EBV－DNA酶全基因扩增克隆和鉴定

根据Ｂｅａｒ的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因全序列，设计包括ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶全基因的一对引物，在引物上设计有一个ＳａｌⅠ切点，以便于克隆。选用蛋白酶Ｋ裂解的Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ为模板，扩增出一条１４６０ｂｐ的特异条带，纯比后经ＴａｑⅠ酶切形成１１９８ｂｐ和２６２ｂｐ的两个片段，证实该扩增片段即为ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶的全基因片段。以ＪＭ１０３为宿主菌，以高效表达质粒ＰＢＶ２２１为载体，按常规方法作酶切、连接、转化，最后在含氨中青霉素的培养基上挑取单菌落扩大培养，用快速法少量制备质粒ＤＮＡ。根据质粒电泳结果粗筛，再行ＢａｍＨⅠ酶切初步鉴定，确定质粒大小为５１１７（１４５１＋３６６６）ｂｐ的菌落为阳性克隆。先后用ＢａｍＨⅠ和ＴａｑⅠ消化阳性重组体，以形成１２００ｂｐ和３９１７ｂｐ两片段的确定为正向连接重组体。本实验首次将ＥＢＶ－ＤＮＡ酶全基因片段克隆到高效表达载体ｐＢＶ２２１上获得成功     

体外反搏治疗失血性休克中一氧化氮合酶的变化

目的：探讨反搏治疗失血休克中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的变化。方法：复制狗的失血休克模型，用同位素方法测定反搏前后各组织的ＮＯＳ活性。结果：体外反搏后平均动脉压较反搏前明显上升（Ｐ＜００１）。脑ＮＯＳ测定值假手术对照组明显高于失血休克组Ｐ＜００１）及失血休克克反搏组（Ｐ＜００１），失血休克组则明显低于失血休克反搏组（Ｐ＜００１）；心肌ＮＯＳ活性假手术对照组与失血休克反搏组均明显高于失血休克组（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１），但假手术对照组与失血休克反搏组之间无显著差异（Ｐ＞００５）；主动脉ＮＯＳ活性假手术对照组明显高于失血休克组（Ｐ＜００１）及失血休克反搏组（Ｐ＜００５），但失血休克组与失血休克反搏组间无明显差异（Ｐ＞００５）。结论：体外反搏可以增强小血管ＮＯＳ活性，ＮＯＳ活性的恢复则可能在反搏治疗中起重要作用     

重组人蛋白激酶CK2α亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶ＣＫ２曾称酪蛋白激酶２（ｃａｓｅｉｎｋｉｎａｓｅ２）是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的在真核细胞中普遍存在的ｃＡＭＰ非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶［１］。在进化过程中ＣＫ２的各亚基均表现出高度保守性,属于一种看家酶。该酶在许多...     

基因工程技术及其在医学上的应用（第一讲 如何获得目的基因）

基因工程技术及其在医学上的应用第一讲如何获得目的基因中山医科大学生化教研室马涧泉，伍新尧基因工程是７０年代出现的高科技，对生命科学及医学发展有深远影响。本连载就如何获得目的基因，基因工程的酶学基础，如何得到高效表达，核酸探针的临床应用，聚合酶链反应（...     

生物化学动画库的构建及其应用

针对生物化学学科特点和Flash独特的优势，结合教学实际，构建了生物化学Flash动画库，提供了一批形象直观的动画，并应用于生物化学的教学实践，充分显示了Flash在提高生物化学教学质量方面所具有的潜力。     

丁酸钠诱导Raji细胞基因表达的变化

 目的 分析丁酸钠诱导Raji细胞的基因表达变化,探讨丁酸钠诱导凋亡作用机制。方法 限制性显示PCR技术（Restriction Display PCR,RD-PCR）分析基因表达变化,利用互联网提供的GenBank核酸数据库分析比对获得的差异表达序列。结果 获得14条差异表达序列,其中6条是对照组高表达序列,8条是实验组高表达序列。结论 采用RD-PCR技术可以快速简便地分析药物诱导基因表达变化。分析表达差异的序列发现,丁酸钠可诱导促进细胞凋亡的基因表达,降低肿瘤细胞高表达的基因表达。     

互隔交链孢霉毒素对DNA的损伤作用

共价闭环超螺旋ＤＮＡ变为缺口环状和／或线性ＤＮＡ时，ＤＮＡ链要发生肤裂。利用这一原理来检测互隔交链孢霉毒素：交链孢酚（ＡＯＨ）、交链孢酚单甲醚（ＡＭＥ）引起ＤＮＡ链的断裂。结果表明，这两种物质对ＤＮＡ都有直接损伤作用，但是它们的作用强度和方式是不相同的，ＡＯＨ对ＤＮＡ的损伤作用强，并可与ＤＮＡ结合。     

TaqDNA聚合酶一步法获得TGF-β_1基因片段的RT-PCR扩增产物

以组织细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，加入ＴａｑＤＮＡ聚合酶和一对以ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ为模板设计的引物，经变性、退火、延伸共３０次循环后，可以得到以ｃＤＮＡ为模板的扩增产物。实验证实ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有逆转录酶活性，用一步常规聚合酶链反应即可获取逆转录聚合酶链反应的ＴＧＦβ１４６８ｂｐ扩增产物。     

蛋白印迹法人血清DNA结合蛋白的测定

利用蛋白印迹法(Western blot)原理建立了检测人血清DNA结合蛋白的一种较特异性方法,发现在成人血清中有7 种Lambda DNA结合蛋白,分子量为:90kDa、67kDa、43kDa、30kDa、24kDa、22kDa和17kDa。在婴儿血清中没有30kDa、24kDa和22kDa这3种LambdaDNA结合蛋白。在人的血清中有二种小牛胸腺DNA结合蛋白,分子量为:43kDa和17kDa。血清中有四种与正常成人血浆DNA结合的蛋白质,分子量分别为:67kDa、43kDa、30kDa和24kDa,其中30kDa的这种蛋白质与正常成人血浆DNA的结合力较弱,并在一些正常个体中未见到此带。     

CaM对PHA促淋巴细胞分裂作用的影响

本文应用MTT微量自动定量比色法分析细胞的存活与增殖状况，观察钙调蛋白（Calmodulin,Cam）对PHA促小鼠脾淋巴细胞分裂作用的影响。结果发现，细胞经培养48h后，PHA加Cam的最大刺激组的光密度（OD）值比末加CAM的PHA组提高了46.8%（OD值分别为0.457和0.311），CAM的最大刺激浓度为30μg/ml。结果表明，CAM参与细胞增殖的调节作用，并能显著提高PHA的有丝分裂原活性的作用。