褪黑素通过上调泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1抑制MPP+诱导的MN9D细胞凋亡和线粒体损伤

目的 探讨褪黑素（melatonin,MT）在1-甲基-4-苯基-吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP⁺）诱导的帕金森病体外模型中的作用及分子机制。方法 将MN9D细胞分为对照组、MPP⁺组、MT组、治疗组。采用细胞计数试剂盒8检测MT和MPP⁺对细胞活力的影响;采用线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）评价线粒体功能;Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡;通过免疫荧光蛋白质印迹法（Western blotting）检测凋亡相关蛋白［Cleaved-Caspase 3和细胞色素C（cytochrome C,CytC）］以及泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1（ubiquinol-cytochrome C reductase core protein 1,UQCRC1）蛋白的表达;采用干扰RNA技术沉默MN9D细胞中UQCRC1的表达,然后采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。结果 MT可以减轻MPP⁺诱导的细胞活力下降（P<0.05）;恢复MPP⁺造成的线粒体膜电位下降（P<0.05）;减少MPP⁺诱导的凋亡细胞数量（P<0.05）;抑制凋亡蛋白（CytC和Cleaved-Caspase3）的表达（P<0.05）;上调UQCRC1的表达（P<0.05）。沉默UQCRC1后,MT组和治疗组的UQCRC1表达均下降（P<0.05）;MT对MPP⁺诱导细胞凋亡的保护作用下降（P<0.05）;凋亡蛋白（CytC和Cleaved-Caspase3）的表达增加（P<0.05）。结论 MT对 MPP⁺诱导的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能是通过上调UQCRC1抑制神经元凋亡。 [国际神经病学神经外科学杂志, 2023, 50(3): 26-31]     

表阿霉素诱导血管通透性改变的机制

目的:观察乳腺癌常规化疗药物表阿霉素(EPI)对血管内皮细胞通透性的影响,探讨其在静脉注射时造成血管渗漏的机制。方法:用0、0.1、1.0、10、100μg/mlEPI处理人脐静脉内皮细胞株HUVEC-CRL-1730,光学显微镜观察细胞形态改变,Transwell小室检测单层内皮细胞的通透性,MTT法检测细胞增殖效率,RT-PCR和Western blotting检测血管扩张刺激磷蛋白(VASP)mRNA和蛋白表达水平。结果:10μg/mlEPI处理内皮细胞24h后,与对照组相比,EPI能显著抑制内皮细胞增殖(P<0.05),细胞收缩、变形,单层内皮细胞通透性增加(P<0.05);同时,VASP mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:EPI静脉注射造成的血管渗漏可能与EPI抑制细胞增殖以及通过降低VASP蛋白表达导致的内皮细胞通透性增加有关。     

褪黑素调控自噬及铁死亡增强胰腺癌细胞PANC-1对吉西他滨的化疗敏感性

目的 探讨褪黑素联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株PANC-1化疗敏感性的作用及其潜在的作用机制。方法 单独使用吉西他滨和联合褪黑素处理人胰腺癌细胞株PANC-1,生物因子活性检测(CCK-8)检测细胞活力;克隆形成实验观察褪黑素和吉西他滨单独或联合处理对PANC-1细胞克隆形成能力的影响;采用划痕实验和transwell实验检测细胞迁移能力;细胞活性氧和线粒体膜电位JC-1检测试剂盒测定活性氧的合成和膜电位水平;亚铁离子(Fe²⁺)荧光探针检测细胞内Fe²⁺水平;通过免疫荧光和Western blotting检测不同处理组中LC3、P62、GPX4和SLC7A11的蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示,吉西他滨单独处理48 h及72 h后PANC-1细胞活力受到抑制,呈时间剂量依赖性,吉西他滨联合褪黑素组的细胞活力显著低于吉西他滨组,且细胞活力随着褪黑素的浓度升高而下降;细胞划痕、transwell及平板克隆实验结果显示,吉西他滨联合褪黑素组较吉西他滨组比较,细胞的增殖及迁移能力明显受到抑制;通过荧光显微镜观察并分析得出吉西他滨联合褪黑素组的P...     

儿童肝未分化胚胎性肉瘤临床特点及诊疗分析

目的:探讨儿童肝未分化胚胎性肉瘤(undifferentiated embryonal sarcoma of liver,UESL)的临床特点和治疗经验,并综述国内外研究进展,旨在提高对这一罕见且易误诊肝恶性肿瘤的诊疗水平.方法:回顾性分析2017年1月至2020年6月收治的UESL患儿的发病年龄、肿瘤大小及分期、有无...     

青蒿素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞骨架蛋白F-actin的影响

<正>目的:青蒿素是从中药青篙中提取的有过氧基团的倍半萜内酯药物,是一种高效、速效的抗疟中草药物,并在肿瘤辅助治疗中具有免疫调节功能。本实验着重观察青蒿素对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及对细胞骨架蛋白F-actin的影响,并探讨其机制。方法:用RPMI-1640培养基在体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞:(1)按照约每孔1×104个细胞接种于96孔板,培养基中加入不同浓度的青蒿素(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、100μg/ml、1000μg/ml)和0.1%的二甲基亚砜(DMSO)作为对照,     

当归对肾缺血再灌注损伤的保护作用

<正>目的:探究当归对肾缺血再灌注损伤的影响。方法:SD成年大鼠50只,体重240～260g,雌雄各半,随机分为5组:假手术组、缺血组、缺血再灌注组、当归治疗I组、当归治疗II组,每组10只,均以10%乌拉坦腹腔麻醉后行右肾切除术。各组分别处理如下:(1)假手术组:不钳夹左肾动脉;(2)缺血组:以门静脉注入生理盐水1.2ml/100g,1min后夹闭左肾动脉,60min后取血检查;(3)再灌注组:夹闭左肾动脉,60min后去除动脉夹,缝合切口,24h后取血检查;(4)当归治疗I组:以当归针剂1.2ml/100g代替生理盐水,其它操作步骤同缺血组;(5)当归治疗II组:当归使用情况同I组,其它步骤同再灌注组。     

ABCG2胞外段的克隆构建

<正>目的:ABCG2(ATP-binding cassette sub-family G member 2)定位于细胞膜,在正常组织中分布广泛,在人体内承担着维持细胞稳态、血脑屏障、胎血屏障等生理功能。ABCG2是半ATP结合盒转运体,可以转运内源性物质和人工合成的抗肿瘤药物等多种底物。细胞模型和临床研究证明ABCG2过表达会引起多药耐药。因此,ABCG2可能成为提高化疗耐药肿瘤疗效的理想靶点。本文构建ABCG2胞外段,为后续的ABCG2在多药耐药中发挥作用奠定实验基础。     

p53介导的铁死亡在调控人结直肠癌顺铂耐药中的作用及机制

目的：探究p53介导的铁死亡在调控人结直肠癌顺铂耐药中的作用及机制。方法：采用人结肠腺癌细胞株LOVO反复短期暴露于顺铂并逐渐增加顺铂浓度的方法建立耐顺铂细胞株LOVO/DDP。顺铂单独及联合铁死亡激活剂erastin/铁死亡抑制剂liproxstatin-1处理LOVO和LOVO/DDP细胞。CCK-8法测定不同处理组的细胞活力，计算顺铂的IC50值；RT-qPCR检测铁死亡相关基因的mRNA表达水平；采用活性氧（reactive oxygen species,ROS）绿色荧光探针2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCFH-DA）、线粒体红色荧光探针MitoTracker Red CMXRos及线粒体JC-1检测试剂盒测定不同处理组中细胞内ROS和线粒体功能；采用亚铁离子荧光探针FerrOrange检测细胞内亚铁离子含量；Western blot检测不同处理组中溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11, SLC7A11)重组蛋白、谷胱甘肽过氧化物...     

罗哌卡因对人结肠癌顺铂耐药细胞株顺铂敏感性的增强作用及其机制

目的 观察罗哌卡因对人结肠癌顺铂耐药细胞株顺铂敏感性的增强作用，并进一步探讨其作用机制。方法通过浓度递增法将人结肠癌LOVO细胞暴露于顺铂中诱导顺铂耐药株LOVO/DDP形成。将LOVO和LOVO/DDP两种结肠癌细胞株分别分为罗哌卡因联合顺铂组、罗哌卡因组、顺铂组、对照组。对照组加入细胞培养液，顺铂组加入细胞培养液和1.0μmol/L浓度顺铂，罗哌卡因联合顺铂组加入细胞培养液后再同时加入1.0μmol/L浓度顺铂及1 mmol/L浓度罗哌卡因培养。培养14 d，采用平板克隆实验观察细胞增殖能力。培养48 h后，采用Transwell和流式细胞术观察细胞迁移、凋亡情况；JC-1和ROS实验测定细胞线粒体膜电位和活性氧（ROS）;Western blotting法、免疫荧光法检测细胞株中MMP-9及铁死亡相关蛋白GPX4、Nrf-2、SLC7A11；亚铁离子染色法检测结肠癌细胞株中亚铁离子。结果 LOVO细胞中，与对照组比较，顺铂组LOVO细胞株克隆体的形成减少、迁移细胞株数减少、MMP-9蛋白水平降低、凋亡率升高、存活率降低，罗哌卡因组克隆体形成数、迁移细胞株数、MMP-9蛋白水平、细...