炭疽保护性抗原受体结合区的关键氨基酸位点分析

目的 分析炭疽毒素保护性抗原（PA）受体结合区与其功能相关的关键氨基酸位点。方法通过定点突变的方法将PA的Asp^683分别突变成为一系列带有不同电荷以及不同长度侧链的氨基酸，通过细胞毒性实验分别探询电荷及立体结构对其活性的影响。同时对Asp^683的一些邻近氨基酸进行了定点突变的研究。结果细胞毒性实验显示，不同的突变导致了PA活性不同程度的下降，其中Asp^683电荷的改变对其活性的影响尤为明显，但当它突变为不带电荷的氨基酸时，PA仍然保留了一定的活性；而当Asp^683突变为带正电的Lys后，PA却保留了相对较高的活性。结论Asp^683所带的负电荷在PA与其受体的相互作用中起着关键的作用，但PA与其受体之间的相互作用可能还通过一些其他方式进行。     

LFn-PSCA融合蛋白的表达和生物活性研究

目的 研究大肠杆菌中表达的炭疽毒素致死因子氨基端与前列腺干细胞抗原（PSCA）融合蛋白的生物活性.方法 分别扩增炭疽毒素致死因子LF（lethal factor）N端254个氨基酸（LFn）的基因片段和PSCA氨基酸29～100的基因片段,将两片段先后克隆进分泌型载体pAS22中,构建成表达质粒pAS-LFn-PSCA,在大肠杆菌中表达,并对融合蛋白进行纯化和活性检测.结果 实现了融合蛋白LFn-PSCA的分泌型表达.纯化后纯度可达90%以上.体外试验显示LFn-PSCA对小鼠巨噬细胞无毒性,并保留了LFn与保护性抗原结合的活性.结论 在大肠杆菌中实现了LFn-PSCA的分泌型表达,为继续进行以炭疽毒素为载体增强机体免疫应答的研究打下基础.     

Expression and Purification of the Bacillus anthracis Protective Antigen Receptor-binding Domain

Anthrax is primarily a disease of herbivores, but all mam mals including humans are susceptible. The infection mayprogress to fatal outcome. Bacillus anthracis is the aetio logical agent of clinical anthrax, and is a Gram positivenon motile, aerobic fa…     

炭疽菌保护性抗原受体结合区的表达与纯化

目的　在大肠杆菌中表达炭疽菌保护性抗原受体结合区。方法　将大肠杆菌外膜蛋白A(OmpA)的信号肽序列融合到炭疽菌保护性抗原 (PA)受体结合区 ,即PA结构域 4 (PA D4 )基因的5′端 ,构建成分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中尝试PA D4的表达 ,并对重组蛋白进行纯化和鉴定。结果　重组PA D4以可溶形式表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。经过离子交换层析和凝胶过滤纯化 ,每升诱导培养物可获得约 10mgPA D4。蛋白N端测序表明PA D4与天然序列一致。免疫印迹试验显示PA D4可与抗PA血清结合。结论　在大肠杆菌中实现了PA D4的分泌型表达 ,为进一步评估其作为新型疫苗和潜在治疗药物的可能性打下基础。