α1,3半乳糖基转移酶新等位基因278C＞T的鉴定

目的研究中国汉族人群ABO血型系统中Bw变异型的分子遗传背景，发现并鉴定一个新的ABO等位基因。方法血型血清学方法鉴定1例ABO血型疑难样本，应用聚合酶链反应、逆转录-聚合酶链反应和DNA序列分析等方法对先证者ABO基因转录调控序列和全编码序列进行突变筛选和检测。结果血清学和家系调查鉴定该样本为Bw表型，对gDNA和cDNA研究发现该样本存在第6外显子278C／T杂合，单倍体分析发现一种新的Bw等位基因，该等位基因与B101相比，差异仅在第6外显子的278C〉T错义突变，导致多肽链P93L替换，该突变点位于以前报道的Bw等位基因功能域之外。结论在中国人群中发现一种新的导致Bw变异型的ABO等位基因。     

汉族Rh血型DⅥ表型Ⅲ型的分子结构研究

Rh血型系统的部分D表型（或不完全D表型，panial D phenotype）可以分成D^Ⅱ（D category Ⅱ，D^Ⅱ）-D^Ⅶ（D category Ⅶ，D^Ⅶ）6个表型（D^Ⅰ已经被废除），其中D^Ⅵ（D category Ⅵ，D^Ⅵ）表型临床意义显著。D^Ⅵ表型女性妊娠RhD阳性胎儿可导致严重的新生儿溶血病，如果D^Ⅵ表型患者被误检为RhD阳性而接受RhD阳性血液，产生抗RhD的风险也很高。     

一例产生抗-P的罕见P1+P^K+P-个体的血清学和分子生物学研究

目的研究1例P1+P^K+P-(P1^K)表型个体的血型、抗体及其分子机制。方法采用血清学方法鉴定血型和不规则抗体,采用PCR扩增α-1,4-半乳糖基转移酶基因(α-1,4-galactosyltransferase,A4GALT)和β-1,3-N-乙酰半乳糖氨基转移酶基因(β-1,3-N-acetylgalactosaminyltransferase,B3GALNT1)编码区,并测序分析DNA序列。结果血清学试验鉴定受检者为P1^K表型,血清中含有可与P阳性红细胞凝集并溶血的抗-P,分子生物学技术发现其B3GALNT1基因编码区存在c.202C>T(CGA>TGA)纯合突变。结论受检者为罕见的P1^K表型,血清中存在抗-P,B3GALNT1基因c.202C>T无义突变可能是导致其P1^K表型的分子机制。     

96例血小板基因配型患者的HLA-Ⅰ类抗体特性分析及抗原免疫原性估算

目的 分析血小板基因配型患者的HLA-Ⅰ抗体特异性,并估算HLA抗原免疫原性。方法 标本来自医院送检本中心申请血小板基因配型的血小板输注无效(PTR)患者,共计96份。采用Luminex技术对患者标本进行HLA-Ⅰ抗体特异性检测,并根据MFI分析抗体表达水平。人群HLA抗原错配率、相对免疫原性根据HLA-A、-B位点等位基因频率分布和抗体检出频次分别进行估算。结果 96份患者标本均检出HLA-Ⅰ类抗体,但抗体种类分布较广。HLA-A、-B、-C磁珠包被抗原(共计97个)对应抗体的平均阳性检出率分别为0.38、0.47、0.28。在浙江人群中HLA-A和-B系统中,抗原频率较高的分别为HLA-A2、A11、A24和HLA-B60、B46、B58,其相对免疫原性分别为0.403、0.283、0.342和0.100、0.067、0.178。结论 PTR患者存在不同种类特性的HLA-Ⅰ抗体,证实不同HLA-A、-B抗原的相对免疫原性存在差异。     

血小板数字化配型信息体系构建及其应用

目的 构建血小板数字化配型信息系统。方法 设计血小板数字化配型管理信息框架,开发血小板基因库管理模块主要功能,并与已建成运行的临床申请、实验室检测、献血服务、血液库存与发放等模块对接,将信息系统进行初步的临床应用。结果 成功开发了血小板配型信息体系,入库HLA和HPA已分型数据单采献血者5 048例,完成306份搜寻报告。16.5%的搜寻报告即刻在库存血液中找到配合型血小板,所有配型的中位等待时间为3 d。自动血液锁定方式比手动方式的等待时间明显缩短(3.8±3.1 d和5.4±5.4 d)。结论 研发的血小板数字化配型信息系统实现了献血者和患者的全流程管理,有助于提高血小板配型水平。     

浙江义乌人群RhDEL表型相关的RHD 1227A等位基因检测

Rh血型系统涉及新生儿溶血病、溶血性输血反应和自身免疫性溶血性贫血等疾病,具有重要临床意义.该系统目前共发现48个抗原,其中D抗原具有最强的免疫原性,所以D抗原成为目前临床输血前的必检抗原.与白种人不同的是,Rh(D)抗原在中国人群中占绝对多数,尤其是汉族人群,仅有0.2%-0.5%的个体为Rh(D)抗原阴性[1-2].     

一例Bw亚型的糖基转移酶等位基因鉴定及蛋白结构分析

目的对1例Bw亚型个体进行分子遗传学及蛋白结构分析。方法采用血清学技术进行红细胞表面抗原和血清中抗体的测定,并用PCR-基于序列的分型(PCR-sequence-based typing,PCR-SBT)方法进行ABO基因的全编码区序列和第1内含子区红系特异性调控元件的分析。进一步对存在突变位点的第5~7外显子扩增片段进行T-A克隆分离单倍体和序列验证分析。应用Pymol软件对突变蛋白进行3D结构的模拟,分析氨基酸残基的变化对蛋白结构稳定性的影响。结果该样本血清学表现为B抗原减弱,血清中含有抗-B抗体。ABO基因全编码区测序初步确定其基因型为ABO*B.01/ABO*O.01.01伴有c.734C/T的杂合突变。第1内含子红系特异性调控元件区碱基序列无异常。通过单倍体克隆分离,确定突变位点c.734T位于ABO*B.01等位基因链,另一个等位基因为ABO*O.01.01。该突变将B糖基转移酶活性中心245位Thr置换为Ile。蛋白3D结构的模拟分析发现氨基酸置换后,与之结合的残基未发生改变而连接的氢键距离发生变化,同时增加了与远距离水分子之间的连接。结论B糖基转移酶基因c.734C>T突变导致酶活性中心氨基酸置换,影响了突变B糖基转移酶蛋白稳定性,引起酶活性减弱,从而产生了Bw变异型。     

Rh阴性血型者Del表型和RhD基因的检测

目的初步探讨中国汉族人群Rh阴性血型者Del表型与RhD基因之间的关系.方法对67例血清学方法检测为Rh阴性的供血者样本进行吸收放散试验以检测Del型,并扩增RhD基因的外显子3,4,5,7,10,检测RhD基因存在情况.结果吸收放散试验表明67例样本中Del型22例,占32.8%,非Del型45例,占67.2%.在所有表型为ccee,ccEe的38例RhD(-)个体中,Del试验均为阴性,RhD基因完全缺失;而在表型为Ccee或CcEe的29例RhD(-)个体中,22例Del试验阳性,其中20例携带完整的RhD基因,2例有部分RhD基因;7例Del试验阴性,其中6例携带部分RhD基因,1例D基因完全缺失.结论中国汉族人群中Rh阴性血型者RhD基因的存在及多态性多由Del引起.     

罕见类孟买型AB_m~h的鉴定

目的　鉴定类孟买型ABhm。方法　检测先证者ABO、H血型,红细胞进行吸收放散试验,测定唾液中的血 型物质,测序分析并进行家系调查。结果　先证者血型为罕见的类孟买型ABhm,血清中有抗- H,家系调查提示其遗 传方式为常染色体隐形遗传。结论　鉴定出罕见的类孟买型ABhm,血清中含有抗- H。     

B(A)血型分子机制研究及其家系分析

目的 研究罕见B(A)血型的血清学特性和分子机制,为B(A)血型的临床输血提供理论基础.方法 利用单克隆抗体检测1例先证者、家系成员及献血者红细胞ABO血型抗原,用标准A、B、O红细胞检测其血清中的ABO抗体.采用盐水法、凝聚胺法和抗球蛋白法进行先证者与献血者交叉配合试验.采用PCR技术扩增ABO基因的第6、7外显子序列,对先证者、家系成员、献血者标本的ABO基因外显子6、7和侧翼内含子序列进行测序分析,并对先证者标本进行单倍体序列分析.结果 先证者及其2位家系成员红细胞上有A、B抗原,同时血清中存在抗A_1抗体,血清学表型为A_2B.直接测序分析发现先证者标本第6、7外显子存在261G/del、297A/G、526C/G、657C/T、700C/G、703A/G、796A/C、803G/C、930A/G杂合,可推断为B(A)_(02)/O_(01)基因型杂合子;家系中其母亲基因型为B(A)_(02)/B_(101),外祖母为B(A)_(02)/O_(01).先证者单倍体序列分析得到2个等位基因B(A)_(02)和O_(01);与B_(101)序列相比,B(A)_(02)位第700位C>G,导致1个氨基酸改变:第234位脯氨酸变成丙氨酸.既往血清学特性为A_2B的2个献血者,1个基因型为B(A)_(02)/O_(01),另1个基因型是A_(208)/B_(101).B(A)血型先证者与这2名献血者进行交叉配血试验均相合,临床输注后无不良反应.结论 α-1,3-半乳糖基转移酶等位基因(B等位基因)700C>G突变可导致形成B(A)血型,其血清学特性显示为A_2B表型.B(A)血型临床输血相配合的供者可选择A_2B表型的献血者.