基因分型技术首次应用于类孟买型家系ABO基因的研究

目的 探计将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题。方法 报告首次在国内用基因分型技术用于一个类孟买型家系5口人ABO基因多态性的研究。在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上，采用快速盐析法提取外周血中的DNA，用PCR—SSP法扩增ABO血型等位基因。结果 一家5人中，兄弟3人均为类孟买型，ABO基因分型分别为A102B、A102B、Al20O1，而其父母血型基因与血清学血型相符合。结论 ABO PCR—SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术，与血型血清学相比有着显优势。     

糖尿病视网膜病变与HLA-A、B和DRB1基因相关性的研究

目的研究HLA—A、B和DRB1基因与糖尿病视网膜病变的相关性。方法收集48名临床诊断为糖尿病视网膜病变（DR）患者的血样，采用rSSO HLA流式磁珠分型方法进行HLA—A、B和DRB1基因定型．统计DR患者HLA—A、B和DRB1三个基因座的基因频率；并引用以往本实验室调查的汉族健康对照人群的HLA基因频率数据，采用Woolf法计算相对危险度值。结果48例DR患者中。HLA—A、B基因频率的分布与正常对照组无显著差异．而DR患者HLA-Ⅱ类DRB1基因．DRB1＊01基因频率显著高于正常对照组．而DRBI＊12基因频率显著低于正常对照人群，计算RR值分别为5．32和0．34。结论DR患者HLA—A、B基因频率分布与正常对照人群无显著差异，但HLA—DRB1基因与DR具有相关性。     

深圳汉族人群HLA-Cw，-DQB1基因座等位基因的多态性

背景：HLA复合体是极其复杂的遗传系统，对其多态性的研究在法医学个体识别和亲权鉴定、群体遗传学、移植免疫、疾病相关等医学领域有重要的应用价值。 目的：了解HLA-Cw，-DQB1基因座的等位基因在深圳汉族人群中的分布规律。 设计、时间及地点：样本基因型的统计学分析，于2007-01/2008-06深圳市血液中心免疫遗传研究室完成。 材料：样本来自中国造血干细胞捐献者资料库深圳地区志愿捐献者，使用EDTA-K2抗凝管采集外周血。 方法：采用聚合酶链式反应-序列测定方法对深圳地区226名无关供者HLA-Cw，-DQB1基因座的2，3外显子进行序列测定与分析。等位基因频率采用直接计数法计算，Hardy-Weinberg平衡检验采用x2检验。 主要观察指标：样本HLA-Cw，-DQB1基因座的基因型。 结果：226个样本中共检测到25个Cw等位基因。其中Cw*0102，Cw*0702的频率最高（0.1881），其他频率较高的等位基因依次为Cw*0304，Cw*0302，Cw*0401及Cw*0801，Cw*0303，Cw*0602。该位点基因型观察值与期望值经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡定律（x2=116.00，u=1.78, ν=91，P > 0.05）。226个样本中共检测到17个DQB1等位基因。其中DQB1*0301占绝对优势，其基因频率为0.2124。其他频率较高的等位基因依次为DQB1*0303，DQB1*0601，DQB1*0502，DQB1*0602，DQB1*0302，DQB1*0401。该位点基因型观察值与期望值经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡定律（x2=101.34，u=0.78,ν=91，P > 0.05）。经计算HLA-Cw位点的杂合度为0.887 8，个体识别力为0.976 9，非父排除率为0.773 1，多态性信息含量为0.875 7；HLA-DQB1位点的杂合度为0.889 4，个体识别力为0.976 2，非父排除率为0.753 3，多态性信息含量为0.965 9。 结论：深圳汉族人群HLA-Cw及DQB1基因座是高度杂合、具有较高鉴别力和丰富信息含量的遗传标记，能较好地反映群体遗传特征。     

中国人群HLA-DRB1*1454等位基因和HLA-DRB1第3外显子鉴定意义

目的：在中国人群中鉴定人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）DRB1*1454等位基因,分析供受者HLA-DRB1第3外显子DNA序列信息对器官移植、细胞移植及人类遗传学研究的重要现实意义。 方法：应用聚合酶链反应-直接测序分型方法对58例等待造血干细胞移植供受者进行人类白细胞抗原测序分型,1 268例广东地区随机健康供者采用聚合酶链式反应-序列特异寡核苷酸探针反向杂交法进行HLA-DRB1中高分辨基因分型,部分模棱两可结果采用聚合酶链式反应-序列特异引物PCR-SSPHLA-DRB*14高分辨方法分型法。 结果：在1 268例广东地区随机健康人群中检出HLA-DRB1*1403,1406,1410,1412,1418,1425和1454等位基因,HLA-DRB*1401/1434/1454等位基因模棱两可结果的8例样本被确认为HLA-DRB1*1454等位基因,DRB1*1454等位基因可能是广东人群最为常见的HLA-DRB1*14基因。中国人群HLA-DRB1*14第3外显子存在多态性。 结论：中国人群HLA-DRB1*1454等位基因确认了DRB1等位基因第3外显子多态性的存在,进一步明确了开展中国汉族人群及少数民族HLA-DRB1第3外显子检测的意义。     

无偿捐献外周血造血干细胞后供者健康状况的研究

目的研究皮下注射粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员剂及捐献外周血造血干细胞(PBSC)对无关健康供者的影响.方法28名外周血造血干细胞捐献者在采集前1～5天,皮下注射粒细胞集落刺激因子5mg/kg,连续1～5天皮下注射,观察G-CSF动员和采集时供者出现的不良反应;并对供者在G-CSF动员前、外周血干细胞采集后的健康状况及血常规进行分析.结果经G-CSF动员并采集了干细胞的28名供者中,23名供者(81.4%)未出现任何不良反应;5名供者(18.6%)出现轻微不良反应,并于采集时或采集后一周内自行消失.28名供者捐献造血干细胞后,经健康状况咨询和体格检查,结果未见异常.供者的血常规大多在捐献的15天后恢复到基础水平,与G-CSF动员前无显著性差异(P＞0.05);但血细胞计数基础值偏低的供者,采集后白细胞和血小板恢复较慢.结论本研究通过对供者捐献造血干细胞后的体检、血常规检测和随访,结果表明无偿捐献造血干细胞对供者是安全的.     

短串联重复序列检测在异基因造血干细胞移植植入状态中的应用

背景:移植后造血干细胞植活的判断主要依赖于体内各种遗传标记,其在敏感性和有效性方面各不相同,故亟待建立一种鉴别力强、敏感性高、不受性别限制的检测方法。目的:观察异基因造血干细胞移植供受者移植前及受者移植后不同时间段的血样DNA短串联重复序列遗传位点检测情况。设计:观察测量实验。单位:深圳市血液中心输血医学研究所免疫遗传重点实验室。对象:选择2004-02/2005-12在深圳市血液中心输血医学研究所免疫遗传实验室配型成功并进行造血干细胞移植的18对供受者血样,18例患者中,男10例,女8例,平均35岁。接受血缘关系供者移植6例,无关供者移植12例。所有受试对象均对检测项目知情同意。方法:采用荧光标记复合扩增短串联重复序列(STR)检测技术,对18例进行造血干细胞移植的血液病患者移植后的系列血样及移植前供、受者的血样进行15个STR位点和1个性别位点的检测,找出供受者间的差异基因,观察移植后供者的STR基因在受者体内的植入情况及变化过程,找出最早检测到供者STR基因的时间及完全嵌合体最早出现的时间。主要观察指标:①观察移植前供受者差异基因。②供者STR基因及完全嵌合体最早出现时间。结果:供受者18对均进入结果分析。①供受者中能区分出彼此差别的平均STR差异位点数为12.4(8～15)个。②患者移植后最早可检测到供者STR基因的平均时间为8(5～14)d,由受者型向完全供者型转化的平均时间为14(9～23)d。植入状态由供受者嵌合型转为完全供者嵌合型。结论:荧光标记复合扩增STR检测方法可精确地描述异基因造血干细胞移植植入状态及其演变过程,可为临床提供一个准确、可靠的实验依据。     

无关供者骨髓移植中HLA-CW基因与急性GVHD相关性的初探

目的探讨无关供者骨髓/外周血造血干细胞移植(BMT/PBSCT)后的急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生与供/受者HLA-CW等位基因匹配程度的相关性.方法选择HLA-A、B、DRBI相同、并业已进行BMT/PBSCT的无关供/受者对,采用PCR-SSP方法对供受者进行HLA-CW位点的高分辨基因定型,并收集移植后患者的临床资料,对HLA-CW基因与aGVHD的相关性进行回顾性分析.结果观察4例HLA-A、B、DRBI相同的移植患者,即急淋(ALL)患者1例、慢性髓细胞白血病(CML)患者2例、急性髓细胞白血病(AML)患者1例,HLA-CW等位基因完全相合、半相合和完全不相合的患者分别为1例、2例和1例,结果1例CML及1例AML患者中出现Ⅲ度aGVHD.结论无关供者骨髓/外周血造血干细胞移植中,供受者HLA-CW等位基因匹配程度对急性GVHD具有重要影响,并建议对HLA-CW基因进行常规检测.     

壮族非亲缘男性个体中9个短片段Y-STR基因座遗传多态性的研究

本研究探讨中国最大少数民族壮族Y染色体特异短串联重复序列（Y-STR）单倍型的遗传多态性。采用多重PCR扩增和ABIPrism^TM3100基因测序仪荧光检测方法，对85名壮族非亲缘男性个体的9个短片段长度Y—STR基因座，进行基因频率和单倍型频率的调查。结果表明：在85名非亲缘男性个体中，除DYS426基因座多态性较低，其余8个基因座的GD值的分布在0．4387—0．8129之间。9个Y—STR基因座的单倍型共有70种．单倍型多样性达0．9926。结论：壮族非亲缘男性个体Y—STR单倍型的遗传多态性丰富，与我们以往的南方汉族非亲缘男性群体遗传资料相比较，具有显著的差异。     

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨等位基因频率分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1 5位点在高分辨基因分型水平上的等位基因频率特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用直接计数法计算各位点基因频率。结果在718名捐献志愿者中,共检出28个HLA-A等位基因、61个HLA-B等位基因、30个HLA-C等位基因、40个HLA-DRB1等位基因、18个HLA-DQB1等位基因;其中HLA-A位点最常见等位基因为A*1101(21.66%)、A*2402(16.37%)、A*0201(13.79%);HLA-B位点最常见等位基因为B*4001(11.49%)、B*4601(9.54%);HLA-C位点最常见等位基因为Cw*0702(15.74%)、Cw*0102(15.32%)、Cw*0304(11.56%);HLA-DRB1位点最常见等位基因为DRB1*0901(14.69%)、DRB1*1501(12.40%)、DRB1*0701(9.89%);HLA-DQB1位点最常见等位基因为DQB1*0301(20.54%)、DQB1*0303(15.81%)、DQB1*0601(10.79%)。结论本研究在高分辨基因分型水平提供了一套有关中国人群HLA-A,-B,-C,-DRB1和-DQB1 5位点基因频率数据。     

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨单体型频率初步分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB15位点在高分辨基因分型水平上的单体型频率及连锁不平衡特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用Arle-quin3.1软件以最大似然法分析单体型频率。结果双座位连锁不平衡分析显示,HLA-C与HLA-B、HLA-DRB1与HLA-DQB1呈现较为显著的连锁不平衡;多位点单体型频率分析结果显示,最常见的2、3、4、5位点单体型分别为:A*0207-B*4601(7.34%)、Cw*0102-B*4601(8.71%)、B*1302-DRB1*0701(6.19%)、DRB1*0901-DQB1*0303(14.27%)、A*3001-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、A*0207-B*4601-Cw*0102(7.06%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(6.12%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(5.29%)。结论本研究提供了中华骨髓库718名捐献者HLA5位点高分辨单体型频率遗传学数据,将为临床寻找HLA匹配的无关供者、法医学鉴定、HLA与疾病相关研究等提供分子遗传学参考。