Reelin调节小鼠喙端迁移流发育的形态学观察

目的 探讨小鼠室管膜下区（SVZ）的神经干细胞孵育成熟以及沿喙端迁移流（RMS）切线迁移至嗅球(OB)的过程,尤其是Reelin对细胞迁移和细胞分化的影响。方法 选用野生型（WT）小鼠50只和纯合reeler小鼠23只胚胎16 d至生后90 d的各年龄点小鼠大脑,应用尼氏染色、免疫荧光染色、墨汁灌注及电子显微镜技术标记并观察小鼠大脑的神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系,比较两组小鼠RMS的发育情况。结果 胚胎后期至出生早期,在SVZ分布着大量的胶质细胞、神经干细胞和血管网,它们相互联系构成SVZ神经干细胞孵育的血管龛(niche);神经干细胞在niche中孵育成熟后可以进入RMS,切线迁移至嗅球,到达嗅球后转变为放射状迁移,分化为各种神经元整合入嗅球;神经干细胞在RMS的迁移过程中,放射状胶质细胞协同血管为其提供支架引导;reeler小鼠也能形成RMS,但形态有所改变,主要在嗅球处,神经干细胞失去规律排列,呈散乱分布。结论 室管膜下区的niche是神经干细胞的主要来源;血管协同放射状胶质细胞为RMS中的神经干细胞提供支架引导作用;作为调节细胞迁移的重要信号,Reelin可以通过其交互作用影响血管的发育,Reelin缺失导致嗅球处神经干细胞放射状迁移的转变障碍。     

DiI示踪标记固定脑组织内神经元及其突起的方法

目的:对DiI标记固定大脑皮质内神经元及其突起的技术进行改进,使操作更简单、便捷,效果更为高效、理想。方法:将DiI颗粒植入已固定小鼠大脑胼胝体,然后将标记后的脑组织放入4%多聚甲醛固定,于室温下避光孵育1~2周。结果:这种标记方法可以很直观地显示出大脑皮质神经元及其突起的精细结构,其中包括树突棘。结论:DiI示踪标记法可以用于标记固定脑内的神经元及其突起和树突棘,效果令人满意。     

Reeler小鼠皮质片层化及细胞极性化

目的 探讨 Reelin 在皮质片层化形成及细胞分化、极性化中的作用及相关机制。 方法 取 reeler 小鼠和野生型（WT）小鼠受孕17 d（E17）至出生21d（P21）各年龄点脑部共96例。免疫荧光标记技术与 5’-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）法检测两组小鼠大脑发育中放射状胶质细胞、增殖的神经干细胞及极性蛋白的表达,并使用 Nissl 染色技术及 DiI 示踪技术分别对新皮质分子层发育、海马 CA1 区锥体细胞极性方位以及皮质锥体细胞极性程度进行统计。 结果 Reeler 小鼠大脑发育中齿状回内放射状胶质细胞数量减少,极性紊乱,BrdU阳性细胞散在分布,数量减少;由于极性细胞未得到适当的终止信号越过皮质Ⅱ层进入分子层,皮质片层化紊乱;大脑皮质及海马锥体细胞极性发生改变。 结论 Reelin 在神经细胞迁移、神经元增殖和皮质片层化的过程中发挥重要作用,尤其对锥体细胞极性起着至关重要的影响。