补体与牙周炎发生发展及其治疗

在牙周炎这一慢性炎症反应过程中,补体不仅可以调解机体防御反应,保护宿主,还可直接作用于免疫细胞或通过调控信号转导通路,协助病原菌进一步感染和破坏牙周组织,最终导致免疫病理性的损伤反应。在免疫炎症反应中,补体不仅可刺激白细胞分泌白细胞介素、肿瘤坏死因子和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,调节辅助性T细胞和巨噬细胞,促进细胞免疫和T细胞依赖的抗体分泌,增强免疫效应的调节,提高机体免疫力;亦可引起的炎症反应可对组织造成损伤,引起牙周炎。以补体受体拮抗剂干扰补体受体-Toll样受体信号转导通路,有利于机体清除病原菌,达到防治牙周炎的目的。理解补体在牙周炎发生发展中的作用,可为牙周炎治疗探索新途径。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对破骨细胞EphA2基因表达的调控

目的:研究小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7在破骨分化过程中,Pg-LPS对破骨细胞EphA2表达的影响。方法:用终浓度10 mg/L的Pg-LPS 刺激RAW264.7 细胞后,分别在1、3、5 d,应用RT-PCR检测破骨细胞中EphA2基因和破骨细胞相关基因(破骨细胞内基质金属蛋白酶( MMP9)、ACP5、c-fos、组织蛋白酶K(CtsK)、NFATc1)的表达,并且通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察实验组和对照组破骨细胞的分化成熟情况。结果:RT-PCR检测10 mg/L的Pg-LPS在第3天和5天,实验组比对照组EphA2基因表达分别增高2.4倍和1.2倍,两组之间存在显著差异(P<0.01);同时也能够促进破骨相关基因c-fos、NFATc1、CtsK、ACP5、MMP9的表达,实验组与对照组相比差异有显著性;TRAP染色结果显示:实验组比对照组的TRAP阳性多核细胞数目明显增多。结论:10 mg/L的Pg-LPS对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,在破骨分化的中期和晚期均能够促进EphA2基因的表达,但是在破骨分化早期对EphA2基因的表达无明显作用。     

牙龈卟啉单胞菌FtsZ的C末端和N末端氨基酸残基缺失对其GTPase活性的影响

目的：探讨牙龈卟啉单胞菌（Pg）丝状温度敏感蛋白质（FtsZ）的C末端和N末端氨基酸残基缺失对其GTPase活性的影响,阐明PgFtsZ GTPase的功能区域,为牙周病的防治提供实验依据。方法：将质粒pEZ1(Wt PgFtsZ,含野生型PgFtsZ的基因)、pYW1（ZΔC01,从PgFtsZ的C末端去除73个氨基酸残基的变异型）、pYW2（ZΔC02,从PgFtsZ的C末端去除128个氨基酸残基的变异型）、pYWN1（ZΔN01,从PgFtsZ的N末端去除43个氨基酸残基的变异型）和pYWN2（ZΔN02,从PgFtsZ的N末端去除205个氨基酸残基的变异型）分别导入E.coli BL21(DE3)pLysS中表达目的蛋白,然后分离和纯化WtPgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02、ZΔN01和ZΔN02,将pET3a 载体导入E.coli BL21(DE3)pLysS中作为空白对照。采用Malachite green assay法检测Wt PgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02、ZΔN01和ZΔN02的GTPase活性,沉淀法检测体外聚合功能,光学显微镜下观察Wt PgFtsZ和各种变异型PgFtsZs过表达时E.coli细胞形态变化。结果：除ZΔN01外,ZΔC01、ZΔC02和ZΔN02的GTPase的活性值均较Wt PgFtsZ降低（P<0.05）,10 mmol•L^-1 CaCl2可使Wt PgFtsZ和各种变异型PgFtsZs的活性下降（P<0.05）;除ZΔN02以外,10 mmol?L-1 CaCl2均可诱导Wt PgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02和ZΔN01的体外聚合反应。Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔC02在E.coli细胞中过表达时,细胞呈细长丝状,与仅含有pET3a载体作为空白对照的E.coli相比细胞明显变长;ZΔN01和ZΔN02在E.coli中过表达时,E.coli细胞形态与仅含有pET3a载体作为空白对照的E.coli细胞形态相似。结论：PgFtsZ N末端的ZΔN01和ZΔN02之间的162个氨基酸残基及C末端的128个氨基酸残基与PgFtsZ 的GTPase活性有关,二价阳离子Ca2+能抑制PgFtsZ的GTPase活性,促进其体外聚合的功能。