应用实时荧光PCR分析apoE3、4等位基因

目的 建立实时荧光PCR进行apoE单核苷酸多态性(SNP)分析法,快速检测人栽脂蛋白E(apoE)等位基因.方法 以人apoE基因中的Cys112Arg为研究对象,用荧光染料SYBR Green Ⅰ标记PCR产物,通过熔解曲线分析结果,并进行SNP分型.用高保真DNA聚合酶提高SNP测定的特异性;通过DNA测序验证荧光定量PCR对apoE基因Cys112Arg分型结果的准确性.结果 每个样品设立2个检测管,利用下游引物P2和SNP检测引物P33、P44进行定量PCR反应,30份样品各自获得2种等位基因扩增产物的熔解曲线,通过熔解曲线的Tm值判读,在30份样本中,apoE基因型3/3、3/4分别有27例和3例,与PCR-RFLP及DNA测序结果一致.结论 建立的apoE等位基因分型法操作简便,结果准确,适合人外周血apoE等位基因的定性检测.     

LncRNA-HULC通过稳定SIRT1蛋白调控肝癌Hep G2细胞自噬和化疗耐药的机制

目的探讨长链非编码RNA肝癌高表达转录本(highly up-regulated in liver cancer,LncRNA-HULC)通过稳定沉默信号调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)蛋白调控肝癌Hep G2细胞自噬和化疗耐药的机制。方法将实验Hep G2细胞分为3组:对照组(NOR组)、基因过表达组(O-HULC组)和基因抑制组(S-HULC组)。NOR组正常培养传代,O-HULC组转染HULC基因,S-HULC组将HULC基因抑制。应用免疫印迹法测定蛋白表达量,应用RT-QPCR法检测基因表达量。结果各组的肝癌Hep G2细胞自噬情况随药物添加时间延长而增加,凋亡率逐渐升高,与S-HULC组相比,O-HULC组和NOR组肝癌Hep G2细胞自噬情况显著增加,凋亡率降低,其中O-HULC组自噬情况高于NOR组,凋亡率低于NOR组(P<0.05)。与S-HULC组相比,NOR组和O-HULC组肝癌Hep G2细胞迁移数量和侵袭数量显著增加,其中O-HULC组显著高于NOR组(P<0.05)。与S-HULC组相比,NOR组和O-HULC组的泛素水解酶22(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 22,USP22)、SIRT1、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(Microtubule-associated protein1 light chain3,LC3-Ⅱ)蛋白表达量升高,其中O-HULC组均高于NOR组(P<0.05)。结论LncRNA-HULC可以稳定SIRT1调控细胞自噬降低细胞对化疗药物的敏感性,可能与信号通路“HULC-USP22-SIRT1/COX-2-LCⅡ”有关,此通路可能是开发肝癌化疗新增敏策略的新靶点。     

超微型光纤成像系统行离体猪肺细支气管成像

目的 探索利用超微型光纤成像系统获得离体猪肺细支气管（直径<1 mm）图像的可行性。方法 将超微型光纤成像系统的光纤（直径0.82 mm）自10具完整新鲜猪肺标本的喉部插入,连接CPAP（Continuous Positive Airway Pressure）模式无创呼吸机,观察并记录各级细支气管解剖结构、黏膜颜色、气管内分泌物等;插入到支气管远端遇到阻力时停止,固定光纤后行肺CT扫描,并行支气管三维重建,获取超微型光纤到达最远端支气管的直径。结果 超微型光纤成像系统能实时获得各级细支气管图像;三维重建图像显示超微型光纤成像系统能到达直径<1 mm的细支气管。结论 利用超微型光纤成像系统能获得离体猪肺直径<1 mm的细支气管的图像,可为获得活体肺细支气管图像提供前期动物研究基础。     

肝硬化并脑出血患者预后危险因素分析

目的探讨肝硬化并脑出血患者的预后和病死率,分析影响预后的危险因素。方法收集2008年12月至2018年7月解放军总医院第五医学中心收治的51例肝硬化并脑出血患者临床资料。根据出院情况将患者分为死亡组和好转组,对两组患者的临床特征进行比较,并探讨与预后相关的危险因素。结果 51例患者中,死亡31例,病死率为61%。单因素分析结果显示,死亡组与好转组患者的血肿面积分别为(57±28)mL、(25±11)mL,血小板分别为(31±27)×10~9/L、(62±21)×10~9/L,重度意识障碍分别为25例、5例,child评分C级为26例、8例,差异均有统计学意义(P0.05)。多因素分析结果显示,血小板计数为肝硬化并脑出血患者预后的独立危险因素(P0.05),血小板受试者工作特征曲线下面积为0.894(0.803～0.986),灵敏度和特异度分别为100%和77.4%,最大约登指数为0.774。结论血小板是肝硬化并脑出血患者预后的独立危险因素,与患者病死率呈正相关。肝硬化病因与并发脑出血有关,与预后无关。