青海湖地区禽流感病毒分布情况调查

目的 了解我国青海湖地区禽流感病毒的分布情况。方法 通过系统采集2013年青海湖周边地区野禽和家禽环境标本,采取病毒鸡胚分离的方法,将鸡胚培养物进行流感病毒型别和亚型的鉴定,从而了解禽流感病毒在这一地区的时空分布。同时通过对分离到的禽流感H5N1病毒株进行血凝素基因的测定来判断病毒的致病性。结果 共采集2420份野禽和3944份家禽环境标本。野禽环境标本没有分离到病毒,家禽环境标本检测到49份甲型流感病毒阳性标本,病毒分离阳性率为0.77%。共分离到49株病毒,包括27株H9N2病毒,19株高致病性H5N1病毒以及3株H5和H9混合病毒。在家禽环境标本中病毒分离率最高是1月,9月次之。乐都和西宁活禽市场的病毒分离率明显高于其他两个家禽标本采集点。结论 本次研究没有在青海湖核心区野禽环境标本中分离到禽流感病毒。在青海湖周边地区的家禽环境标本中分离到49株病毒。属于高致病性禽流感H5N1和低致病性禽流感H9N2。两种病毒在家禽中共同流行的现状增加了禽流感病毒在家禽中的重配,为潜在的流感大流行毒株的出现提供生态学基础。     

H5N1禽流感病毒NS1蛋白与干扰素诱导蛋白10表达的相关性研究

目的 研究高致病性禽流感(HPAI)H5N1病毒NS1蛋白对干扰素诱导蛋白10(IP-10)的影响.方法 分别将禽流感病毒A/Anhui/1/2005(H5N1)的NS1基因、插入80-84位缺失氨基酸的NS1突变基因及流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的NS1基因克隆至真核表达载体pEGFP-N1,转染人支气管上皮细胞BEAS-2B,流式细胞仪检测转染细胞内IP-10的表达情况.结果 与pEGFP-N1对照组相比,三种NS1蛋白均能下调BEAS-2B细胞IP-10的表达(P<0.01),但三者之间下调程度差异无统计学意义(P>0.01).结论 A/Anhui/1/2005(H5N1)禽流感病毒单一NS1蛋白能够抑制BEAS-2B细胞IP-10表达,但这并不能完全阐明其与病毒致病性之间的关系.     

H9N2禽流感病毒反向遗传系统的构建和鉴定

目的 建立H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统,为人禽流感疫苗研制以及传播和致病机制等方面的研究提供技术平台.方法 使用RT-PCR方法获得禽流感H9N2亚型病毒A/Guangzhou/333/99(H9N2)的8条全长基因节段,然后克隆到双表达载体pCI-pol Ⅰ中,获得H9N2禽流感病毒的8个基因节段的8质粒系统.将构建好的8质粒共转染293T细胞后,收获上清接种鸡胚,然后对鸡胚尿囊液进行鉴定;对拯救的病毒进行鉴定.结果 8质粒系统转染293T细胞后可以成功拯救出H9N2禽流感病毒,血凝效价可达到29/50μl,生长特性与野生型病毒类似.结论 成功建立了H9N2禽流感病毒反向遗传系统.     

建立微量空斑减少方法测定人血清H7N9禽流感病毒中和抗体水平

目的 建立微量空斑减少的方法测定人血清中H7N9禽流感病毒中和抗体水平。方法 确定H7N9禽流感病毒感染MDCK细胞后形成空斑数目,进行病毒定量,系列稀释待测抗体,加入已定量病毒,计算病毒被抗体中和后空斑减少数目,确定中和抗体的滴度。实验中以H7N9病例血清测定该方法的灵敏度,以其他亚型流感病毒抗体阳性人群血清评估微量空斑减少方法的特异性,同时将该方法与微量中和实验进行比较分析。结果 微量空斑减少方法不仅能够检测H7N9禽流感病例中和抗体水平,而且该方法检测季节性流感病毒抗体、H5N1和H9N2禽流感病毒抗体与H7N9禽流感病毒抗体之间均无交叉反应,与微量中和实验检测结果相一致。结论 建立的微量空斑减少方法具有较好的灵敏度和特异性,能够用于人血清H7N9禽流感病毒中和抗体的检测。