Effect of bone marrow mesenchymal stem cells transfected with rAAV2-bFGF on early angiogenesis of calvarial defects in rats

The purpose of this study was to evaluate the effect of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) transfected with the basic fibroblast growth factor (bFGF)-expressing recombinant adeno-associated virus vector (rAAV2-bFGF), on early angiogenesis of calvarial defects in rats. The MSCs were cultured and transfected with rAAV2-bFGF after differential adherence isolation. The transfection efficiency was detected by RT-PCR and Western blotting. The transfected MSCs were compounded with poly-DL-lactide/hydroxyapa...     

bFGF及Shh时序传递促进骨再生的实验研究

骨再生的治疗应着重于模拟机体自然的骨修复过程。我们假设在骨再生治疗的早期阶段应用促血管生成因子联合促骨再生因子来模拟自然的骨再生过程能更好更快的促进成骨。首先我们利用腺相关病毒分别携带这两个关键因子,构建了rAAV2-tet-off-bFGF and rAAV2-Shh,前者还加入了四环素调控系统,能通过四环素的添加来控制bFGF的表达。将这两种病毒共感染骨髓间充质干细胞,通过实时定量RT-PCT检测诸如核心结合因子1、碱性磷酸酶及骨钙素等成骨相关的标志因子,同时应用Western blot检测转基因的蛋白表达变化。接着,将这些转基因细胞与β-磷酸三钙颗粒复合,植入到大鼠的标准颅骨缺损中(直径为8mm)。30只SD大鼠平均分为6组,每组5只大鼠。A组植入两种转基因细胞及材料复合物;B组植入rAAV2-tet-off-bFGF转基因细胞及材料复合物;C组植入rAAV2-Shh转基因细胞及材料复合物;D组植入rAAV2-EGFP转基因细胞及材料复合物;E组植入单纯的骨髓间充质干细胞及材料复合物;F组为空白组,不植入任何细胞及材料。术后后5天,除B组外,每日在其它组的动物饮水中添加四环素的衍生物---强力霉素来关闭A组中bFGF的表达,并消除其它对照组的组间差异。术后4周收集颅骨标本,行Micro CT扫描及骨组织形态学分析。结果分析中我们发现,双因子共感染的细胞内成骨相关因子有显著的升高趋势(p<0.05),Micro CT及骨组织切片看见双因子时序调控的治疗组有相当显著的新骨再生,其中新生骨的面积及血管密度显著高于其它对照组,有统计学意义(p<0.05)。因此,我们得出结论,在骨再生初期的治疗过程中引入促血管生成因子及促成骨生成因子的时序协同作用能模拟机体自身的骨再生过程,能显著促进及加快新骨再生。     

Shh修饰骨髓间充质干细胞与不同骨移植材料复合的体外观察

目的：研究两种不同骨移植材料对Shh基因修饰的骨髓间充质干细胞（MSCs）生长和增殖活性的影响。方法：差异贴壁法培养大鼠MSCs,携带音狸因子（Shh）腺相关病毒2型（rAAV2-Shh）转导MSCs,然后与两种不同的骨移植材料—聚D,L-乳酸/羟基磷灰石（PDLLA/HA）和β-磷酸三钙（β-TCP）体外复合。MTT法检测MSCs的增殖活性和黏附能力。扫描电镜观察MSCs在骨移植材料上的生长情况。结果：β-TCP组黏附和增殖活性均强于PDLLA/HA组（P〈0.05）。此结果在扫描电镜观察中得到同样的证实。结论：与PDLLA/HA比较,β-TCP具有更良好的生物相容性。