伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞蛋白质合成和肌球蛋白重链表达的影响

目的 观察伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）所致心肌细胞中蛋白质合成速率及肌球蛋白重链（MHC）基因表达改变的影响.方法 以AngⅡ及伊贝沙坦分别或同时作用于培养的细胞.采用放射性同位素[^3H]-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率.应用荧光定量PCR方法检测心肌细胞心房利钠肽因子（ANF）以及α-MHC、β-MHC的表达.结果 AngⅡ处理使心肌细胞中[^3H]-Leu掺人增加（P＜0.05）,同时ANF mRNA的表达明显高于正常（P＜0.05）;α-MHC mRNA的表达显著低于正常（P＜0.05）,而β-MHC mRNA的表达显著高于正常（P＜0.05）,α-MHC/β-MHC的比值下降（P＜0.05）.当伊贝沙坦与AngⅡ共同作用于培养的心肌细胞时,与AngⅡ组比较,[^3H]-Leu的掺入明显下降（P＜0.05）,与正常组比无统计学意义（P＞0.05）;同时ANF的表达下降,与正常组比无统计学意义（P＞0.05）;心肌细胞中α-MHC的表达明显增高（P＜0.05）,而β-MHCmRNA的表达显著降低（P＜0.05）,α-MHC/β-MHC的比值上升（P＜0.05）.结论 伊贝沙坦能抑制AngⅡ所致的心肌细胞肥大和细胞中α-MHC向β-MHC表达的转换.     

四硫代钼酸铵作为新型硫化氢供体的鉴定及其对皮肤细胞的保护作用

 目的: 本研究旨在检测金属络合物四硫代钼酸铵(ATTM)的硫化氢(H₂S)释放能力并进一步观察其减轻氧化应激诱导的皮肤细胞损伤的作用。方法:反应瓶法检测ATTM在细胞培养基中释放的H₂S,二氯二氢荧光素二乙酸酯或罗丹明123染色结合荧光显微镜照相术分别检测细胞内活性氧簇(ROS)的含量和线粒体膜电位(ΔΨ_m),用试剂盒检测细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)的释放。结果:与H₂S供体GYY4137类似,ATTM在细胞培养基中可剂量依赖性地释放H₂S。在25~400 μmol/L 的浓度范围内,ATTM处理对人皮肤细胞(HaCaT细胞)的存活率无明显影响(P>0.05)。紫外线照射或外源性给予ROS供体(过氧化氢,H₂O₂)处理均可增加HaCaT细胞内ROS的含量。400 μmol/L H₂O₂处理可明显降低HaCaT细胞的存活率(P<0.01),而在H₂O₂处理前给予ATTM预处理,细胞存活率明显提高,其中在100和200 μmol/L浓度时ATTM具有最好的细胞保护作用(P<0.01)。400 μmol/L H₂O₂处理还可损害细胞的ΔΨ_m和细胞膜并使LDH释放增加(P<0.01)。而在细胞遭受损伤前给予200 μmol/L ATTM预处理可明显改善ΔΨ_m的水平(P<0.05)并抑制LDH从细胞内释放(P<0.01)。结论:ATTM具有释放H₂S的能力并可保护人皮肤细胞对抗氧化应激诱导的损伤效应。     

神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大的钙信号机制

目的探讨钙依赖的信号途径在神经肽Y (NPY)诱导心肌肥大中的作用.方法NPY刺激乳鼠心肌细胞,加入钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环胞素A(CsA)进行干预(5 μg/mL),观察心肌细胞蛋白合成速率(3H-Leu掺入量)、早期肥大反应基因(c-jun mRNA)表达以及胞浆和核内[Ca2+]i的变化.结果经100 nmol/L NPY刺激24 h后,心肌细胞3H-Leu掺入量、c-jun mRNA表达以及胞浆和核内[Ca2+]i均明显高于不加药对照组(P<0.05,P<0.01);而CsA干预后的心肌细胞3H-Leu掺入量和c-jun mRNA表达与对照组比较则无显著差别.结论Ca2+/CaM依赖的CaN信号途径在NPY诱导心肌细胞肥大中起重要作用;NPY刺激细胞内[Ca2+]i增加,可能是活化CaN信号途径的始动环节.     

神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大的钙信号机制

目的 探讨钙依赖的信号途径在神经肽Y（NPY）诱导心肌肥大中的作用。方法 NPY刺激乳鼠心肌细胞，加入钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂环胞素A（CsA）进行干预（5μg／mL），观察心肌细胞蛋白合成速率（^3H-Leu掺入量）、早期肥大反应基因（c-jun mRNA）表达以及胞浆和核内[Ca^2＋]i的变化。结果 经100nmol／L NPY刺激24h后，心肌细胞^3H-Leu掺入量、c-jun mRNA表达以及胞浆和核内[Ca^2＋]i均明显高于不加药对照组（P〈0．05，P〈0．01）；而CsA干预后的心肌细胞^3H-Leu掺入量和c-jun mRNA表达与对照组比较则无显著差别。结论 Ca^2＋／CaM依赖的CaN信号途径在NPY诱导心肌细胞肥大中起重要作用；NPY刺激细胞内[Ca^2＋]i增加，可能是活化CaN信号途径的始动环节。     

神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆钙及钙瞬变的影响

目的观察神经肽Y（neuropeptideY，NPY）对静息状态下心肌细胞胞浆钙含量及兴奋-收缩耦联过程中心肌细胞钙瞬变的影响。方法用NPY（100nmol／L）刺激Sprague—Dawley乳鼠心肌细胞24h，用荧光染料Fluo 4-AM负载胞浆钙，记录静息状态下心肌细胞胞浆钙浓度，并用场刺激诱发胞浆钙瞬变。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果NPY组心肌细胞胞浆钙含量明显高于对照组（P〈0.05）；场刺激诱导下NPY组心肌细胞胞浆钙瞬变幅度明显高于对照组（P〈0.01），NPY组钙瞬变恢复时间明显缩短（P〈0．01），钙瞬变上升时阍则无显著差别。结论长时间的NPY刺激可显著影响兴奋-收缩耦联过程中钙的动态活动，并导致胞浆内钙含量增加。     

两种中药合剂对悬吊大鼠生理防护效应的初步观察

目的：观察两种中药合剂对模拟失重大鼠血液循环，肌肉、骨骼系统的影响。方法：比较4组大鼠（对照组，悬吊组，中药1组，中药2组，n=15)在30d实验后血循环，肌肉，骨骼系统各项生理指标的变化。结果：两种中药合剂具有明显改善模拟失重鼠血循环的作用，对骨骼和肌肉系统也有一定的改善作用。结论：中药作为失重的防护措施是可行的，应进一步研究。     

hBcl-2和hVEGF165双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建hBcl-2和hVEGF165双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续基因转染和动物实验提供实验基础。方法通过RT-PCR从A549细胞中分别获得hBcl-2和hVEGF165基因片段,并克隆到pMD-19T载体。将目的基因hBcl-2、IRES元件和hVEGF165依次定向克隆到腺病毒穿梭载体质粒pAd-Track-CMV上。线性化重组穿梭质粒后通过电穿孔转化含有腺病毒骨架质粒pAd-easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒。脂质体转染线性化的重组腺病毒载体质粒于HEK293细胞以包装制备重组腺病毒。重组腺病毒经PCR鉴定之后进一步扩增、纯化。通过荧光计数确定病毒感染滴度。结果克隆的hBcl-2和hVEGF165基因测序正确,酶切重组穿梭载体质粒和腺病毒载体质粒得到特异酶切产物,重组腺病毒载体质粒转染HEK293细胞3 d后观察到GFP的表达,重组腺病毒的PCR得到hBcl-2和hVEGF165基因的PCR产物,滴度测定为5×109pfu/mL。结论成功构建制备了高滴度的hBcl-2和hVEGF165双基因共表达的重组腺病毒载体,为联合基因治疗心肌梗死的研究提供实验基础。     

环孢菌素A对大鼠腹主动脉球囊损伤后内膜增生的抑制作用

目的: 探讨环孢菌素A对大鼠腹主动脉球囊损伤后内膜增生的影响。方法: 雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组(n=12)、球囊损伤组(n=12)和环孢菌素治疗组(n=12)。环孢菌素组大鼠行腹主动脉球囊损伤术前3 d开始每天灌喂环孢菌素A 12.5 mg/kg,假手术组和球囊损伤组灌喂等容积的水,直至术后30 d。球囊损伤术后30 d取材,血管组织作HE染色、免疫组化检测钙调神经磷酸酶(CaN)在血管壁中的表达,光学显微镜观察病理学改变;rea1-time PCR技术检测血管壁组织中CaN和活化T细胞核因子3(NFATc3)的表达变化。结果: 球囊损伤后血管壁出现新生内膜,形成的新生内膜厚度不均。环孢菌素治疗组与球囊损伤组相比较,内膜增生减轻,内膜/中膜厚度明显降低(P<0.05)。免疫组化检测血管壁上CaN表达,环孢菌素治疗组明显低于球囊损伤组 (P<0.05)。大鼠腹主动脉损伤后,损伤血管壁组织CaN和NFATc3 mRNA表达升高,环孢菌素治疗组与球囊损伤组相比表达明显减少(P<0.05)。结论: 环孢菌素A可能通过抑制CaN-NFATc途径减轻球囊扩张术后动脉再狭窄。     

siRNA特异性抑制舌癌细胞株端粒逆转录酶基因表达的体外研究

目的 探讨hTERT特异性的siRNA干扰舌癌Tca8113细胞hTERT基因表达的效果,和对舌癌Tca8113细胞增殖、凋亡的影响。方法 构建针对hTERT基因的siRNA（siRNA-hTERT1),转导入Tca8113细胞,同时以无同源性的siRNA-hTERT2作阴性对照,以及无任何处理的空白对照。应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)技术检测hTERT基因表达变化,MTT法检测细胞生长率,流式细胞术分析细胞凋亡的情况。结果 与阴性对照组的1.934±0.212和空白对照的2.053±0.369相比,siRNA-hTERT1有效下调hTERT的mRNA表达仅为0.950±0.138,P＜0.01。转染72 h后,siRNA-hTERT1的细胞抑制率达47.2％,远远高于阴性对照组的2.6％,P＜0.01。流式细胞仪检测结果显示,siRNA-hTERT1处理48h后细胞凋亡率明显增加,达(27.30±0.18)％,显著高于阴性对照组的(5.11+0.22)%和空白对照组的(5.00+0.19)%,P＜0.01。结论 siRNA-hTERT1能特异性抑制舌癌Tca8113细胞hTERT基因的表达,促进细胞的凋亡和减慢细胞增殖。     

神经肽Y对大鼠心肌细胞肌浆网钙的影响

目的观察神经肽Y（NPY）刺激对大鼠心肌细胞肌浆网（Sarcoplasmic Reticulum,SR）内钙含量的影响。方法用100nmol·L^-1NPY刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24h,用荧光染料Fluo-4AM负载胞浆钙,并用咖啡因诱导的胞浆钙瞬变（Caffeine-induced Ca2＋ transient,CCT）幅度来反映肌浆网内总钙负荷;用荧光染料Fluo-5NAM直接标记心肌细胞肌浆网内游离钙离子。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果经100nmol·L^-1NPY刺激24h后,心肌细胞肌浆网内游离钙含量明显低于对照组（p〈0.01）;咖啡因诱导下钙瞬变幅度也低于对照组。结论长时间的NPY刺激可导致肌浆网内钙含量减少。