高浓度葡萄糖对培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响

目的 研究高浓度葡萄糖对体外培养兔角膜上皮细胞增殖活性的影响,建立糖尿病性兔角膜上皮细胞培养模型.方法 按照析因设计方法将葡萄糖浓度(25、40、60 mmol/L)和培养时间(24、48、72 h)进行全面组合,应用SunBioTM Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测兔角膜上皮细胞增殖活性,倒置显微镜观察细胞形...     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人羊膜间充质干细胞（HAMSCs）增殖的影响,以探索体外培养HAMSCs的最适条件。方法分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测。实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基。各组孵育48h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度（OD）,重复3次实验。结果 0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;10ng/ml组与0.5、1、5ng/ml组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;10ng/ml组与40、80ng/ml组相比,差异无统计学意义（P=0.067）,表明bFGF促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。     

不同人工泪液治疗白内障超声乳化术后干眼症

目的:探究不同种类人工泪液治疗白内障超声乳化联合人工晶状体植入术后发生干眼症患者的疗效.方法:选取2015-01/2016-06期间我院收治的行白内障超声乳化联合人工晶状体植入术后具有干眼症症状患者280例280眼为研究对象.根据使用的人工泪液种类的不同,分为四组:(1)对照组:术后连续使用妥布霉素地塞米松眼膏涂术眼1wk,3次/d;使用左氧氟沙星滴眼液滴术眼1wk,3次/d;使用普拉洛芬滴眼液1mo,4次/d.(2)聚丙烯酸组:在对照组基础上连续使用聚丙烯酸点术眼1mo,4次/d;(3)聚乙二醇组: 在对照组基础上连续使用聚乙二醇点术眼1mo,4次/d;(4)玻璃酸钠组:在对照组基础上连续使用玻璃酸钠点术眼1mo,4次/d.观察并比较四组患者治疗后1、2、3wk及1mo时的泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌试验(SⅠt)、干眼症状评分、角膜染色评分等.结果:(1)BUT:四组患者治疗后BUT均呈上升趋势,显著高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且聚丙烯酸组、聚乙二醇组及玻璃酸钠组治疗后BUT与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),玻璃酸钠组术后2wk的BUT显著高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)SⅠt:四组患者治疗后SⅠt均呈上升趋势,显著高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),且聚丙烯酸组、聚乙二醇组及玻璃酸钠组治疗后的SⅠt与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其中玻璃酸钠组治疗后SⅠt显著高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)干眼症状评分:四组患者治疗后干眼症状评分均呈下降趋势,与治疗前比较具有统计学差异(P<0.05),且聚丙烯酸组、聚乙二醇组及玻璃酸钠组治疗后评分与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),玻璃酸钠组治疗后3wk评分显著低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05);(4)角膜染色评分:治疗后各组与治疗前比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中1、2wk各组角膜染色评分均无统计学差异(P>0.05),治疗后3wk,1mo玻璃酸钠组角膜染色评分显著低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:人工泪液治疗白内障超声乳化联合人工晶状体植入治疗后干眼症具有较好的临床疗效,含有玻璃酸钠成份的泪液效果最佳.     

视屏终端工作者泪液中基质金属蛋白酶-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1浓度与眼表检查相关性研究

目的 探讨视屏终端(VDT)工作者泪液当中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与眼表检查间潜在相关性.方法 前瞻性横断面研究VDT工作者45例(45只眼),进行眼表疾病指数问卷(OSDI)对眼部症状进行登记.依次行泪膜破裂时间(TBUT)、角膜荧光染色、基础泪液分泌试验(SchirmerI).采集受试者右眼泪液标本,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测泪液眼中MMP-9、TIMP-1的浓度(ng/ml).结果 视屏终端工作者中干眼患病构成比为13.3％,VDT工作者泪液中MM-9浓度与VDT使用时间、角膜荧光染色分级正相关,与泪膜破裂时间负相关.TIMP-1与VDT使用时间、角膜荧光染色分级正相关.结论 测量泪液中MMP-9、TIMP-1浓度具有辅助诊断干眼和量化干眼程度的临床意义.     

玻璃体切割术后持续性继发性青光眼的临床分析

目的:探讨玻璃体切割术后持续性继发性青光眼的可能原因及其治疗方法。方法:回顾性分析2004-01/2010-01在我院行玻璃体切割术后出现持续性继发性青光眼的患者20例20眼,对患者进行眼压监测,行房角镜,超声生物显微镜检查,确定继发性青光眼的原因,并根据不同的原因相应地给予药物或手术治疗,观察治疗后眼压、视力等变化。结果:玻璃体切割术后持续性继发性青光眼患者20例20眼,高眼压发生的时间为玻璃体切割术后2wk～3mo,眼压均在30～50mmHg之间,房角镜及超声生物显微镜示房角关闭15例15眼,房角开放5例5眼;继发性青光眼发生的原因可能为:局部应用皮质类固醇时间过长引起的青光眼3例3眼,新生血管性青光眼4例4眼,术后炎性物质堵塞房角8例8眼,术后前房积血,玻璃体积血堵塞房角3例3眼,另2例原因不明。结论:玻璃体切割术后继发性持续性青光眼引起的原因包括局部应用皮质类固醇时间过长,患者新生血管形成,术后炎性物质或者出血堵塞房角,其治疗方法应根据不同的原因相应地治疗:停用皮质类固醇;810激光睫状体光凝术;小梁切除术或引流阀植入术等。     

人羊膜上皮细胞的体外培养及标记

目的 改良人羊膜上皮细胞的培养方法,检测生长特性,观察DAPI标记HAECs的效率。 方法 取足月剖宫产术后羊膜经胶原酶和胰蛋白酶消化获得上皮细胞。MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞的生长周期,免疫组化对细胞角蛋白进行鉴定。并用DAPI标记,测1、2周荧光阳性率。 结果 培养的HAECs多角形,生长分为缓滞期、对数增长期和平台期,约80%处于细胞周期的静止期G0。细胞角蛋白keratin阳性表达。DAPI标记1周标记率为100%;2周细胞形态好,标记率不变,荧光强度减弱。 结论 本实验方法成功培养人羊膜上皮细胞。DAPI短期标记效果理想。     

人羊膜上皮细胞的诱导分化

目的:建立体外培养及标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的方法并应用原子力显微镜(AFM)从细胞形貌变化上探讨人羊膜上皮细胞向角膜上皮细胞转分化的可视性研究。方法:取足月产人羊膜,采用酶消化法获得HAECs进行原代和传代培养,对培养的细胞进行形态学观察和鉴定;HAECs与兔角膜基质细胞共培养2周,采用CK3+12免疫荧光细胞化学染色鉴定诱导后的细胞;应用AFM分别对共培养前后的人羊膜上皮细胞的表面超微结构进行观察,并与人角膜上皮细胞(HCECs)对比,分析细胞形貌的变化。结果:HAECs体外培养呈铺路石样外观,核/质比率小,连接成片。细胞形态为多角形,角蛋白keratin表达阳性,不表达CK3+12;免疫荧光显示共培养2周的HAECs表达CK3+12;AFM观察,共培养2周后HAECs细胞核中央由山谷样外观转变成类似HCECs的山峰样外观。结论:HAECs可成功进行原代和传代培养,在兔角膜基质细胞诱导培养条件下可向角膜上皮细胞转分化。     

玻璃体切割联合保留前囊膜的晶状体切除治疗糖尿病性视网膜病变

目的　对老年糖尿病性视网膜病变患者采取玻璃体切割联合保留前囊膜的晶状体切除治疗并进行随访观察,以探讨其临床疗效。方法　以我院２０１０年３月至２０１２年８月收治的增生型糖尿病性视网膜病变老年患者５７例（６０眼）为观察对象。所有患眼均采取玻璃体切割联合保留前囊膜的晶状体切除治疗,一期不进行人工晶状体植入而行硅油填充。观察患者术前术后视力变化及并发症发生情况。结果　术后随访１２～２３（１６．４±２．５）个月,患眼术后视力较术前提高者５５眼（９１．７％）,视网膜复位率为１００％。术后有１１眼眼压增高,２眼出现虹膜新生血管,４眼发生局部虹膜粘连及４眼前囊膜３级混浊。结论　玻璃体切割联合保留前囊膜的晶状体切除是处理老年增生型糖尿病性视网膜病变的较好方法。     

视屏终端工作者泪液中基质金属蛋白酶-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1活性研究

目的 观察视屏终端工作者泪液中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitors of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1）活性变化。设计 横断面研究。研究对象 视屏终端工作者45例（45眼）。方法 按照视频终端工作日平均时间将受试者分为三组：分别为<4小时者17例（17眼）、4~8小时者13例（13眼）、>8小时者15例（15眼）。采用眼表疾病指数问卷（OSDI）对眼部症状问卷调查。泪膜破裂时间（BUT）、基础泪液分泌试验（Schirmer I）、角膜荧光素染色检查。使用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测受试者泪液细胞因子MMP-9、TIMP-1的浓度。主要指标 干眼症状评分、BUT、Schirmer I、角膜染色、泪液中MMP-9、TIMP-1的浓度。结果 45例视屏终端工作者中干眼患病率为13.3%,日平均使用时间<4小时组、4~8小时组、>8小时组OSDI得分分别为（16.47±3.28）、（18.77±4.38）、（21.16±3.76）（F=6.11,P=0.005）,>8小时组OSDI得分较<4小时组高（P=0.003）,而4~8小时组与>8小时组和<4小时组OSDI得分无显著差异（P=0.311,0.319）; BUT、Schirmer I、角膜荧光染色得分三组均无显著性差异（P=0.687、0.122、0.714）。泪液中MMP-9、TIMP-1浓度在>8小时组中分别为（9.579±0.48） ng/ml和（3.174±0.29） ng/ml,明显较<4小时组[分别为（2.111±0.17） ng/ml和（0.391±0.06） ng/ml]和4~8小时组高[分别为（7.403±0.06） ng/ml和（2.286±0.28） ng/ml]（P值均=0.000）。<4小时组和4~8小时组泪液中MMP-9（P=0.72、0.13）、TIMP-1（P=0.21、0.37）工作前后浓度无显著差异。>8小时组中,工作后MMP-9、TIMP-1浓度均高于工作前水平（P=0.04、0.01）。结论 视屏终端工作者中干眼发生普遍。视屏终端工作日平均使用时间越长,泪液中MMP-9、TIMP-1浓度越高,提示泪液中MMP-9、TIMP-1浓度升高与干眼发病有关。     

血清胱抑素C、血脂及高敏C反应蛋白与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的 探讨2型糖尿病病人血清胱抑素C(Cys-C)、血脂水平以及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平及病程与2型糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法收集本科室住院的糖尿病病人90例作为研究对象,根据DR病变程度分组,比较不同组别间病人Cys-C、血脂及hs-CRP水平。结果90例糖尿病,DR1期48例,占53.33%,DR2期14例,占15.56%,DR3期10例,占11.11%,DR4期6例,占6.67%,DR5期12例,占13.33%。随着分期的递增,其病程、血糖、糖化血红蛋白、血脂、hs-CRP、Cys-C以及24 h尿蛋白定量(24 h-UAE)水平依次升高,HDL-C水平呈依次降低;Spearman''s相关性分析显示,Cys-C,hs-CRP及病程与DR发生相关,是诱发DR的独立危险因素。结论Cys-C,Hs-CRP及病程是DR发病的独立危险因素,对于确诊为糖尿病的病人,应早期行眼底检查,及早发现视网膜病变,并控制血糖及血脂水平,以延缓DR的病情,改善临床结局。