谷氨酰胺缺乏诱导CD8+ T细胞铁死亡促进肿瘤生长北大核心CSCD

目的 探究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对CD8+T细胞抗肿瘤免疫反应的影响及机制。方法 TCGA数据库分析肿瘤Gln代谢与浸润CD8+T细胞数量及功能的关系。利用CRISPR/Cas9敲低MC38细胞GLS表达,构建小鼠肿瘤模型。流式细胞术检测肿瘤增殖和凋亡,分析肿瘤浸润免疫细胞数量和功能。用Gln缺乏的培养基、完全培养基或添加GSH、RSL3的培养基分别处理CD8+T细胞,检测GSH含量,细胞凋亡,GPX4和Lipid-ROS及效应功能蛋白表达,并进行RNA-seq分析。结果 肿瘤Gln代谢与肿瘤浸润CD8+T细胞数量和功能负相关。敲低MC38细胞GLS表达抑制了C57BL/6肿瘤的生长及Ki67的表达,促进了Caspase3表达,提高了肿瘤浸润免疫细胞的数量,抑制了肿瘤浸润CD8+T细胞PD-1、TIM-3和LAG-3表达,并提高了CD8+T细胞CD137、CD107a、IFN-γ及TNF-α表达。RNA-seq结果显示,Gln缺乏后CD8+T细胞铁死亡相关基因TFRC、HMOX1、CYBB、SLC7A11表达上调。Gln缺乏后CD8+T细胞死亡增多、CD137、CD107a、IFN-γ、GSH和GPX4表达下调,Lipid-ROS表达上调;补充GSH后CD8+T细胞GPX4上调,Lipid-ROS下调,CD8+T细胞分泌的IFN-γ增多。结论 Gln缺乏诱导CD8+T细胞铁死亡抑制其效应功能。     

缝隙连接阻断剂1-庚醇对血红蛋白诱导兔离体基底动脉环痉挛的抑制作用

目的 探讨缝隙连接在脑血管痉挛中可能发挥的作用。方法 通过兔离体基底动脉环试验,观察缝隙连接阻断剂1-庚醇(heptanol)对氧合血红蛋白(OxyHb)和高K+引起血管收缩的影响。结果10~(-4)mol/L OxyHb和60 mmol/L K+引起动脉环收缩后,累积加入10~(-4)-10~(-2)mol/Lheptanol可以显著降低其收缩程度,并呈浓度依赖关系。当浓度为500μmol/L时,OxyHb引起的血管收缩幅度下降60%,1 mmol/L时几乎完全抑制OxyHb引起的持续收缩。同浓度的heptanol对OxyHb致痉的抑制作用比对K+致痉的抑制作用强。heptanol(≥3×10~(-4)moL/L)预处理动脉环后,能有效抑制OxyHb引起的血管收缩(P<0.01)。结论 缝隙连接阻断剂heptanol能显著抑制OxyHb对脑血管的致痉作用,缝隙连接在脑血管痉挛中可能发挥重要作用。     

嵌合型抗原受体T细胞在实体肿瘤治疗的现状和展望

从1989年Gross与Eshhar提出嵌合型抗原受体(CAR)T细胞的理念,到2014年FDA授予CTL019“突破性治疗”荣誉,CAR-T细胞治疗肿瘤已走过25年.从早期的单一CD3ζ结构域到后来的串联CD28、CD137等,随着人类对肿瘤免疫研究的深入,以及临床试验研究开展,CAR T细胞治疗得到不断优化.虽然CD19为靶点的淋巴瘤治疗获得成功,但实体肿瘤治疗仍处于临床试验摸索阶段.基于促进CAR T细胞向肿瘤局部迁移浸润以及克服抗肿瘤微环境的免疫抑制作用等理念及技术优化,CAR T治疗实体肿瘤的研究越来越深入.未来CAR T治疗的适应症将不断扩大.     

普托品对脑缺血的保护作用

目的:探讨普托品(protopine,Pro)时大鼠局灶性脑缺血、小鼠急性脑缺血及耐缺氧的保护作用及机制.方法:采用可逆性大脑中动脉梗塞法观察Pro对局灶性脑缺血大鼠梗塞面积和行为障碍的影响;结扎小鼠双侧颈总动脉造成急性脑缺血模型观察Pro对急性脑缺血小鼠死亡率的影响;采用小鼠常压耐缺氧实验观察Pro对小鼠存活时间和耗氧量的影响.结果:Pro 60mg/kg能明显改善局灶性脑缺血大鼠神经功能及缩小脑梗塞范围;并能明显降低急性脑缺血小鼠的死亡率;Pro 40mg/kg能延长小鼠闭塞窒息生存时间,并轻度降低耗氧量.结论:Pro具有抗缺氧、抗脑缺血作用.     

自外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞的方法研究

目的 建立自人外周血淋巴细胞(PBMCs)中的记忆B细胞活化和分化特异性抗体分泌细胞(如浆细胞)的体外活化方法,为抗体药物研发提供研究基础.方法 采集两名接种过乙型肝炎疫苗3年和25年健康成年志愿者(Z和L)外周血,分离PBMCs,通过白细胞介素(IL)-2、IL-4和Toll样受体诱导剂(CpG、R848)体外诱导活化记忆B细胞.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中总抗体和HBsAg特异性抗体的含量;通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测培养细胞中总抗体分泌细胞(ASC)数量的变化和HBsAg特异性抗体细胞数量.结果 活化第6天,对照组和两个活化组[CpG DNA2006联合IL-2(C组)和R848联合IL-2(R组)]细胞培养上清总免疫球蛋白(Ig)G浓度分别为37.06ng/mL、80.87 ng/mL和85.97 ng/mL,两个活化组(C组和R组)均明显高于对照组(t=23.318,60.639,P均＜0.05).ELISPOT检测ASC数量,结果显示,C组和R组数量均多于对照组,并且R组明显多于C组.两种活化方法均能在体外诱导B细胞活化,但R组活化效果更佳,确立R组为最佳活化方法.用该方法活化两名乙型肝炎疫苗接种者PBMCs,ELISA检测活化组特异性抗体浓度,R组显著高于对照组(t=5.031,11.561,P均＜0.05).不同细胞数量诱导的分组,ELISPOT检测HBsAg特异性抗体分泌细胞数量,R组均明显多于对照组.结论 确立诱导剂R848和细胞因子IL-2联合能够有效地诱导外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞,为今后抗体药物研发提供了研究基础.