基于慢性乙型病毒性肝炎诊断路径的实验诊断学教学模式初探

探讨建立涵盖慢性乙型病毒性肝炎(CHB)诊断与鉴别诊断、治疗、药物选择及毒副作用预测、疗效监测、预后评估等全过程的疾病临床检验诊断路径的教学模式。根据CHB临床诊疗指南, 制订与疾病不同阶段相关的实验室检查检测策略, 建立CHB临床检验诊断路径, 以武汉大学第一临床学院2016级和2017级八年制本科生为研究对象, 通过随堂问卷比较其课堂教学效果。本研究首先建立了获得临床医生认可的CHB临床检验诊断路径, 其涵盖CHB疾病的诊断与鉴别诊断、治疗、药物选择及毒副作用预测、疗效监测、预后评估等全过程。该路径应用于2017级临床医学本科生课堂教学后, 教学质量评估指标均有较大程度的提升。此外, 随堂测验得分也有显著提高。综上, 基于CHB临床检验诊断路径的实验诊断学教学模式, 实现了实验诊断学与临床医学的融合, 提升了学生对CHB诊疗中各种实验室检查检测的整体认识, 教学质量得到了提高。     

Toll样受体7和9基因多态性与慢性丙型肝炎病毒感染的相关性

目的 分析慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染与Toll样受体7(TLR7)和Toll样受体9(TLR9)单核苷酸多态性(SNP)的相关性.方法 选择2011年1月至2012年5月武汉大学人民医院150例慢性丙型肝炎(CHC)患者及同期体检的168名健康对照者.采用Sanger测序法检测TLR7IVS2-151(rs179009)基因型,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测TLR9T-1486C(rs187084)基因型.采用SPSS 15.0软件进行统计学分析,对基因型进行Hardy-Weinberg平衡吻合度检验.结果 TLR7 IVS2-151G频率在男性CHC患者中高于对照组男性(41.4％∶21.6％,x2=7.250,P=0.007,OR=0.389,95％ CI:0.194 ～0.781);TLR7 IVS2-151A的频率在女性CHC患者中显著高于对照组女性(76.9％∶63.1％,x2=7.202,P=0.007, OR=1.942,95％ CI:1.192 ～3.164).TLR9 T-1486C (rs187084)位点不同基因型和等位基因在CHC组和健康对照组间的分布频率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR7 IVS2-151 (rs179009)位点与HCV感染存在相关性,其可能参与了CHC的发病.     

高分辨熔解曲线分析技术检测ALDH2和ADH1B基因多态性

目的建立高分辨率熔解曲线分析体系检测乙醛脱氢酶-2(ALDH2)和乙醇脱氢酶-1B(ADH1B)基因多态性。方法针对ALDH2和ADH1B基因序列设计短片段引物,在核酸扩增后,使用Eva Green染料分析不同聚合酶链反应(PCR)产物,并与Sanger测序法相比较。结果采用高分辨熔解曲线(HRM)法在同一程序下,90min内即可成功检测出ALDH2rs671和ADH1Brs1229984各种基因型,且其结果与Sanger测序一致。结论采用HRM法检测ALDH2和ADH1B基因多态性快速简单、经济有效,值得推广。     

武汉地区536名体检人群ALDH2的基因多态性分布

目的 了解武汉地区体检人群ALDH2基因多态性的分布情况.方法 选取2015年6月至2016年4月在武汉大学人民医院进行ALDH2基因检测的无亲缘关系健康体检人群536名,其中男性384名,女性152名.采用基因芯片法检测ALDH2 rs671基因多态性,同时与已报道的其他地区ALDH2 rs671基因型结果进行比较.结果 在武汉地区536名体检人群中,ALDH2 rs671三种基因型即GG型、GA型和AA型频率分别为64.18%、31.90%和3.92%;不同年龄段ALDH2基因型分布比较差异无统计学意义(P>0.05).本地区与上海、洛阳、西宁、四川地区ALDH2 rs671基因型比较差异均无统计学意义(P>0.05),与北京、台湾和山东地区比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 武汉地区ALDH2 rs671基因多态性分布具有地域特异性,ALDH2 GG型是本地区优势基因型.     

基于3′/5′端表达不平衡策略的荧光定量PCR法检测非小细胞肺癌患者血浆游离循环RNA中ALK融合基因

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆游离循环RNA(cfRNA)中的ALK融合基因的表达水平,为指导临床个体化用药提供依据。方法选取经高通量测序验证的已知ALK融合基因的NSCLC患者13例、ALK融合基因阴性的NSCLC患者16例和30例体检健康者,采集各组血液样本并分离血浆cfRNA,用荧光定量PCR检测各组ALK基因3'端第20外显子(E20)和5'端3外显子(E3)的表达量,并计算ALK融合基因的表达水平。结果已知ALK融合基因的NSCLC患者、ALK融合基因阴性的NSCLC患者和体检健康者血浆cfRNA中ALK融合基因表达水平分别为278.3(45.3,987.4),4.08(0.38,9.04),3.77(0.34,8.37),各组间差异有统计学意义(H=29.93,P0.01);组间两两比较结果表明,已知ALK融合基因的NSCLC患者血浆中ALK融合基因的表达水平高于ALK融合基因阴性的NSCLC患者或体检健康者(U分别为0,0,P均0.01),而后两组间差异无统计学意义(U=232,P=0.86)。结论基于3'/5'端表达不平衡策略的荧光定量PCR法可以快速检测NSCLC患者血浆cfRNA中ALK融合基因。     

采用生物信息学策略对鼻咽癌相关抗原基因NPC—A—7组织分布的初步分析

目的 应用生物信息学的方法分析鼻咽癌相关抗原基因NPC—A—7的组织分布情况，以推测鼻咽癌相关抗原基因NPC—A—7的生物学功能与特性。方法 应用美国国家生物信息中心(NCBI)中的核酸数据库、EST数据库、Unigen数据库、Source资源和相应软件分析。结果 鼻咽癌相关抗原基因NPC—A—7定位于19p13．11，广泛表达于许多肿瘤组织，特别是在脂肪肉瘤、转移性卵巢癌、鼻咽癌、乳腺癌等肿瘤组织中明显高表达，而在皮肤、子宫颈、胃等正常组织中不表达。结论 鼻咽癌相关抗原基因NPC—A—7编码的抗原可能与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。     

湖北地区无创产前基因检测结果分析

目的探讨无创产前基因检测(NIPT)在产前筛查和产前诊断中的应用,评价其准确性和适用范围。方法回顾性分析从2016年1月至2017年12月在湖北省人民医院行NIPT检测的孕妇9 584例,评价湖北地区不同区域的胎儿染色体非整倍体异常的一致性,将孕妇按照年龄、孕周、胎儿DNA浓度以及孕产史的不同分组,分析影响NIPT结果的因素。NIPT高风险孕妇采用染色体核型分析或染色体微阵列分析进行产前诊断,NIPT低风险孕妇进一步行超声检查;对所有孕妇进行电话随访或病历随访,根据随访结果评价NIPT对染色体非整倍体异常的检测效能。结果在湖北地区9 584例孕妇中,各区域孕妇的21、18、13-三体、性染色体异常和其余染色体异常高风险率差异无统计学意义(P0.05);9 584例孕妇中,高龄组(≥35岁)孕妇2 425例,其21、18-三体、其余染色体高风险率和总体高风险率较低龄(35岁)组孕妇显著上升(P0.05);具有不良孕产史孕妇2 794例,其21、18-三体,性染色体、其余染色体高风险率和总体高风险率显著升高(P0.05)。该方法对21、18、13-三体、性染色体异常和其余染色体异常诊断的特异度均在99.98%以上,阳性预测值分别为95.8%、85.7%、62.5%、53.8%和33.3%。结论 NIPT对湖北地区染色体非整倍体异常的筛查效能良好,有效地降低漏诊和介入性产前诊断的比例,是有效的产前筛查方法;高龄和不良孕产史是影响胎儿染色体非整倍体异常的危险因素。     

Toll样受体9基因rs187084和rs352140位点多态性与Hp感染及其相关疾病易患性的关系

目的探讨Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)基因rs187084和rs352140位点多态性与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染以及相关疾病的关系。方法收集2012年12月到2013年6月在武汉大学人民医院内镜中心进行胃镜活检的患者326例,同时采集患者外周血标本。用胶体金免疫分析法检测患者外周血中抗Hp抗体。用等位基因特异性聚合酶链式反应(allele specific polymerase chain reaction,AS-PCR)方法检测TLR9基因rs352140和rs187084位点基因多态性。结果TLR9基因rs187084位点和rs352140位点CC、TT和CT各基因型在抗Hp抗体阳性组和阴性组中的分布差异均无统计学意义(χ2=3.91,0.90;P=0.14,0.64);TLR9基因rs187084和rs352140位点各基因型在正常胃黏膜组织组与Hp感染相关疾病组中的分布差异均无统计学意义;在分析rs187084位点时,基因型频率的相对风险分析显示,CC基因型患胃癌的风险是TT和CT基因型的2.46倍(OR=2.46,95%CI:1.01~6.01,P=0.04)。结论 TLR9基因rs187084和rs352140位点多态性与Hp感染可能无相关性;rs187084位点CC基因型可能是胃癌发病的危险因素。     

LNA PCR检测骨髓增殖性疾病JAK2基因V617F突变

目的:建立一种检测酪氨酸激酶2(JAK2)基因V617F突变的锁核酸PCR(LNA PCR)方法,并探讨其对骨髓增殖性疾病(MPD)的临床应用价值。方法:收集68例确诊为MPD患者外周血或骨髓标本,其中真性红细胞增多症(PV)37例、原发性血小板增多症(ET)22例、原发性骨髓纤维化(MF)9例。根据JAK2基因V617F突变位点设计引物和LNA,建立快速检测JAK2基因V617F突变的LNA PCR方法,同时以DNA直接测序法进行验证,并检测上述标本JAK2基因V617F突变率。结果:所建立的LNA PCR方法能有效检测JAK2基因V617F突变,其特异性和灵敏度明显高于DNA测序法(P<0.05);LNA PCR方法可以检测出1%的JAK2基因V617F突变型杂合子。68例MPD患者标本共检测出JAK2基因V617F突变55例,检出率80.88%。其中37例PV中JAK2基因V617F突变34例(91.89%),22例ET中JAK2基因V617F突变15例(68.18%),9例MF中JAK2基因V617F突变6例(66.67%)。结论:LNA PCR方法检测灵敏度高,能有效提高JAK2基因V617F突变检出率。     

实验诊断学理论教学质量评价调查分析

目的了解学生对实验诊断学理论教学质量的评价。方法在2018年上学期末,对武汉大学第一临床学院2016级五年制和"5+3"学制的两个班学生展开问卷调查,了解其对实验诊断学教学质量的评价。结果绝大多数学生偶尔才会在课前了解学习目标;大多数学生更喜欢自主学习方式,同时也掌握了一些相应的学习方法;教师教学方法有待改善,教学过程中应更加突出重难点。学生的建议主要是增加案例分析,结合临床实践,加强同学间的互动,课上留出时间归纳总结,组织随堂测试。结论针对实验诊断学理论教学中存在的问题拟定相应整改方案,在下学期理论授课过程中实施,以进一步提高课程教学质量。