1994-2006年深圳市分离的B型流感病毒分子进化研究

目的 通过对深圳市分离的B型流感病毒HA1分子系统进化分析,初步了解深圳市B型流感病毒的流行变异规律.方法 选取深圳市1994-2006共13年间分离的50株B型流感毒株,通过RT-PCR将其HA1基因片段扩增后进行序列解析,然后,通过MEGA等软件对序列进行分子进化分析.结果 1994-2006年间深圳市流行的B型流感病毒分为Yamagata和Victoria两个亚系,两系的毒株分别是不同年份的主要流行株.两个亚系的HA1分子具有1个糖基化位点的差异,在4个抗原决定簇区域也分布有多个氨基酸位点的变异.结论 1994-2006年间深圳市B型流感病毒的两个亚系分别在不同年份主导流行,但变异均比较缓慢.

Abstract：

Objective To study the prevalence and variation of influenza B viruses of Shenzhen. Methods Fifty strains influenza B viruses in Shenzhen from 1994 to 2006 were selected. HA1 gene were amplified by RT-PCR and sequenced. Phylogenetic analysis of HA1 was conducted by MEGA program. Results The influenza B viruses of Shenzhen were divided into Yamagata and Victoria lineage. The two lineages prevailed respectively in different years from 1994 to 2006. The variance of glycosylation site and some mutations of antigenic determinants were detected in the two lineages. Conclusion The viruses of Yamagata and Victoria lineage prevailed respectively in different years in Shenzhen but the mutation rates of the two lineages were slowly.     

1995-2007年深圳市H1N1流感病毒血凝素基因的序列分析

目的 研究1995-2007年深圳市流行的H1N1流感病毒血凝素(HA)的基因特性.方法 选取在该期间分离培养到的64株H1N1流感病毒,对其进行HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用Simmonic软件和Mega软件对其进行分析.结果 深圳市H1N1流感毒株在进化树上可以划分为A、B、C三个分枝.部分2005-2006年毒株与2001年毒株在同一分枝上.通过同源性分析发现部分WHO所推荐的疫苗株在时间上滞后于深圳株.深圳H1N1株的4个抗原决定簇及受体结合位点均发生了氨基酸的替换.除1995年外其余年份的毒株均在137位上发生了氨基酸的缺失.结论 1995-2007年深圳市H1N1毒株氨基酸的变异主要集中在抗原决定簇及受体结合部位.并且抗原决定簇的变异活跃区域随时间的推移发生了转移.     

深圳市首例人禽流感病例的实验室检测分析

目的对深圳市首例人禽流感病例进行实验室确诊，并研究其携带病毒关键基因的遗传特性。方法采用实时荧光RT-PCR方法检测高致病性禽流感病毒（H5N1）核酸，采用血凝抑制方法检测患者血清抗高致病性禽流感病毒的抗体滴度变化，利用MEGA3．1软件分析患者携带病毒HA、NA基因的进化关系。结果成功确认了深圳市首例人禽流感病例，患者携带病毒为H5N1高致病性禽流感病毒，HA、NA基因进化关系比较特殊。结论深圳地区禽鸟中可能携带高致病性禽流感病毒，具有潜在感染人类的可能。     

深圳市流行性感冒监测参考线的设计及预警应用

目的 为科学有效地预警流行性感冒(流感)的爆发和流行,制定符合深圳市的流感监测基线币Ⅱ警戒曲线.方法 收集深圳市第一人民医院、深圳市妇幼保健院2003-2006年的流感监测资料,以周为单位,对流感样病例百分比ILI(%)进行统计分析,以确定基线和警戒曲线.结果 深圳市流感监测结果 可靠,基线值为5.95%,警戒曲线具有较好的灵敏度和季节性,能及时发现异常值.结论 深圳市的流感监测参考线具有较好的灵敏性和季节性,能起到一定预警作用.     

病例定义改变对流感监测系统的影响

目的评价新修订的流感样病例定义在流感监测中的适用性和灵敏性，为科学制定流感样病例定义提供参考依据。方法通过对深圳市四区2005～2007年流感样病例暴发疫情中的流感样病例个案进行回顾性分析，重点比较各种流感样症状的频率、病例定义的范围和疫情规模，使用SPSS（11．0）和EPIINFO进行统计分析。结果深圳市流感样病例暴发疫情资料真实可靠，1529例（83．6％）符合流感样病例定义，68例（3．7％）未符合流感样病例定义，未有详细流行病学调查个案232例（12．7％）。流感样病例症状前3位顺位分别为咳嗽（70．2％），头痛（46．6％）、咽痛（41．9％）。新修订的流感样病例定义与原病例定义对流感样病例的一致率为83．4％，增加“头痛”（OR=0．37，adjOR=0．29～0．48）或“流涕”（OR=0．48，adjOR=0．38～0．60）症状，能有效扩大流感样病例定义的涵盖范围。另新修订的流感样病例定义，0-4人组段的疫情规模起数明显上升（Χ^2=10．6，P〈0．01），整体上降低了流感样病例暴发疫情规模的判断。结论我国新修订的流感样病例定义清晰明确，易于操作，但涵盖范围缩小，降低对流感样病例暴发疫情规模的判断。在新修订的病例定义基础上增加“头痛”或“流涕”一项或两项症状，均能较大程度扩大病例定义的适用范围，提高代表性和灵敏性。     

深圳流感监测网络样品采集工作质量评估

目的为客观评价深圳市流感监测网络的流感样病例(ILI)标本的采样质量,进一步提高流感病毒分离率。方法检测分析全市8所综合监测医院为期10周(2007年第9～18周)的ILI咽拭子标本,集中进行甲乙型流感荧光RT-PCR检测,并与日常流感病毒分离及ILI监测结果相比较。结果在采集的547份ILI咽拭子标本,甲乙型流感荧光RT-PCR阳性率为41.5%(227/547),其中甲型流感病毒179份,乙型流感病毒48份;流感病毒分离阳性率为10.6%(58/547),以甲3亚型流感病毒为主(69.0%),流感RT-PCR阳性率高于病毒分离阳性率(χ2=156.8,P<0.0001)。RT-PCR与病毒分离的阳性一致率为23.3%(53/227),另随着CT值的升高,阳性一致率逐渐降低(趋势χ2=2.903,P=0.0018)。结论通过流感RT-PCR与病毒分离培养两种方法的阳性率比较,能有效反映流感监测采样与检测工作的整体运行情况,是对流感监测工作质量较为简单可行的评估方法之一。     

2010年深圳市流感流行病学分析

目的对2010年深圳市流感监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防治提供科学依据。方法收集全市31家监测单位的流感样病例数据、病原学检测结果和暴发疫情资料进行分析。结果 2010年深圳市的流感样病例百分比（ILI%）为5.43%。2010年全市共采集日常监测ILI咽拭标本4031份,分离出445株流感病毒,阳性率为11.0%,其中14株季节性H1N1亚型（3.1%）,42株季节性H3N2亚型（9.4%）,171株甲型H1N1亚型（38.4%）,213株B（Victoria,47.9%）亚型,5株B（Yamagata,1.1%）亚型。2010年全市报告了89起ILI暴发疫情,发病总人数741人,流感PCR检测阳性79起,其中季节性甲型6起（6.8%）,乙型67起（75.3%）,甲型H1N1流感6起（6.8%）。结论 2010年深圳市流感活动较低,未出现明显的高峰。     

双重荧光定量RT-PCR快速检测N_1、N_2亚型流感病毒的研究

目的利用荧光定量RT-PCR技术建立快速检测流感病毒N1、N2亚型的方法。方法根据N1、N2亚型流感病毒NA基因的相对保守序列,设计两对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立、优化反应体系后,采用十倍稀释体外转录RNA检验建立体系的灵敏度和重复性并建立相对定量标准曲线;利用多种流感病毒和具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性。结果 N1、N2亚型流感病毒的检测灵敏度为10拷贝/μl,扩增效率分别为102.21%和101.78%,标准曲线相关系数大于99%,重复性良好,特异度实验未发现有非特异性扩增。结论双重荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确的检测N1、N2亚型流感病毒。     

荧光定量RT-PCR在流感病毒检测上的应用

目的　探讨实时荧光定量RT PCR检测方法在流行性感冒检测诊断上的意义。方法　收集集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本 16起 2 0 7份和双份血清标本 10 4份 ,应用荧光定量RT PCR检测方法、MDCK细胞培养法和血凝抑制试验进行病原学和血清学检测。结果　 2 0 7份集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本中用荧光定量RT PCR检测 ,阳性 79份。阳性率 38 16 % (79 2 0 7)。MDCK细胞培养 ,16起中有 13起共 14 5份咽拭子有 6 2份标本阳性。阳性率 2 9 95 % (6 2 2 0 7)。两者的阳性率差异有显著意义 (χ2 =8.6 4 ,P <0 0 0 5 )。有 9起 10 4份成功的采集了双份血清 ,经HI试验有 6 4份双份血清与H3N2亚型抗原产生血抑 4倍增长 ,阳性率 6 1 5 4 % (6 4 10 4 )。结论　荧光定量RT PCR方法检测流感病毒能够在 3～ 4h内得出结果、且操作方便、特异性强、灵敏度高。因此我们认为实时荧光定量RT PCR方法 ,可作为一种快速的流感病毒检测诊断方法。     

带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统的初步构建

目的构建带TAP标签流感病毒8质粒反向遗传包装系统，以期应用于流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理的研究。方法两步RT—PCR方法扩增流感病毒8基因，人工合成TAP基因序列，并采用3次PCR的方法融合TAP基因和NP基因。将流感病毒8基因和NP—TAP基因克隆于反向遗传载体PIVVⅡ-1，阳性克隆用PCR和序列测定进行鉴定。结果经PCR和序列分析鉴定，筛选到了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传阳性克隆。结论成功构建了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统，为进一步研究流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理奠定了基础。