耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IsdB活性片段的克隆、表达及抗原免疫保护性初步研究

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入大肠杆菌XL-1 blue,通过IPTG诱导表达IsdB2/GST融合蛋白,利用GST亲和层析初步纯化获取IsdB2蛋白。用IsdB2蛋白抗原辅以氢氧化铝佐剂对小鼠进行免疫实验,统计小鼠存活率对IsdB2抗原的免疫性进行初步研究。结果重组质粒经过BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达IsdB2/GST及酶切获取IsdB2蛋白的SDS-PAGE分析表明,IsdB2蛋白相对分子质量大小约72 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期相符合。用IsdB2蛋白对小鼠进行3次疫苗免疫实验,IsdB2对小鼠的保护率分别为84.6%、50%和60%。结论成功构建重组表达载体pGEX-6P-2-IsdB2,利用大肠杆菌表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得IsdB2蛋白抗原,通过3次动物疫苗免疫实验结果表明IsdB2具有免疫保护性,为研制新型有效的MRSA疫苗奠定实验基础。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组亚单位疫苗FnBPA的免疫保护作用研究

目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠。末次免疫后的第7天,分离免疫小鼠的血清ELISA检测IgG及其亚型抗体水平,同时测定体外抗体介导的调理吞噬作用。末次免疫后的第14天,经尾静脉感染ATCC国际标准株MRSA-252,统计分析感染后各组的小鼠的生存率以及检测脾脏,肾脏的细菌定植量。结果成功构建、表达及纯化了FnBPA活性片段,重组蛋白纯度可达90%;免疫后诱导小鼠机体产生了高效价的IgG抗体,并在体外能发挥抗体介导的调理吞噬作用;在感染保护评价实验中,与对照组相比,实验组的生存率显著提高(P<0.01),并显著降低了脾脏与肾脏的细菌定植量(P<0.05)。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗FnBPA具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可以作为MRSA疫苗研究的重要候选抗原。