人骨髓间充质干细胞分离方法的比较

目的:探讨人骨髓间充质干细胞原代培养过程中最佳的分离方法。方法:留取暨南大学第一附属医院骨科2004-10/2005-06健康供者的骨髓10份,分别采用羟乙基淀粉沉淀法,淋巴细胞分层液分离法,氯化铵裂解红细胞法,全骨髓法四种方法分离骨髓有核细胞,观察四种方法在细胞出现伸展的时间,原代培养的时间方面的差异,流式细胞仪对培养得到的间充质干细胞进行表面标志检测。结果:①在其他条件相同的情况下,羟乙基淀粉沉淀法10份标本全部培养成功,淋巴细胞分层液分离法10份中有9份得到间充质干细胞,氯化铵裂解红细胞法10份中仅1份得到间充质干细胞,全骨髓培养法10份中有3份得到间充质干细胞。②羟乙基淀粉沉淀法细胞出现伸展和原代培养的时间短于淋巴细胞分层液分离法犤乙基淀粉沉淀法:羟(54.0±3.0h,(12.4±1.4)d;淋巴细胞分层液分离法:(74.0±5.2)h,(14.6±0.9)d,)P<0.01犦③流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面表达CD13,CD29,。CD44,不表达造血细胞的标志CD45,CD34。结论:经比较羟乙基淀粉沉淀法明显优于其他分离方法,在人骨髓间充质干细胞的培养过程中建议使用此种物理沉降方法分离骨髓有核细胞。     

肺耐药蛋白基因和多药耐药相关蛋白基因在急性白血病骨髓细胞中的表达及临床意义

为了研究肺耐药蛋白基因和多药耐药相关蛋白基因在急性白血病骨髓细胞中的表达及其临床意义，采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测初治急性白血病、复发难治白血病及正常对照骨髓细胞肺耐药蛋白基因(lung resistance protein，LRP)及多药耐药相关蛋白基因(multidrug resistance protein，MRP)的表达。结果显示，正常对照骨髓细胞LRP表达阴性，初治急性髓细胞白血病(AML)组及复发难治组LRP表达水平与正常对照组相比明显升高，增高的LRP mRNA水平与对初次化疗不敏感及预后差有关，LRP表达阳性患的完全缓解率明显低于表达阴性。经直线相关分析发现，LRP表达与MRP表达水平成正相关。结论：LRP可能是一项新的耐药指标，其高表达与急性髓细胞白血病的疗效及预后密切相关，同时检测LRP和MRP的表达可以指导治疗，估计预后。     

人骨髓源干细胞向胰岛素分泌细胞分化(英文)

目的：探讨人骨髓源干细胞向具有功能的胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法：从人骨髓分离间充质干细胞。采用表皮生长因子、β-巯基乙醇和高糖培养基诱导其向胰岛素分泌细胞分化。经诱导后,用RT-PCR检测胰岛β细胞相关基因的表达,并采用免疫细胞化学染色检测胞浆胰岛素的表达。此外,诱导后细胞分泌的胰岛素定量及胰岛素释放实验将采用化学发光法进行检测。将经诱导后的细胞移植到糖尿病小鼠的右侧肾被膜下。在移植后16 d持续检测小鼠的血糖水平,最后对右侧肾脏进行免疫组化检测。结果：经诱导后,细胞能表达胰岛β细胞相关基因;免疫细胞化学染色也能检测到胞浆有胰岛素的表达;而且这些细胞能对糖刺激有所反应。细胞被移植到糖尿病小鼠的肾被膜下,能起降血糖作用。其肾脏的免疫组化显示：肾被膜下有胰岛素阳性细胞。结论：人骨髓源干细胞具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能,这将为糖尿病细胞治疗提供丰富的细胞来源。     

肺耐药蛋白基因在多发性骨髓瘤中的表达及意义

到目前为止 ,多发性骨髓瘤 (MM )的治疗仍以化疗为主 ,但是治疗效果并无质的飞跃 ,多药耐药的产生可能是一条重要的原因 ,肺耐药相关蛋白 (LRP)基因于 1995年被克隆并定位 ,我们用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测了 4 1例MM患者LRP基因的表达 ,探讨其表达与化疗反应及预后的关系 ,旨在进一步研究MM的耐药机制 ,指导其治疗。一、资料与方法1.对象 :所有标本均收集自 1998年 1月 1日～ 2 0 0 0年5月 1日青岛医学院附属医院门诊及住院患者 ,其中初治MM 2 1例 ,男 13例 ,女 8例 ,年龄 2 8～ 78岁 ;复治MM 2 0例 ,男 10例 …     

光敏化姜黄素对人胃腺癌MGC-803细胞的影响及其在细胞内的分布

目的:探讨光敏化姜黄素对人胃腺癌MGC-803细胞的影响及其细胞内的分布情况.方法:用MTT法检测细胞株的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,荧光显微镜观察细胞核形态;激光共聚焦显微镜观察姜黄素在细胞内的分布.结果:光敏化姜黄素作用于MGC-803细胞12、24、48h后,MTT法检测细胞的抑制率分别为35.53%±3.52%、40.17%±2.01%、44.93%±3.61%;凋亡率分别为20.32%±3.07%、22.46%±1.51%、26.58%±2.67%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).光敏化姜黄素作用48h后能见明显的凋亡小体.激光共聚焦显微镜下观察光敏化姜黄素发出的黄色荧光主要在细胞质膜、核膜呈聚集性分布,散在分布于其他亚细胞结构,细胞核分布较少.结论:光敏化姜黄素能抑制胃癌细胞的生长及凋亡,具有显著的光动力学效应,随作用时间的延长而逐渐增加.光敏剂主要分布于细胞质膜和核膜,散在分布于其他亚细胞结构,细胞核分布较少.     

优化整合医学教学方法培养"会学"型医学人才

进入临床学习阶段后，在内科学血液病的教学中将传统教学方法与以问题为基础教学方法相结合，既可以保证学生掌握扎实的基本功，又可以激发学生的学习热情，提高学生的自学能力，真正培养出“会学”型医学人才，更有利于医学生在未来的职业生涯中完善提高自己，不失为医学教学的一种良好形式。     

以腹部症状为首发表现的过敏性紫癜21例临床分析

过敏性紫癜表现典型者诊断不难 ,但个别病人紫癜发生前以腹部症状及肾损害等症状为首发表现 ,常不能及时进行诊断 ,很容易造成误诊。现将我们遇见的以腹部症状为首发表现而未能及时进行诊断的 2 1例病人报告如下。1　临床资料1 .1　一般资料　 2 1例中男 1 2例 ,女 9例 ;年龄 1 2～ 5 9岁。年龄 2 0岁以下者 1 5例 ,占 71 % ;发病前 1～ 3周有上呼吸道感染史者 9例 ,占 42 %。其他各例未问出与该病有关的特殊病史。所报病例均符合国内统一诊断标准[1] 。1 .2　临床表现　以腹痛、便血为首发表现者 1 1例 ,男 6例 ,女 5例 ;年龄 1 6～ 44岁 ;…     

以未定性单克隆免疫球蛋白病为首发表现的急性淋巴细胞白血病1例

病例报告王某，男，１７岁，患者２月前始发热，乏力，食欲不振，无出血表现，经当地医院治疗无效。半月前因上述症状加重，伴双侧小腿肚疼痛来我院。平素健康，无长期发热与肝炎、结核病史，无外伤手术史，无药物过敏史。查体：中度贫血貌，心律整，心率１００次／分，双...     

多种生长分化因子体外联合诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞的分化

背景:肝细胞自身增殖能力有限,近几年关于各类干细胞向肝细胞分化的成功报道很多,包括胚胎干细胞、骨髓细胞、胰腺干细胞、神经干细胞及各种来源的间充质干细胞等.目的:探讨应用多种生长分化因子体外联合诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞分化的可行性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-10/2006-04在暨南大学医学院血液病研究所完成.材料:胎儿脐带血来源于顺产及剖腹产的健康孕妇,由暨南大学第一附属医院产科提供,产妇均签署知情同意书.方法:体外分离培养人脐血间充质干细胞,胰酶-EDTA消化传代.取传至第3代细胞,按5×10~4/cm~2接种,48 h后去除原培养基,PBS洗涤后,第1阶段用含地塞米松、肝细胞生长因子、表皮生长因子、ITS的F12培养基诱导2周,第2阶段用含地塞米松、肝细胞生长因子、致瘤素M、ITS的F12培养基继续诱导2周.主要观察指标:流式细胞仪检测脐血间充质干细胞表面标志的表达,RT-PCR检测肝细胞相关基因的表达,免疫荧光染色检测肝细胞相关蛋白的表达,透射电镜观察细胞超微结构.结果:培养的细胞不表达造血细胞系标志CD34,CD45,CDl4;亦不表达CD54,CD49f,HLA-DR;部分表达内皮细胞标志CD106;强表达CD29,CD44及CDl3.诱导4周后,甲胎蛋白、白蛋白、ck-18及tat基因均呈阳性表达;免疫荧光染色显示细胞浆中甲胎蛋白、白蛋白、ck-18均呈阳性;细胞胞浆中出现脂滴及糖原的沉积,细胞表面有微绒毛,出现双核细胞,初步具备了肝细胞的超微结构特征.结论:联合应用地塞米松、肝细胞生长因子、表皮生长因子、致瘤素M及ITS等多种生长分化因子,可在体外成功诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞分化.     

过敏性紫癜尿微量蛋白的临床研究

目的:探讨过敏性紫癜尿微量蛋白的相关因素。方法:30例过敏性紫癜患者分别在病后1周、4周、3个月和6个月检测尿微量蛋白。结果:ALB、β2-MG、α1-MG在1周、4周、3个月和6个月,IgG在4周、3个月与正常人比较,差异有极显著性意义(P<0.01);不同性别、病程、发病形式比较无显著性差异;伴有腹痛症状IgG与无腹痛患者比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:过敏性紫癜发病后的一周至半年都存在肾脏损害,伴有腹痛者更明显,且不受性别、病程、发病形式的影响。