逆向斑点杂交检测乙型肝炎病毒基因型及YMDD变异

目的 应用逆向斑点杂交技术检测乙型肝炎病毒（HBV）基因型及YMDD变异。方法 合成有生物素标记的引物，PCR扩增两种DNA片段，与尼龙膜上的探针同时杂交，BCIP／NBT显色。结果 检测21例拉米夫啶治疗中的慢性乙型肝炎患者，11例HBV为基因型B，10例为基因型C；YMDD基序有47．6％（10／21）为YMDD，28．6％（6／21）为YVDD，23．8％（5／21）为YIDD。结论 在同一张尼龙膜上检测HBV基因型及YMDD变异，经济实惠、准确快捷，且易于开展。     

选择HBV DNA多聚酶TP区VH抗体的一种新方法:蛋白片段互补法

目的：用PCA（Protein fragmem complementation assay，PCA，蛋白片段互补方法）选择HBV（Hepatitis Bvirus）多聚酶TP（Terminal protein，TP，末端蛋白）区VH（Variable fragments of heavy chain，VH，重链可变区）抗体。方法：用HepG2．2．15细胞分泌的HBV的多聚酶TP区作为抗原，用PCA方法进行VH抗体选择。抗原与抗体基因分别与二氢叶酸还原酶（DHFR）的两部分相连。特异性抗原、抗体相互识别，分别与他们相连的酶基因就会接触而恢复完整的DHFR酶活性，细菌得以存活。结果：对HBV DNA多聚酶TP区进行抗体选择，用PCA方法从抗体库中选择出3个对应抗体。3个TP区抗原特异性抗体有不同的氨基酸序列。结论：对HBV DNA多聚酶TP区进行抗体选择，用PCA方法可以从抗体库中较为简便的选择出对应抗体。PCA可以作为一个从抗体库中选择特异性抗体的强有力方法。     

不同方法检测血清HBV DNA水平的比较

目前,检测慢性乙型病毒性肝炎血清或血浆病毒的几种分子生物学技术均建立在靶序列或者信号扩增的基础之上,如Quantiplex HBV DNA（bDNA）技术即是基于分支链DNA技术的信号扩增,而COBAS Amplicor则是基于引物特异的靶序列扩增。其他尚有基于核苷酸交联技术的定量检测方法也为实验室所常用。然而以上方法对于开展临床大规模检测来说成本昂贵,不适用于经济不发达地区。     

核苷类似物干预下慢性乙型病毒性肝炎患者HBV多聚酶区基因突变检测分析

目的 研究重庆地区慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)患者核苷类似物治疗过程中HBV多聚酶区(P)基因变异情况.方法 选取350例接受核苷类似物治疗后出现病毒学突破的慢乙肝患者作为研究对象,采用PCR产物直接测序法,分析HBV P区基因变异发生情况.结果 350例患者中有124例检测出基因型耐药,C基因型在基因型耐药患者中所占...     

慢性乙型肝炎患者5年阿德福韦酯疗程中HBsAg水平变化及其与HBVDNA水平相关性分析

目的了解慢性乙型肝炎(简称乙肝)患者阿德福韦酯治疗过程中血清HBsAg水平变化,并探讨其与HBVDNA水平的相关性及临床意义。方法对阿德福韦酯治疗5年的20例HBeAg阳性慢性乙肝患者进行HBV基因型检测,并于服药0、8、12、24、52、104、156、208、260周时进行HBVDNA、HBsAg定量检测。结果阿德福韦酯治疗5年对总体HBsAg水平影响不大(P=0.658)。0周HBsAg水平与HBVDNA水平呈负相关(r=-0.603,P=2.13×10-4);其余各时间点中,仅52周时可见二者呈负相关(r=-0.434,P=0.008);12例HBV基因B型患者仅在0周时呈负相关(r=-0.657,P=0.003),8例C基因型患者0、52周时呈负相关(r=-0.643,P=0.026;r=-0.857,P=0.003);考虑ALT水平时,二者负相关则仅表现在ALT<2×ULN者(r=-0.648,P=0.016)。结论阿德福韦酯治疗5年对HBsAg总体水平无影响;HBsAg水平和HBVDNA水平的负相关性仅存在于未予抗病毒治疗且ALT低水平者;抗病毒治疗过程中评价二者相关性的意义不大。     

新开发血清标志物在肝细胞癌早期诊断中的应用和评价

<正>肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是位居全球第五,我国第三的恶性肿瘤,全世界每年有700000的新增患者,其发展迅速,治疗棘手,疗效欠佳,5年生存率不到10%[1]。虽然甲胎蛋白(AFP)一直被作为临床早期诊断HCC最常用的血清肿瘤标志物,但其对HCC诊断敏感性为39%～64%,特     

醋氨酚对犬的多器官损伤及原因分析

目的了解醋氨酚对犬的多器官毒性作用及原因.方法选用普通杂种犬,静脉注射醋氨酚,首次剂量100mg/kg,之后每隔1h50mg/kg,持续11h,做血液生理生化和心、肺、肝、肾等组织病理学检测.分为:对照组、空腹12 h组和空腹24h组.结果首次注药后24 h左右空腹24h组全部死亡,72 h左右空腹12 h组有2条死亡.血液生理生化白细胞、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AsT)、乳酸脱氢酶、总胆红素、尿素氮、肌酐升高,AST/ALT＞1,红细胞下降.组织病理心、肺、肝、肾、胃、脾均有淤血,左右心室皆见心肌断裂和间质组织水肿.结论醋氨酚对犬可造成多器官损伤,直接原因为氧自由基导致的全心衰竭.     

基于 ＴＣＧＡ 和 ＧＥＯ 数据库探索结肠癌肿瘤微环境中 的免疫相关预后因子

摘要：目的 构建和评估结肠癌预后模型，探索肿瘤免疫微环境的特征，并分析其在结肠癌的免疫治疗中的作用。方法 从 癌症基因组图谱（Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ，ＴＣＧＡ）中下载结肠癌及其正常组织数据作为训练数据集，从基因表达综合数据库 （Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｍｉｎｉｂｕｓ，ＧＥＯ）中下载结肠癌及其正常组织数据作为验证数据集，从免疫学数据库和分析平台（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｄａｔａｂａｓｅ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｏｒｔａｌ，Ｉｍｍｐｏｒｔ）中下载免疫相关基因列表。基于以上数据集，利用生物信息学的方法构建并验证预后 风险模型。另外，基于预后风险模型进行肿瘤样本分组，探讨高风险评分组和低风险评分组的肿瘤浸润水平差异、肿瘤突变 负荷（ｔｕｍｏｒ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｂｕｒｄｅｎ，ＴＭＢ）和免疫检查点抑制剂相关靶点的表达水平差异。结果 构建的预后模型 ＲＯＣ 曲线下面积 （ＡＵＣＲＯＣ ）在３ 年时为０．６６８，４ 年时为０．６９９，５ 年时为０．６９６。此外，低风险评分与良好的预后显著相关（Ｐ＜０．０００ １），而高风险 评分与较高的肿瘤分期显著相关（Ｐ＜０．０５），并在验证数据集中得到进一步验证。同时，构建的列线图模型的 Ｃ ｉｎｄｅｘ 从０．６３ 增加至 ０．７５。基于建立的预后风险模型，高风险组的免疫治疗相关靶基因的表达水平显著升高（Ｐ＜０．０５），有 ６ 种免疫细胞的 浸润程度在高风险组和低风险组中的差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。同时，较高的 ＴＭＢ 与较差的预后显著相关（Ｐ＜０．０５）。结 论 构建的结肠癌预后模型在评估结肠癌患者复发风险分层、肿瘤分期等方面具有潜在的临床意义，有助于结肠癌的肿瘤免 疫微环境的探索及结肠癌患者的免疫治疗。     

聚合酶链反应扩增小分子干扰RNA表达框筛选抑制HBV DNA复制的小分子干扰RNA

一些短片段的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异地阻断体内特定基因表达，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNAi）。小分子干扰RNA（siRNA）就是这种短片段双链RNA分子，能够以序列同源互补的mRNA为靶目标，降解特定的mRNA。本研究针对HBV DNA多聚酶区的siRNA，运用PCR扩增siRNA表达框的方法筛选出对HBV DNA抑制作用最强的siRNA，观察其对HBV DNA复制及HBsAg和HBeAg分泌的抑制作用。