小型猪在异种移植中的应用前景

目的 建立狂犬病病毒感染动物疾病模型.方法 狂犬病病毒CVS-B2C毒株以10LD50剂量腿部肌肉注射接种4～6周龄的BALB/c小鼠,0.2 mL/只,于BSL2实验室负压IVC设备内饲养观察,并对其模型进行评价.结果 小鼠接种狂犬病病毒后一周左右就出现临床症状,表现为饮食量下降,毛皮慢慢失去原先的光泽,体重下降,并出现麻痹等症状,进而死亡,部分小鼠出现躁狂的症状或抽搐性和强直性痉挛,而对照组小鼠则表现正常.DFA法检测结果:感染上狂犬病毒的小鼠脑组织涂片中出现特异性荧光抗体染色反应,而对照组动物的小鼠脑组织涂片未出现荧光抗体染色反应.RT-PCR法检测结果:从感染小鼠脑组织标本中提取病毒RNA,引物扩增出的目的 基因片段,大小约为1kb,为N蛋白.免疫组化法检测结果:感染狂犬病毒的小鼠脑切片显示出棕色阳性颗粒,对照组小鼠脑切片染色阴性.病理检测结果:HE染色可见感染小鼠脑组织炎性细胞浸润.神经细胞胞质内出现内基体以及神经细胞退行性病变.结论 成功的复制出小鼠狂犬病病毒感染模型,为研究和控制狂犬病奠定了基础.     

重组鸡Igλ轻链真核细胞分泌表达及其单克隆抗体的制备与鉴定

目的: 构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链, 制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb).方法: PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因, 限制性酶切消化后, 定向克隆于真核表达载体pcDNA3, 构建具有6×His标签、分泌表达的重组载体pcDNA-λ.重组载体转染COS7细胞后, SDS-PAGE分析真核表达载体pcDNA-λ在COS7细胞的分泌表达.用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠, 取脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆.结果: 成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体, SDS-PAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达.杂交瘤细胞经筛选与鉴定, 获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株, Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性.结论: 构建了重组表达载体pcDNA-λ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链.并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb.为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础.     

2003年中药材市场回顾与前景展望

2000年已经过去,新的充满希望的2004年已经来临.回首过去,可以说2003年的药材市场是一个极不平凡、让人难以忘怀的一年.在这一年里,药材市场总体来说,需求稳步增长,市场交易量增加,药价升多降少,大多数品种呈现慢涨趋势,这也是2003年药市的主要特点.药商普遍感到去年的生意较往年有所起色,利润有所增加,市场机会增大,从事中药材生产经营的人员比往年增加.展望未来,机遇仍然大于挑战,前景一片光明.     

禹州：三七价格暴涨 黄芪货丰价落

近期药材市场开始进入销售“黄金季节”，进场人员明显增多：市场内大货走动顺畅，零星销售活跃。部分药材品种价格增涨，个别品种价格涨势惊人．但大部分药材品种价格保持稳定。具体市场行情如下：     

氢气通过诱导血红素加氧酶1表达减轻氧中毒急性肺损伤的实验研究

目的 研究氢气(H2)对于防治氧中毒急性肺损伤(HALI)的作用机制.方法 将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:正常对照组、氧中毒模型组(HALI组)和H2治疗组(H2组).其中正常对照组大鼠仅暴露于常压空气,HALI组和H2组大鼠暴露于100%医用纯氧,每隔12 h分别腹腔注射医用生理盐水和氢饱和生理盐水(10 ml/kg).60 h后对各组大鼠进行动脉血氧分压检测和肺组织病理学检查,并应用RT-qPCR和Western印迹技术检测肺组织中血红素加氧酶1(human heme oxygenase 1,HO-1)的mRNA转录水平和蛋白表达水平.结果与HALI组相比,H2组大鼠因慢性纯氧暴露导致的肺损伤程度明显减轻,动脉血氧饱和度升高,HO-1蛋白及其mRNA在肺组织中的表达显著升高.结论 HO-1可能在H2防治大鼠HALI中发挥重要作用.     

血液制品病毒灭活／去除技术平台的建立与应用

目的：建立血液制品病毒灭活／去除技术并应用于血液制品的病毒灭活／去除工艺验证。方法建立指示病毒库以及S／D处理法、低pH孵放法、干热法、巴氏消毒法、纳米膜过滤法等血液制品病毒灭活／去除技术,采用细胞病变法测定病毒滴度,Spearman和Karber法计算病毒滴度,病毒滴度降低量（ LRV）≥4判为有效,对企业的血液制品样品进行病毒灭活／去除验证。结果 S／D处理法和低pH孵放法可有效灭活有包膜指示病毒,干热法和巴氏消毒法可有效灭活有、无包膜指示病毒,纳米膜过滤法可在一定过滤量范围内去除PPV指示病毒。结论所建立的血液制品病毒灭活／去除技术可用于血液制品的病毒灭活／去除工艺验证,以提高血液制品的病毒安全性。     

发色底物法在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶的活性

目的：优化发色底物法,使其在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶（ AAT）的活性并用于血浆蛋白纯化过程中各样品活性的检测。方法采用酶标仪动态监测模式观察酶浓度和反应时间对酶促反应的影响;计算初速度并确定被底物饱和的最大酶浓度。将AAT与胰蛋白酶孵育,剩余靶酶和底物作用产生的光密度可反映AAT的活性。通过△D与AAT标准品活性进行拟合建立标准曲线,测定相关样品的活性,进行精密度和准确度验证。结果胰蛋白酶浓度为0．0625 mg／ml,20 min内酶促反应处于初速度内。 AAT标准曲线范围为200～1200 IU／ml, r＞0．99。该法测定Cohn Ⅳ、前处理液、洗脱峰样品中AAT的活性分别为（720．59±18．63）、（601．84±19．18）、（568．09±24．83）IU／ml。每个样品之间的RSD＜10％,加样回收率均在90％～110％。结论发色底物法经优化后,准确度和精密度大幅度提高,更适于实验室制备AAT或不同生产阶段样品的活性检测。     

α2－巨球蛋白活性检测方法的建立与优化

目的：建立α2－巨球蛋白（α2－macroglobulin ,α2－M）活性检测方法,检测Cohn组分Ⅳ中α2－M的活性。方法α2－M可与胰蛋白酶相互作用形成“α2－M－胰蛋白酶复合物”,利用酶标仪检测出“α2－M－胰蛋白酶复合物”与小分子底物Na－苯甲酰－DL－精氨酸－对硝基酰胺盐酸盐（ Na－benzoyl－DL－arginine 4－nitroanilide hydrochloride ,BAPNA）显色反应后的光密度值（410 nm）,根据建立的血浆α2－M活性标准曲线,定量计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M的活性。结果通过对实验体系中几个关键实验条件进行优化,建立了血浆α2－M活性标准曲线,并计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M活性的平均值为1．578 PU／ml。结论以正常人混合血浆作为参考标准品,用发色底物法检测Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M的活性,方法简便易行,为α2－M制备过程中活性测定提供了实验基础。     

人内皮抑素-白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定

目的构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并在毕赤酵母(pichia pastoris)中获得高效表达。方法通过重叠延伸PCR的方法 ,构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并克隆至pGEM-T载体中,测序正确后,将其亚克隆至酵母表达载体pPIC9中,然后将鉴定正确的重组表达载体pPIC9/ES-HSA线性化后转化入GS115宿主菌。采用原位双膜法筛选高表达菌株,对高表达菌株进行扩大培养,将表达上清液盐析后分别经阳离子交换层析、阴离子交换层析和亲和层析纯化,获得了重组融合蛋白,采用MTT法测定融合蛋白中内皮抑素的活性。结果成功构建了人内皮抑素-白蛋白融合基因和重组表达质粒pPIC9/ES-HSA,并筛选到表达较为理想的重组菌株pPIC9/ES-HSA/GS115,经甲醇诱导表达后纯化,融合蛋白的纯度达到92%以上,并具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞的增殖活性。结论本方法可成功获得具有人内皮抑素生物活性的重组人内皮抑素-人血清白蛋白融合蛋白。     

凝血因子与创伤止血

凝血因子参与机体凝血过程的内、外源性途径,与机体抗凝系统相互协调,两者的动态平衡维持着体内血液正常的生理状态。该文从分子结构、理化特性、生理功能等方面对参与创伤止血相关的凝血因子进行了详述,同时,对其在创伤出血控制、凝血方面发挥的重要作用及相关凝血因子类制品的研究进展、使用现状进行了综述,以期为凝血因子类药物的研发及应用提供借鉴。