Nogo与中枢神经再生

Nogo蛋白是抑制成年动物中枢神经再生的髓鞘内活性分子,含有两个完全独立的具有抑制活性的结构域:位于细胞内的amino-Nogo和位于细胞表面的Nogo-66。Nogo蛋白及其受体的发现是中枢神经创伤性损伤修复分子机理研究的重大突破。本文概述Nogo及其受体的结构、功能和它们在中枢神经再生中的作用,并且展望其可能的临床应用前景。     

造血干细胞移植中HLA-II类基因分型影响因素的探讨

目的: 为了准确地进行造血干细胞移植供-受体的HLA - II 类配型,对HLA - II 类基因分型实验的影响因素进行了探讨.方法:采用美国莱姆达公司提供的微量SSPTM HLA-II类PCR-SSP分型试剂盒对400例造血干细胞移植供-受体进行基因分型.结果:采用0.5 %EDTA抗凝的血标本与肝素抗凝的血标本相比,前者的扩增效果好.DNA终浓度为25～200 ng/μl,最佳浓度为100 ng/μl,A260/A280比例在1.65～1.80之间.PCR反应参数是影响反应的重要因素之一.DNA Taq酶的使用量和活性将直接影响反应结果.D-MIX管应保存在-65℃,避免反复冻融,否则将使反应带变弱.结论:HLA-II类基因分型标本的处理和反应条件的优化是影响基因分型效果的因素.     

重组人IL-6D24-PE40外毒素融合蛋白的构建及其生物学效应

目的 构建重组人白细胞介素6－绿脓杆菌外毒素融合蛋白IL－6D24－PE40,以选择性杀伤高表达IL－6受体（IL－6R）的肿瘤细胞和白血病细胞。方法 采用重叠延伸的基因融合技术将N－末端缺失24个氨基酸的重组人白细胞介素6（IL－6D24）cDNA与缺失细胞结合区的绿脓杆菌外毒素PE40基因进行融合,构建IL－6D24－PE40融合基因。利用HB101／pBV220表达系统,实现了IL－6D24－PE40融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,经MonoQ柱进行层析纯化,采用MTS法检测细胞毒活性。结果 IL－6D24－PE40融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到40％－60％。包涵体蛋白经分离、复性及纯化得到纯度＞95％的融合蛋白。Western blot证明,纯化的融合蛋白与IL－6抗体及PEA抗体均发生特异性结合。细胞毒活性检测证实,IL－6D24－PE40融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL－6R的U937细胞,ID50约为250ng/ml,而对不表达IL－6R的CEM细胞无杀伤作用。结论 IL－6D24－PE40融合蛋白能够选择性杀伤高表达IL－6R的靶细胞,有希望成为导向治疗高表达IL－6／IL－6R系统的某些白血病和其他肿瘤的新型导向药物。     

细胞因子-受体介导靶向杀伤白血病细胞的新策略IL-6/IL-6R系统介导重组IL-6-PE40外毒素融合蛋白的特异性杀伤

鉴于白血病细胞异常高地表达IL-6/IL-6R系统,而正常造血细胞几乎不表达抑或微量表达这一事实,我们本研究率先在国际上开展了利用IL-6/IL-6R系统介导重组IL-6-PE40外毒素融合蛋白特异性杀伤高表IL-6R白血病新策略的科学性及可行性的探讨.构建并表达及纯化IL-6-PE40;应用核酸及蛋白质序列软件GOLDKEY系统计算机模拟分析IL-6-Linker-PE40及IL-6-PE40的柔性、抗原性、亲水性及表位等分子生物学特性;建立了表达人IL-6R的大鼠急性早幼粒白血病细胞模型;鉴定了人IL-6R基因在LT12中的表达;分析了人IL-6R基因的整合对LT12-IL-6R~ 细胞模型生物学特征的影响及IL-6-PE40对白血病及正常造血细胞的体外作用和IL-6R的白血病及正常大鼠的体内效应.结果发现:①利用     

移植物抗宿主病发病机理的研究进展

移植物抗宿主病(GVHD)是造血干细胞移植的主要并发症之一,是影响造血干细胞移植长期存活率的重要因素。目前认为造成GVHD组织损伤的首要介质是一种失调分泌的细胞因子网络——这就是有关GVHD发病机制的新学说“细胞因子风暴”学说。本文综述了在急性GVHD、慢性GVHD和同基因GVHD发病机理方面的最新研究进展。     

IL-6D24-Linker-PE40重组毒素的分子生物学特性预测

目的：探讨重组毒素ＩＬ－６Ｄ２４－Ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０融合蛋白及其接头设计的合理性。方法；应用核酸和蛋白质序列分析软件系统－ＧＯＬＤＫＤＥＹ软件，对ＩＬ－６Ｄ２４－Ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０重组毒索融合蛋白柔性、抗原性、亲水性、表位等分子生物学特性进行计算机模拟预测，并做Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ分析进行验证。结果：ＩＬ－６Ｄ２４－Ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０分别保留了ＩＬ－６Ｄ２４和ＰＥ４０的表位特征，没有     

HLA配型在肾移植中的作用

近年来，许多研究中心的研究结果表明ＨＬＡ配型对肾移植的成功起着重要作用，适当延长冷缺血时间并不影响ＨＬＡ匹配好的肾脏的移植效果，ＨＬＡ匹配得好的分享肾比ＨＬＡ匹配得不好的肾存活期要长。ＨＬＡ配型对移植肾的早期存活和长期存活都有重要的影响。ＨＬＡ配型对肾移植结果的影响受病人的致敏性、供肾的质量、病人的年龄以及病人的人种等因素的影响     

HL-60细胞中IL6基因的克隆及鉴定

目的：为探索性构建重组人白细胞介素６－绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＩＬ６－ＰＥ４０）以选择性杀伤高表达ＩＬ６受体（ＩＬ６Ｒ）的白血病细胞,本研究试图从人急性早幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ－６０）中克隆Ｎ－末端缺失２４个氨基酸的人ＩＬ６基因（ＩＬ６ｃＤＮＡ）并构建含此基因的重组质粒。方法：根据ＩＬ６基因序列设计合成可扩增ＩＬ６ｃＤＮＡ的特异性引物;利用基因重组技术,构建含ＩＬ６基因的重组质粒ｐＵＣ－ＩＬ６。结果与结论：本文首次从ＨＬ－６０中扩增出预期４８０ｂｐ的ＩＬ６ｃＤＮＡ,将其克隆至ｐＵＣ１８质粒中,命名为ｐＵＣ－ＩＬ６,并经ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ双酶切电泳及序列分析鉴定加以确证,为进一步构建重组人ＩＬ６－ＰＥ４０奠定了坚实基础。     

IL6/IL6R系统介导重组IL6-PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的新策略

目的:利用细胞因子-受体的特异性结合来靶向杀伤肿瘤是新一代导向杀伤策略.鉴于白血病细胞异常高地表达IL6/IL6R系统,而正常造血细胞几乎不表达抑或微量表达这一事实,我们率先在国际上开展了利用IL6/IL6R系统介导重组IL6-PE40外毒素融合蛋白特异性杀伤高表IL6R白血病新策略的科学性及可行性的探讨.方法:1. IL6-PE40的构建、表达及纯化:常规进行RNA提取、RT-PCR、质粒提取、酶切、回收、连接、转化、鉴定IL6、PE40及IL6-PE40融合基因的序列分析等.将所构建的含IL6-PE40重组质粒在大肠杆菌表达,用HPLC半制备分离其产物,SDS-PAGE及Western-blot鉴定.IL6-PE40的细胞毒活性采用[3H]-亮氨酸掺入U266骨髓瘤细胞检测.