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目的EGFR靶向治疗和AAV介导的基因治疗在胰腺癌治疗方面具有广泛前景。本实验将上述两种手段相结合,构建表达人抗EGFR单链可变区抗体的rAAV载体,并筛选出对抗EGFR治疗敏感的胰腺癌细胞株。方法以包含人IX因子基因的rAAV载体中的FIX基因替换成目的基因,转染293细胞,WesternBlot法检测目的蛋白:同时将C225作用于六株胰腺癌细胞,通过CCK一8法测定生长曲线,P1染色法及AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡。结果WesternBlot法检测到目的条带;生长曲线显示C225仅对AsPC-l的生长有明显的抑制作用(P〈0.01),Annexin V-FITC试剂盒可检测C225引起ASPSl细胞的早期凋亡(P〈0.05)。结论rAAV载体构建成功,并在293细胞中获得表达;ASPSl对C225的敏感性明显高于其它五株胰腺癌细胞。 相似文献
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目的 针对表皮生长因子受体(EGFR)的腺相关病毒(AAV)介导的靶向治疗作为一种新的治疗方式具有广阔的前景.实验通过对胰腺癌细胞株Aspc-1进行抗EGFR抗体的重组腺相关病毒(rAAV-anti EGFR)治疗及联合放疗、吉西他滨(简称化疗)等综合治疗手段,探索rAAV介导抗EGFR单链抗体对胰腺癌治疗的效果.方法 分别通过单纯化疗、单纯放疗、rAAV-anti EGFR治疗,rAAV-anti EGFR治疗联合化疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗干预胰腺癌细胞株Aspc-1及裸鼠移植瘤,检测细胞或移植瘤的凋亡率以及移植瘤生长情况.结果 体外实验提示,以上处理方式使肿瘤细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗细胞凋亡率要高于rAAV-anti EGFR治疗、单纯放疗或单纯化疗(P<0.05).体内实验提示,rAAV-anti EGFR治疗后,肿瘤生长明显受到抑制(P<0.05),且与放疗和化疗均有协同作用;rAAV-anti EGFR治疗后,组织中凋亡相关Caspase-3活性蛋白表达细胞数要显著高于对照组(P<0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放疗或化疗其凋亡蛋白表达细胞数要多于单纯治疗组(P<0.05).结论 rAAV-anti EGFR治疗在体内外均有良好的抗胰腺癌效应,其联合放化疗疗效优于单纯放疗或单纯化疗,且该病毒载体与化疗及放疗具有协同作用. 相似文献
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将本室改造的毕赤酵母接入100ml BMGY培养基培养24h,离心收集酵母细胞并重悬于100ml BMMY培养基,每12小时加入终浓度为0.5%甲醇诱导表达具有内在金属螯合位点的突变型人膜联蛋白V。48h后离心沉淀培养基,获得的上清经硫酸氨沉淀、分子筛分离纯化蛋白;SDS—PAGE鉴定其相对分子质量为36000,并测定其纯度为95%。纯化后的蛋白加入终浓度为1mmol/L二硫苏糖醇,37℃保温15min恢复活性, 相似文献
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将本室改造的毕赤酵母接入100ml BMGY培养基培养24h,离心收集酵母细胞并重悬于100ml BMMY培养基,每12小时加入终浓度为0.5%甲醇诱导表达具有内在金属螯合位点的突变型人膜联蛋白V。48h后离心沉淀培养基,获得的上清经硫酸氨沉淀、分子筛分离纯化蛋白;SDS-PAGE鉴定其相对分子质量 相似文献
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川芎哚及其类似物的抗血小板与抗血栓作用 总被引:4,自引:0,他引:4
为了研究川芎哚 (PL)及其类似物 (T 1~T 17)的抗血小板和抗血栓作用 ,T 1~T 17按Foye法进行体外血小板聚集实验 ,计算血小板聚集抑制率 ,从中选出T 1,T 2 ,T 3,T 4 ,T 6 ,T 8,T 11,T 12及T 14按Chandler法进行实验性血栓形成实验 ,计算血栓形成抑制率 ,并与川芎嗪 (Lig)进行比较 .结果表明 :所有合成药物均有一定程度的抗血小板作用 ,其中T 4和T 6的抗血小板作用强于Lig ;各试验药物均有一定程度的抗血栓作用 ,其中T 4 ,T 6 ,T 11,T 12及T 14抗血栓作用强度大于Lig .由此可见 ,PL及其类似物具有抗血小板和抗血栓作用 ,其中T 4和T 6的作用强于Lig ,但PL的作用弱于Lig 相似文献
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基因重组人表皮生长因子在兔体、眼内的分布与排泄实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)是相对分子量6040的小肽,生物作用极广,具有诱导上皮生长、刺激血管形成、抑制胃酸的分泌、调节内分泌、促进发育、加速伤口及溃疡愈合等作用,它的临床治疗学潜力正在研究。近年来已通过基因工程在大肠杆菌或酵母中制备大量EGF,目前有关EGF的基础与临床研究国外报道较多,但有关EGF在体内的分布、代谢、排泄及其药代动力学过程研究较少,国内尚未见报道。本文对国产EGF在动物体内及眼内的分布、排泄等做了较为系统的研究,为今后的临床应用提供必要的参考资料。1… 相似文献
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目的测定川芎哚(川芎Ⅲ号碱,pedolyrine)的药代动力学参数。方法以[2-15N]川芎哚为内标准及GC-MS的SIM(选择性离子监测)为检测手段,定量测定大鼠体内川芎哚的含量及其药代动力学参数。结果川芎哚在大鼠体内呈二室模型分布,其药代动力学参数为:t1/2a=0.31h,t1/2=4.62h,tl/2ka=0.10h,tmax=0.34h,Cmax=18.74ng·mL-1,K12=0.82h-1,K21=0.38h-1,K10=0.29h-1,Vb=108.16L·kg-1,AUC=98.54ng·h.mL-1。结论本法灵敏度高、特异性强及重现性和准确性好,为临床应用提供了科学依据。 相似文献