血清型2型猪链球菌烯醇化酶参与猪链球菌抗吞噬作用

目的制备高纯度的猪链球菌烯醇化酶(SsEno)重组蛋白并通过抗体封闭实验评价SsEno对猪链球菌抗吞噬能力的影响,鉴定其与人纤维蛋白原(hFg)结合的活性。方法构建hisSsEno重组表达质粒,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE分析蛋白表达情况,镍柱亲和纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。用hisSsEno免疫兔制备其高滴度的抗血清并通过人全血杀伤模型评价Eno对猪链球菌抗吞噬能力的影响。采用ELISA和Far-Western blot法鉴定hisSsEno与hFg结合活性。结果成功构建了His标签蛋白原核表达质粒并获得了高纯度的hisSsEno重组表达蛋白。SsEno免疫的抗血清能显著降低强致病的猪链球菌05ZYH33在人全血中的存活能力。hisSsEno能特异地与hFg结合。结论获得了hisSsEno重组表达蛋白,通过抗体阻封和全血杀伤模型发现SsEno是猪链球菌潜在的抗吞噬因子,且hisSsEno能特异性结合hFg。     

中性内肽酶和阿尔茨海默病的基因联系

阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）是导致痴呆的最常见的进行性神经退行性疾病。淀粉样肽（amyloid β peptide,Aβ）在脑中沉积形成老年斑是AD的神经病理学标志之一,Aβ产生与清除的动态平衡是决定老年斑形成的重要因素。     

猪链球菌H因子结合蛋白截短体的表达、纯化及其结合人血清IgG的活性分析

目的构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb-N(45-344aa)和Fhb-C(345-664aa)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,获得高纯度的重组蛋白,鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性。方法以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建His-Fhb-N和His-Fhb-C重组表达质粒,利用亲和层析纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。蛋白G亲和层析柱从健康人血清中纯化人IgG(hIgG),Western blot法和生物膜干涉(BLI)鉴定和分析His-Fhb与hIgG结合的活性。结果成功构建了带His标签的原核表达质粒并获得了His-Fhb-N和His-Fhb-C截短表达蛋白,验证出Fhb特异性地与hIgG结合,且结合区域位于Fhb-N(45-344aa)。结论 Fhb能够结合hIgG,结合区域位于Fhb-N。     

病例讨论教学法在医学遗传学教学中的应用与思考

病例讨论教学法是提高教学质量的新型课堂教学模式之一.结合教学实际,在临床医学、医学检验专业本科医学遗传学教学中尝试采用病例讨论教学法.实践表明,该法可激发学生的学习兴趣,培养其分析问题和解决问题的能力,提高学生在课堂上的主动性和参与性,加深其对医学遗传学理论知识的理解和记忆,切实提高学生的整体素质以更好地适应未来工作的需要.     

猪链球菌H因子结合蛋白截短体的表达、纯化及其结合人血清IgG的活性分析北大核心CSCD

目的构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb-N(45-344aa)和Fhb-C(345-664aa)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,获得高纯度的重组蛋白,鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性。方法以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建His-Fhb-N和His-Fhb-C重组表达质粒,利用亲和层析纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。蛋白G亲和层析柱从健康人血清中纯化人IgG(hIgG),Western blot法和生物膜干涉(BLI)鉴定和分析His-Fhb与hIgG结合的活性。结果成功构建了带His标签的原核表达质粒并获得了His-Fhb-N和His-Fhb-C截短表达蛋白,验证出Fhb特异性地与hIgG结合,且结合区域位于Fhb-N(45-344aa)。结论 Fhb能够结合hIgG,结合区域位于Fhb-N。     

医学生物化学教学改革探讨

生物化学是一门重要的医学基础课程,为了适应医学教育新形势的要求,我们结合生物化学教学实际,从制定教学大纲,优化教学内容,改进教学方法3方面探讨如何进一步深化生物化学教学改革,提高教学质量。     

2型猪链球菌双组分调控系统SalK/SalR抗吞噬机制的初步研究

目的 确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用.方法 透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株△salKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作用,通过THP-MΦ细胞吞噬模型评价猪链球菌的抗吞噬能力.结果 透射电子显微镜观察发现突变株△salKR荚膜消失,革兰氏染色结果和免疫荧光标记实验显示salKR缺失导致更多的猪链球菌被THP-MΦ细胞吞噬,THP-MΦ细胞吞噬模型进一步证实突变株△salKR比野生株更容易被THP-1细胞吞噬.结论 双组分调控系统SalK/SalR通过调控荚膜的形成来抵抗THP-MΦ细胞的吞噬.     

医学细胞生物学教学改革与实践

在医学细胞生物学教学过程中,我们对本课程的教学内容、教学方法和教学模式进行适当优化、调整和改革,结合采用现代媒体技术和网络教学手段,同时兼顾与传统的教学手段的有机结合,从而达到激发兴趣、开拓视野、启发思维,培养创新意识、提高教学效果.     

骨髓间充质干细胞体外诱导分化软骨细胞表型的可行性

目的:探讨在体外特定培养条件下诱导绵羊骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞表型的可行性。方法:实验于2005-09/2006-02在首都医科大学细胞与遗传实验室完成。选择1岁龄骨骼成熟的健康绵羊,雌雄不拘,体质量20～30kg。①采用Percoll分离液,经密度梯度离心法自成年绵羊髂骨骨髓分离得到间充质干细胞,体外培养至第3代时,将骨髓间充质干细胞分为2组,实验组细胞贴壁后更换培养液,以无血清H-DMEM特定培养液诱导(内含转化生长因子β310μg/L、地塞米松10-7mol/L、胰岛素样生长因子I10μg/L、维生素C50mg/L),对照组加含10%胎牛血清的L-DMEM培养液,3d换液一次。②在相差显微镜和透射电镜下观察细胞形态和超微结构,分别在诱导后的第7天、14天取出玻片,进行细胞形态学、组织化学和免疫组织化学分析,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴定间充质干细胞诱导后的软骨细胞表型。结果:①相差显微镜观察实验组诱导14d后,细胞形态由梭形逐渐向多角形、多边形转变,并出现聚集成堆现象,而对照组细胞仍保持均一的梭形,增殖能力非常旺盛。②透射电镜可见实验组诱导14d后的骨髓间充质干细胞周边绒毛增多,胞浆内富含粗面内质网、高尔基体和线粒体,表明细胞合成代谢旺盛。而对照组的骨髓间充质干细胞的细胞壁较光滑,胞核呈条状,核壁有许多皱襞和突起,细胞器也比较丰富。③免疫组织化学观察实验组诱导14d后甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原染色阳性。而对照组诱导14d后甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色则为阴性。结论:骨髓间充质干细胞在特定的诱导条件下能够分化为软骨细胞表型,可为软骨组织工程提供较为理想的种子细胞来源。     

转录组测序技术在精神分裂症中的研究应用

精神分裂症(SCZ)是一类严重的精神疾病, 可严重影响患者的认知能力、社会沟通能力。由于SCZ是一种多基因疾病, 其致病机制目前尚未明确。转录组测序(RNA-seq)技术是研究基因结构、基因差异表达和功能的重要研究手段, 能够一次性对几十万到几百万的脱氧核糖核酸分子进行序列测定, 更加有效地提供生物转录信息。本文主要围绕RNA-Seq的技术原理、技术特点以及其在SCZ相关研究中的应用进行综述, 以期为SCZ的研究提供新思路。