复方大青叶注射液对体外培养HT-H9细胞CXCR4启动子活性的影响

目的:探讨复方大青叶注射液对体外培养HT-H9细胞中CXCR4启动子活性的作用.方法:克隆人CXCR4启动子序列,构建报告载体pGL4.17-CXCR4;转染HT-H9细胞株,G418筛选后分组,高、低剂量实验组分别用200、100 mg/L大青液注射液处理,设注射水对照组、空白对照组和未转染对照组;各组处理24 h后...     

如何提高PCR检测的准确率

PCR是近年来发展起来的一种快速的特定DNA片断体外扩增的一种方法。广泛应用于传染病、遗传性疾病和血液病等。具有特异性强、灵敏度高、简便快速、样品取材范围广等特点。但是．由于PCR强大的扩增能力与检测的敏感性．极微量的污染即可导致假阳性、假阴性的产生。如何在检测中避免污染，提高实验的准确率呢?根据我室多年的实践，总结了几点     

如何提高PCR检测的准确率

PCR是近年来发展起来的一种快速的特定DNA片断体外扩增的一种方法.广泛应用于传染病、遗传性疾病和血液病等.具有特异性强、灵敏度高、简便快速、样品取材范围广等特点.但是,由于PCR强大的扩增能力与检测的敏感性,极微量的污染即可导致假阳性、假阴性的产生.如何在检测中避免污染,提高实验的准确率呢?根据我室多年的实践,总结了几点体会和建议,仅供参考.现简述如下.     

先天性甲状腺功能减退症患儿双氧化酶1基因突变研究

目的 研究山东地区先天性甲状腺功能减退症(CH)伴甲状腺肿大患儿双氧化酶1(DUOX1)基因突变类型及特点,为CH的诊断及基因治疗提供理论依据。方法 选取43例经新生儿筛查确诊为CH伴甲状腺肿大患儿及100例正常对照新生儿,提取CH患儿及正常新生儿外周血基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增及一代测序法(Sanger测序法),对DUOX1基因全部外显子进行基因突变检测,结合测序结果及生物信息学数据,分析DUOX1基因是否存在突变,并对发现的单核苷酸多态性(SNP)位点的基因频率进行χ²检验。结果 在43例CH伴甲状腺肿大患儿及100例正常对照新生儿中,均未发现DUOX1基因突变。但在外显子区发现了2个SNP位点(rs16939752,c.3076T>C;rs1706804,c.3228A>G),前者为错义突变(Cys→ Arg),后者为同义突变(Thr→Thr);内含子区发现了1个SNP位点(rs2020216,IVS8+129C>T)。经统计,本文实验组患儿与正常对照组新生儿SNP的基因频率比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 山东地区CH伴甲状腺肿大患儿中,DUOX1基因突变率低,可能不是该地区CH伴甲状腺肿大的主要病因。     

一个甲基丙二酸血症家庭的MUT基因突变研究

目的检测甲基丙二酸血症（MMA）病儿父母的甲基丙二酰辅酶A变位酶（MUT）基因突变类型。方法采用全基因组外显子测序技术（WES）对1例单纯性MMA病儿父母MUT基因进行检测。结果病儿父亲MUT基因发生了错义突变（c.1106G>A）,导致p.Arg369His;病儿母亲MUT基因发生了框移突变（c.2075₂081）,导致p.Leu692ArgfsX11。结论病儿父母均为MMA携带者。     

一例青少年型异染性脑白质营养不良患者的基因变异分析

目的分析一例青少年型异染性脑白质营养不良病(metachromatic leukodystrophy , MLD)患儿的芳基硫酸酯酶A(arylsulfatase A, ARSA)基因的变异情况。方法收集先证者的临床资料, 采集先证者及其他家系成员的外周静脉血样并提取基因组DNA。通过全外显子组测序确定可疑致病变异后, 应用Sanger测序在该家系中进行验证。通过氨基酸多序列比对和蛋白三维模型预测对变异的致病性进行分析。结果患者携带ARSA基因c.257G>A(p.R86Q)和c.467del(p.G156Afs*6)复合杂合变异, 其中c.467del(p.G156Afs*6)移码变异为尚未报道的致病变异。氨基酸多序列比对表明c.257G>A(p.R86Q)变异位点在各种属间高度保守。经蛋白三维结构建模分析发现变异体c.467del(p.G156Afs*6)蛋白构象发生变化导致原有功能的丧失。结论本研究发现新的基因变异位点, 扩宽了MLD的变异谱, 有助于进一步了解基因型与表型之间的关系, 加深对于该病的认识。