(P0.01);而损伤组的流产率与正常组差异无统计学意义(P0.05)。结论:精子DNA损伤检测对试管婴儿结局有一定的预测作用。     

睾丸尖钳穿刺取精术在临床中的应用及安全性分析

目的研究睾丸尖钳穿刺取精术在临床中的应用及安全性。方法回顾性分析2016年1月至2018年9月在本院生殖中心行睾丸尖钳穿刺取精术的268例患者的病例资料,统计分析病例诊断分类、手术时间、术后并发症、获得精子情况及使用获得精子行ICSI的优胚率、活产率等。结果患者平均年龄(32.46±6.08)岁,其中无精子症205例、取精困难29例、严重少弱畸精子症23例、不射精/逆行射精症/无精液症11例。手术时间0.5~1 min。术后阴囊血肿3例、晕厥1例,均经对症处理后康复。获得成熟精子的有242例,经ICSI治疗后的优胚率平均为41.66%,累积活产率为70.25%。结论睾丸尖钳穿刺取精术适应证广泛、手术时间短、治疗效果满意,是一种较好的手术方法;同时,应积极预防、及时处理可能的手术并发症。     

3178周期宫腔内夫精人工授精临床结局及其影响因素分析

目的:评估宫腔内夫精人工授精(IUI)的临床结局及其影响因素。方法:回顾性分析行IUI治疗的1 646对夫妇共3 178个周期的临床资料,分析临床妊娠率及其与女方年龄、不孕类型、不孕病因、是否促排卵治疗、IUI时机、IUI周期次数的关系。结果:IUI临床妊娠率为12.4%(394/3 178);对临床妊娠率有统计学意义的影响因素是女方年龄、不孕病因、是否促排卵治疗;而不孕类型、IUI时机、IUI周期次数不影响临床妊娠率。结论:女方年龄、不孕病因、是否促排卵治疗均可影响妊娠率,治疗时应综合考虑多种因素的影响。     

辅助生殖技术对妊娠结局和子代出生结局的影响分析

目的 探究辅助生殖技术（ART）对妊娠结局和子代出生结局的影响。方法 回顾性分析本院生殖中心收治的600例有生育需求者的病历资料,按其受孕方式分为对照组（自然妊娠,300例）及研究组（ART,300例）,比较两组有生育需求者的妊娠结局及子代出生结局。结果 研究组多胎率、流产率、剖宫产率分别为11.67%、17.00%、50.33%,均高于对照组的2.00%、7.33%、22.67%,差异有统计学意义（P<0.05）。两组子代先天性心脏病率、畸胎率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;研究组子代早产儿率为19.00%,高于对照组的5.00%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ART的问世为不孕夫妻带来了生育希望,但孕妇流产率、剖宫产率及子代早产率相对自然妊娠者更高,临床需加大产前管理和妊娠并发症防治工作的力度。     

骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质上的生长及分化

背景:传统方法多采用平滑肌细胞和移行上皮细胞构建组织工程膀胱,并进行支架材料的双面种植,但由于平滑肌细胞取材培养困难,且体外传代有限,双面种植较为困难.目的:实验拟验证以骨髓间充质干细胞及膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的可行性.设计:基础实验研究.单位:中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心.材料:实验于2006-03/2007-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成.实验室级别为卫生部部属医院开放实验室.1月龄SD大鼠,雌雄不限,体质量80～100g,由中山大学实验动物中心提供.新鲜猪膀胱取自南方医科大学动物实验中心.方法:采用全骨髓培养连续贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,并应用流式细胞仪检测其表面抗原.采用去污剂洗涤法制备猪膀胱脱细胞基质,并测定其纯度及特性.将第3代骨髓间充质干细胞接种到膀胱脱细胞基质上,以添加25 ng/L血管内皮生长因子(VEGF165)的培养液进行体外、体内复合培养,检测其相容性.体内实验以细胞单独培养为对照,体外实验以未植入细胞的材料为对照,并模拟合适的微环境诱导骨髓间充质干细胞生长分化,分别在4,8周后取出动物体内的复合材料行组织切片检查,并进行免疫组织化学角蛋白染色,检测上皮细胞再生情况.主要观察指标:骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性.结果:①采用全骨髓法成功培养出骨髓间充质干细胞,行流式细胞仪检测细胞表面抗原显示,传代第3代细胞CD29阳性细胞为99.43%.②制备的膀胱脱细胞基质具有良好的生物特性,镜下见均质状态的基质和细丝状的胶原纤维.体内外相容性实验表明骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的相容性,细胞生长状态良好.③4周后组织切片检查可见组织中较多炎症细胞浸润,胶原及弹性纤维排列紧密,免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、不连续的单层上皮生长,8周后可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应,胶原及弹性纤维排列紧密,免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、连续的多层上皮生长.结论:骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的生物相容性,并且在体内与周围组织有良好的生物相容性,可以作为构建组织工程膀胱的材料.     

回顾性分析丈夫精子情况与宫腔内夫精人工授精临床妊娠率的关系

目的对宫腔内夫精人工授精夫妇的丈夫精子资料进行回顾性分析,观察不同精子情况与临床妊娠率的关系。方法选择2004年²012年因不孕症在中山市博爱医院生殖医学中心进行宫腔内人工授精(IUI)治疗的夫妇1646对共3178个周期。根据丈夫精子分为畸形精子症、畸弱精子症、弱精子症、少精子症、少弱精子症、少弱畸精子症、精浆异常、正常精液8组。观察总结临床妊娠率与丈夫精子情况的关系。结果总体IUI临床妊娠率为12.4%(394/3178)。8组丈夫精子情况与临床妊娠率均无明显关系。结论 IUI临床妊娠率受多种因素影响,与丈夫精子情况无明显相关性。