冠状动脉粥样硬化性心脏病患者心外膜脂肪组织的生物信息学研究

背景 心血管疾病（CVD）是常见病和多发病,患病率和死亡率呈快速上升趋势。动脉粥样硬化（AS是缺血性CVD的病理基础,研究表明心外膜脂肪组织（EAT）通过分泌外泌体（EXO）和生物活性物质促进AS进展,但其作用机制仍需进一步研究。目的 通过生物信息学方法挖掘冠状动脉粥样硬化性心脏病（CAD）患者EAT中的关键基因,探讨免疫细胞浸润情况,联合CAD患者EXO间差异表达基因（DEGs）推测EAT来源EXO间DEGs并进行验证,从细胞及分子水平上探讨EAT在CAD疾病过程中的作用机制。方法 从基因表达综合数据库（GEO）中下载关于EAT的数据集GSE64554、GSE120774,根据临床信息将EAT的测序数据分为CAD组和健康对照组,使用R语言及相关软件包进行生物信息学分析。首先使用R语言筛选CAD组与健康对照组EAT间DEGs,并进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,评估所选基因的生物学功能及可能参与其调控的转录因子。构建GSE64554数据集中EAT的加权基因共表达网络（WGCNA）,获取同CAD表型相关的基因模块,将所获EAT间DEGs与模...     

兔饮食所致高同型半胱氨酸血症血管内皮功能的实验研究

目的：观察高同型半胱氨酸血症对血管内皮功能的影响。 方法： 建立兔高同型半胱氨酸血症模型。将18只新西兰兔随机分为：正常对照组（control组）6只、高蛋氨酸饮食组（M组）12只；于实验第4周始，将M组再随机分为两组，M+0组6只，继续饲高蛋氨酸饮食；M+F组6只，在高蛋氨酸饮食基础上，再加以叶酸、VitB12，继续观察3周；6周时统一处死动物，取腹主动脉，制备主动脉血管环，比较M+0组与M+F组及C组主动脉血管对Ach的最大舒张反应。同时，对3组高同型半胱氨酸血症形成过程中0周、3周、6周时血清中Hcy、ET-1、Ang-II、NO2ˉ/NO3ˉ、NOS各指标及处死动物时局部血管组织中ET-1、Ang-II、NO2ˉ/NO3ˉ、NOS指标进行检测并进行比较。 结果： （1）M+0组主动脉血管对Ach的最大舒张反应性(Emax=26.73±4.51)低于M+F组（Emax=47.84±5.62, P<0.05）及control组（Emax=56.42±7.82， P＜0.05）；(2) 3周时，M+0组及M+F组血清中Hcy、ET-1、Ang-II各指标均明显高于对照组及0周时（P＜0.05）；NO2ˉ/NO3ˉ、NOS明显低于对照组及0周时（P＜0.05）；(3)6 周时，M+0组上述指标继续升高；M+F组血清中Hcy低于 M+0组（P＜0.05）;NO2-/NO3-、NOS高于M+0组（P＜0.05）;ET-1、Ang-II各指标与M+F组无明显差异（P>0.05）。 结论： 高同型半胱氨酸血症对血管内皮最大舒张功能具有明显的抑制作用；其机制可能是通过影响局部血管组织内皮细胞 ET-1、Ang-II、NO的分泌而发挥作用的；早期以叶酸、VitB12干预治疗对血管内皮功能具有一定的拮抗作用。     

MicroRNA在胆固醇逆转运中的调节作用

胆固醇逆转运是体内清除胆固醇的唯一机制,对维持体内胆固醇稳态有重要意义。MicroRNA与体内诸多病理生理过程关系密切,如肿瘤、脂质代谢、免疫功能等,并逐渐成为新的药物靶点。最近发现MicroRNA对胆固醇逆转运有调节作用。本文综述了可调节胆固醇逆转运的MicroRNA,主要包括miR-33、miR-758、miR-106b、miR-26、miR-27。这些研究结果表明,MicroRNA对胆固醇逆转运及动脉粥样硬化有重要意义,为临床防止动脉粥样硬化提供新的药物靶点。     

脂联素受体在正常SD大鼠乳鼠心肌细胞的分布和表达

目的通过体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,研究脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)及T-钙黏蛋白(T-cadherin)三种脂联素受体在大鼠乳鼠心肌细胞上的分布和表达。方法采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对原代培养的心肌细胞进行鉴定,并在倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。选用原代培养96h的单层心肌细胞进行实验,使用RT-PCR和细胞免疫组织化学方法检测AdipoR1、AdipoR2、T-cadherin的mRNA和蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均检测到了AdipoR1、AdipoR2、T-cadherin的mRNA和蛋白表达,其中以AdipoR1和T-cad-herin的mRNA和蛋白表达量高,与AdipoR2的表达量相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论脂联素受体1、脂联素受体2和T-钙黏蛋白,三种脂联素受体在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均有表达,并以脂联素受体1和T-钙黏蛋白的表达为主,脂联素受体2表达量较少。     

载脂蛋白E基因多态性与女性冠心病相关性的Meta分析

目的研究载脂蛋白E基因多态性与女性冠心病发病的关系。方法以载脂蛋白E(ApoE)、女性冠心病、基因多态性、Apolipoprotein E、women coronary heart disease、gene polymorphisms为检索词,检索万方数据库、中国知网、中国生物医学文献、SpringerLink数据库和PubMed数据库,检索时时限为建库至2018年9月30日。然后以等位基因E2、E4分别与E3相比较,基因型E2/2、E2/3、E2/4、E3/4、E4/4分别与E3/3相比较。应用统计学软件Stata14.0对所有数据进行Meta分析,计数资料采用合并比值比(OR值)和95%可信区间(95%CI)描述。异质性分析过程应用I~2完成,认为P0.1或I~250%时存在明显的异质性。发表偏倚用漏斗图进行分析。结果的可靠性通过敏感性分析评估。P0.05为差异有统计学意义。结果初步检索文献940篇,最终纳入9篇。其中中文1篇,英文8篇。所选文献均使用NOS质量评分量表进行质量评价,所选文献均大于5分,为高质量文献。所选文献Meta分析结果示基因型E2/2[OR 4.65,95%CI (1.02,21.19)]、E3/4[OR 1.68,95%CI (1.00,2.82)]、E4/4[OR 4.55,95%CI (2.16,9.60)]在病例组表达率要显著高于对照组,E2/3[OR 1.10,95%CI (0.79,1.54)]、E2/4[OR 1.03,95%CI (0.51,2.07)]与女性冠心病的发病无统计学意义。结论 E2/2、E3/4、E4/4基因携带者女性冠心病的发病风险显著增加;E2/3、E2/4携带者无明确相关性。     

慢性阻塞性肺疾病急性加重与急性心肌梗死关系的研究进展

慢性阻塞性肺疾病和冠心病均是严重危害人类健康的常见病、多发病,二者病死率均较高。近期研究表明,慢性阻塞性肺疾病急性加重患者急性心肌梗死发生风险明显升高。本文主要综述了慢性阻塞性肺疾病并急性心肌梗死的流行病学、慢性阻塞性肺疾病急性加重引发急性心肌梗死的可能机制及其诊断、治疗等,以探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重与急性心肌梗死的关系,提高临床慢性阻塞性肺疾病急性加重并急性心肌梗死的认识及诊治水平。     

流体剪切力对5-氮杂胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响

目的观察5-氮杂胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,并探讨流体剪切力对诱导过程的影响。方法贴壁法从大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞,进行纯化传代培养,取第4代骨髓间充质干细胞以3、5、10、15及20μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用12、24及48 h,用免疫荧光法鉴定分化的心肌样细胞α-肌动蛋白表达率,10μmol/L作用24 h为最佳诱导浓度。通过建立流体剪切力模型,设立以下四组:不加载流体剪切力组、加载5 dyn/cm2流体剪切力组、加载15 dyn/cm2流体剪切力组和加载25 dyn/cm2流体剪切力组,作用24 h,倒置显微镜观察诱导后骨髓间充质干细胞形态的变化,4周后逆转录聚合酶链反应测定分化的心肌样细胞心肌肌钙蛋白ImRNA的表达。结果骨髓间充质干细胞随着传代逐渐变成梭形,5-氮杂胞苷诱导后骨髓间充质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起,部分相邻细胞的突起连接成网,形态学上表现出向心肌细胞方向转化的特征。免疫荧光显示α-肌动蛋白表达阳性。经过流体剪切力作用细胞后,心肌肌钙蛋白I的表达增高,阳性条带均比未进行力学刺激的细胞表达明显,以15 dyn/cm2剪切力最明显。但是25 dyn/cm2剪切力作用结果并没有随着力的增大而增大。结论 5-氮杂胞苷可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,5-氮杂胞苷可联合剪应力诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,且诱导效果优于单独使用5-氮杂胞苷。     

OX40配体蛋白基因多态性与冠心病的相关性研究

目的研究中国人群OX40配体蛋白基因（TNFSF4）单核苷酸多态性与冠心病的关系。方法从北京同仁医院和北京朝阳医院选取冠心病患者369例和匹配的对照组360例。并记录所有研究对象的病史、体格检查等临床资料及其它流行病学资料，采取聚合酶链式反应和限制性酶切片断长度多态性分析方法（PCR—RFLP）检测各组TNFSF4基因rs3850641位点A／G的基因型并统计各组的基因型频率。结果冠心病组rs3850641G等位基因型频率显著高于对照组（P〈0．05）。并在校正了年龄、性别、高血压病史、糖尿病史、甘油三脂和胆固醇等传统危险因素的影响后，这种相关性依然存在（P=0．039）。结论TNFSF4基因rs3850641位点A／G多态性中G等位基因可能是中国人冠心病发病的独立危险因素之～。     

编码大鼠血管紧张素转换酶短发夹环RNA质粒的构建与鉴定

目的构建编码大鼠ACE mRNA的shRNA真核表达载体质粒,为利用基因沉默技术从转录后水平进行高血压治疗的研究做准备。方法根据大鼠ACE mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆进入载体pGenesil-1,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与设计的相同,获得大鼠ACE的shRNA表达载体质粒。结论构建的编码大鼠ACE mRNA的shRNA真核表达载体可进入哺乳动物细胞内表达短发夹RNA,经Dicer酶裂解成si R-NA并降解靶基因mRNA,而达到基因干扰的作用。为利用其进行自发性高血压大鼠的降压治疗研究奠定了基础。     

体外培养成人脂肪间充质干细胞及向平滑肌细胞诱导分化

目的 体外培养成人脂肪间充质干细胞,并应用转化生长因子β将脂肪间充质干细胞诱导分化为平滑肌细胞.方法 采用酶消化法和贴壁培养法分离培养脂肪间充质干细胞,流式细胞仪对第3代和第5代细胞进行表面抗原检测,对第5代细胞进行转化生长因子β诱导,于诱导后第10天进行免疫化学鉴定.结果 体外培养的脂肪间充质干细胞呈扁平的长梭形,细胞形态均一,传代稳定.干细胞相关标志CD29和CD44表达阳性,造血干细胞相关标志CD34随传代次数的增加由弱阳性逐渐转为阴性,内皮细胞相关标志CD31表达阴性.流式细胞仪检测结果 发现脂肪间充质干细胞中G0/G1、S和G2/M期的细胞分别占90.14%、3.77%和6.09%.转化生长因子β定向诱导后倒置显微镜下观察细胞呈"峰"、"谷"样形态,免疫荧光化学检测发现诱导组细胞α平滑肌肌动蛋白表达阳性.结论 成人脂肪组织中含有间充质干细胞,且可在转化生长因子β诱导后分化为平滑肌细胞.