大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养纯化及生物学特性的鉴定

【目的】探讨大鼠骨髓间充质干细胞（rat bonemarrow—derived mesenchymal stem cells，rBMSCs）体外分离、培养和纯化方法，鉴定其生物学特性，为BMSCs应用奠定技术基础。【方法】采用密度梯度离心法结合贴壁分离法分离培养纯化SD大鼠BMSCs，观察其形态，测定细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞表面标记，成骨诱导试剂盒检测rBMSCs向成骨细胞分化的潜能。【结果】显微镜下rBMSCs呈梭形、多角形成纤维细胞样形态，大小均一，漩涡状生长。生长曲线分析rBMSCs贴壁2d基本无增殖，处于潜伏期，对数增殖期为3～7d，d8后进入平台期，细胞出现接触抑制现象。rBMSCs表面标志显示第3代rBMSCs纯度可达97％以上，CD44、CD90呈阳性表达，CD34呈阴性表达；向成骨诱导rBMSCs10d后细胞表现成骨细胞特性，碱性磷酸酶活性明显升高。【结论】本实验建立了一种理想的体外分离扩增纯化rBMSCs的培齐体系。实验结果表明所分离培养的rBMSCs纯度高、生物学特征稳定，适用于对BMSCs进一步的应用研究。     

年龄对人骨髓间充质干细胞分离培养的影响

目的:探讨年龄对骨髓间充质干细胞分离培养的影响以及在临床治疗中的意义.方法:通过分析183例人骨髓间充质干细胞分离培养情况,对比不同年龄段骨髓单个核细胞数、原代间充质干细胞数量、细胞增殖速度、细胞形态等方面的差异.结果:不同年龄段骨髓有核细胞、间充质干细胞免疫表型没有明显差异,单个核细胞数随年龄增长逐渐减少,但没有统计学差异.不同年龄段收获原代间充质干细胞数量、细胞增殖速度有明显差异(P<0.01).年轻组、中年组收获原代MSC细胞明显多于年老组,增殖能力明显强于年老组.结论:随着年龄的增长,骨髓中间充质干细胞的数量减少,增殖能力衰退,在干细胞临床治疗中,不适宜从老年患者中获取骨髓来源的间充质干细胞.