脂氧素抑制内毒素诱导大鼠原代肺成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E2的表达

目的 探讨脂氧素对大鼠原代肺成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E2表达的影响.方法 分离、纯化、鉴定得到大鼠肺成纤维细胞,用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预建立成纤维细胞体外急性炎症模型,并利用细胞增殖/毒性检测试剂MTT摸索出成纤维细胞急性炎症模型的最适LPS质量浓度和药物干预时间.分别应用不同浓度(0、100、200、400 nmol/mL)的脂氧素作用于经过LPS诱导的体外培养原代肺成纤维细胞.采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液前列腺素E2(PGE2)水平,同时应用Western blot检测原代肺成纤维细胞环氧合酶(COX-2)蛋白的表达.结果 用1 μg/mL LPS干预体外培养的原代肺成纤维细胞6h能建立较为合理的急性炎症模型.脂氧素能抑制LPS诱导的原代肺成纤维细胞环氧合酶(COX-2)蛋白的表达.对照组、LPS组、LPS组与LPS+脂氧素组测PGE2质量浓度分别为55.84 pg/mL、411.73 pg/mL、307.07 pg/mL,LPS组与LPS+脂氧素组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 脂氧素能抑制LPS诱导的原代肺成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E2的表达,并呈剂量依赖性.     

脂氧素A4抑制内毒素诱导的人支气管上皮细胞环氧合酶2及前列腺素E2的表达

目的: 探讨脂氧素A₄对人支气管上皮细胞(HBECs)环氧合酶2(COX-2)表达的影响。方法: 应用不同浓度(0.1、1、10 mg/L)的内毒素(LPS)刺激HBECs 9 h,或者用1 mg/L LPS分别刺激HBECs不同时点(3 h、6 h、9 h)后,测定HBECs的COX-2 mRNA表达和细胞上清液前列腺素E₂(PGE₂)水平。应用不同浓度 (0、100、400 μmol/L) 的脂氧素A₄作用于经过LPS(1 mg/L)刺激培养9 h的HBECs,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液PGE₂的水平, 同时分别应用RT-PCR和Western blotting分别检测HBECs COX-2 mRNA及蛋白的表达。结果: LPS刺激培养条件下HBECs的COX-2 mRNA表达及其上清液PGE₂水平增加,并呈时间、剂量依赖性。脂氧素A₄能抑制LPS刺激培养HBECs COX-2蛋白和mRNA的表达及上清液PGE₂的水平,并呈剂量依赖性。结论: 脂氧素A₄能抑制LPS诱导的HBECs COX-2表达及上清液PGE₂的水平。     

大鼠肺成纤维细胞的体外培养及急性炎症模型的建立

目的:探讨大鼠肺成纤维细胞体外培养及急性炎症模型建立的方法.方法:采用胰酶消化法、差速贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞,然后采用H-DMEM培养液进行细胞培养.采用免疫荧光法对所分离的细胞进行鉴定.采用脂多糖(LPS)干预建立成纤维细胞体外急性炎症模型,实验分组:空白组、0.1 μg/mL LPS组、1μg/mL LPS组、10 μg/mL LPS组,并利用细胞增殖/毒性检测试剂(MTT)在干预后3、6、9 h分别测定吸光度(OD)值.结果:成纤维细胞体外培养24 h后,镜下可见组织块周边有长梭型细胞爬出,72 h后生长迅速,4d接近融合.经免疫荧光测定,肺成纤维细胞波形蛋白(vimentin)阳性,CD31阴性.在干预后各时间段中,1 μg/mL LPS组测得的OD值高于其他各组,在1μg/mL LPS组中,干预后6h测得的OD值高于其他各时间段,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:该法可以体外培养出大鼠肺成纤维细胞,用浓度为1 μg/mL的LPS干预体外培养的成纤维细胞6h能建立较为合理的急性炎症模型.     

消退素D1抑制内毒素诱导大鼠原代肺成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E2表达的研究

目的 探讨消退素D1对原代肺成纤维细胞(LF)环氧合酶-2(COX-2)及前列腺素E2(PGE2)表达的影响.方法 分离、纯化、鉴定得到LF,用内毒素(LPS)干预建立成纤维细胞体外急性炎症模型,并利用细胞增殖/毒性检测试剂MTT检测出成纤维细胞急性炎症模型的最适LPS浓度和药物干预时间.分别应用不同浓度(0、10、50及100 nmol/ml)的消退素D1作用于经过LPS诱导的体外培养原代LF.采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液PGE2水平,同时应用Western-blot检测原代LF COX-2蛋白的表达.结果 用1μg/ml LPS干预体外培养的原代LF6h能建立较为合理的急性炎症模型.消退素D1能抑制LPS诱导的原代LF COX-2蛋白的表达及上清液PGE2水平,并呈剂量依赖性.结论 消退素D1能抑制LPS诱导的原代LF COX-2及PGE2的表达.     

麻醉医师在高危产妇救治中的角色和作用

随着我国二孩政策的开放和高龄产妇的增加,凶险性前置胎盘、妊娠合并心脏病和羊水栓塞作为产妇死亡的三大因素,其发生率逐年攀升,给麻醉医师带来了极大的挑战。围术期麻醉处理得当与否,与孕产妇的病死率息息相关,因此提高对上述3类高危产妇麻醉管理水平至关重要。加强产科、麻醉科、心内科、心外科、重症医学科、新生儿科等诸多学科之间的沟通和有效合作是救治妊娠合并高危孕产妇成功的关键。麻醉医师在高危产妇救治团队中一直有着举足轻重的作用,特别是在有经验的麻醉医师帮助下,能有效降低产妇死亡率,提高救治成功率。本文就麻醉医师在上述3类高危产妇的救治中扮演的“角色”和起到的作用作一述评。     

硬脊膜穿破硬膜外阻滞技术在剖宫产手术中的麻醉效果及安全性

目的探讨硬脊膜穿破硬膜外阻滞（DPE）技术用于剖宫产手术中的麻醉效果及安全性。方法选取2021年6月至2022年9月在温州医科大学附属第二医院择期行剖宫产手术的产妇135例。采用随机数表法分为硬膜外阻滞（EP）组、DPE组和蛛网膜下腔-硬膜外联合阻滞（CSE）组,每组各45例。硬膜外穿刺成功后,EP组作硬膜外置管,DPE组用25G腰麻针刺破硬脊膜到达蛛网膜下腔（见脑脊液流出）,拔掉腰麻针,作硬膜外置管,两组均硬膜外给予2%利多卡因5mL,观察5min无全脊麻后根据情况向硬膜外追加全量局麻药物（0.75%罗哌卡因8~12mL）;CSE组蛛网膜下腔给予0.5%罗哌卡因12.5~15.0mg,并作硬膜外置管。比较3组产妇术中缩宫素用量、输液量、出血量以及新生儿1、5minApgar评分;3组产妇麻醉效果（包括感觉阻滞平面、牵拉反应程度与松弛程度评分）;3组产妇在入手术室、消毒铺巾、切皮、胎儿娩出、清理腹腔、手术结束时的收缩压（SBP）、心率（HR）的变化;3组产妇不良反应、去甲肾上腺素总用量、丙泊酚使用情况。结果3组产妇术中缩宫素用量、输液量、出血量以及新生儿1、5minApgar评分比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）;感觉神经阻滞平面到达T6的时间与给药至切皮时间,EP组＞DPE组＞CSE组（P＜0.01）,CSE组和DPE组感觉神经最高阻滞平面高于EP组（P＜0.01）,且CSE组和DPE组术中牵拉反应Ⅰ级者明显多于EP组（P＜0.01）,Ⅲ级者明显少于EP组（P＜0.01）;CSE组和DPE组术中松弛程度评分明显高于EP组（P＜0.01）;CSE组在消毒铺巾时SBP低于EP组与DPE组（P＜0.01）,HR高于EP组与DPE组（P＜0.01）;CSE组总不良反应发生率明显高于EP组与DPE组（P＜0.01）,EP组和DPE组去甲肾上腺素总用量低于CSE组（P＜0.01）,且EP组丙泊酚使用率明显高于CSE组与DPE组（P＜0.05）。结论DPE组较EP组起效更快,镇痛效果确切,较CSE组术中血流动力学指标更稳定,不良反应更少,值得临床推广。     

保护素对原代肺成纤维细胞炎症及纤维化增殖的影响

目的：探讨保护素（PDX）对脂多糖（LPS）诱导的原代肺成纤维细胞环氧合酶-2（COX-2）表达的影响及对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导其纤维化增殖转化的影响。方法：分离、纯化、鉴定得到小鼠肺成纤维细胞,用LPS诱导建立成纤维细胞体外炎症模型,用TGF-β1诱导建立体外纤维化增殖模型。PDX分别作用于经过LPS或TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞。采用细胞浓度试剂盒测定细胞增殖,采用实时定量PCR测定基因表达,采用ELISA法检测细胞上清液前列腺素E2（PGE2）水平,应用Western blot检测COX-2蛋白的表达。结果：采用10 ng/mL TGF-β1刺激诱导体外培养的原代肺成纤维细胞48 h能建立较为合理的体外纤维化增殖模型。PDX抑制LPS诱导的原代肺成纤维细胞COX-2蛋白的表达及上清液PGE2水平,同时可能通过剂量依赖方式抑制TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞的增殖。PDX抑制TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞collagen 1α1、collagen 1α2的合成以及α-SMA、纤连蛋白的基因表达。结论：PDX能抑制LPS诱导的小鼠原代肺成纤维细胞COX-2表达及PGE2水平,同时能抑制TGF-β1诱导的小鼠原代肺成纤维细胞纤维化增殖、胶原蛋白合成及向肌成纤维细胞转化。