免疫金银法检测抗角质蛋白抗体的影响因素

目的:探讨免疫金银法检测抗角质蛋白抗体(AKA)的影响因素。方法:收集AKA阳性的类风湿性关节炎患者血清20份,同时收集20份正常健康者血清作为对照,采用免疫金银法检测上述血清AKA,检测中采用不同的封闭液、不同浓度的金标抗体、不同的显色时间,比较分析不同条件下免疫金银法检测AKA的阳性率及结果易判断程度,以确定较合适的检测条件。同时采用免疫荧光法检测AKA,比较2种方法检测AKA的敏感性。结果:以含10%~20%的羊血清及1%BSA的封闭液、1:80~1:320的金标抗体、10~15 min的显色时间为较合适的检测条件。免疫金银法检测AKA较免疫荧光法敏感性高,且差别有统计学意义。结论:免疫金银法检测AKA对类风湿性关节炎具有较高的敏感性和特异性,临床上用于类风湿性关节炎的辅助诊断具有较高的诊断价值。     

JNK磷酸化Bad在脑缺血神经元凋亡中的作用

目的探讨JNK磷酸化Bad在大鼠缺血性神经元凋亡中的作用。方法 20只大鼠均分为4组：假手术组、缺血复灌组、溶剂对照组和SP600125组。制作大鼠全脑缺血模型,应用免疫沉淀和免疫印迹法检测大鼠脑缺血复灌1 d海马CA1区神经元Bad与14-3-3及Bad与Bcl-Xl的结合、Bad丝氨酸128位磷酸化[p-Bad（S128）]水平、Caspase-3蛋白表达情况。结果与缺血复灌组相比,SP600125组海马CA1区神经元Bad与14-3-3的结合明显增高,Bad与Bcl-Xl的结合、p-Bad（S128）、Caspase-3表达显著减少（均P〈0.05）。结论 JNK介导的Bad（S128）磷酸化在大鼠缺血性脑损伤中发挥了重要作用。     

抗大鼠肾小球基底膜肾炎模型建立方法的改进

目的探讨快速建立抗大鼠肾小球基底膜（glomerular basement membrane，GBM）肾炎动物模型的方法。方法30只正常SD大鼠随机分为三组，肾炎模型A、B组和正常对照组。肾炎模型A、B组大鼠一次性尾静脉注射兔抗GBM血清；正常对照组，尾静脉注射等量正常兔血清。肾炎模型A组大鼠尾静脉注射兔抗大鼠GBM血清前一周，通过足垫皮内注射正常兔血清进行预免疫。上述三组大鼠于尾静脉注射兔血清后第2、7、14和21天，检测24h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮含量；第21天处死大鼠取肾组织观察肾小球和肾小管的病理变化。结果肾炎模型A、B组，尾静脉注射兔抗大鼠GBM血清后，24h尿蛋白，血肌酐和血尿素氮含量均明显升高（P〈0．01），A组升高程度均较B组明显（P〈0．05）。光镜检测A组新月体形成率较B组明显升高，肾小管内蛋白管型较B组多，部分肾小球不完全纤维化，B组肾小球未见纤维化。对照组上述指标均无明显变化。结论大鼠注射兔抗GBM血清之前，进行正常兔血清预免疫，可以更快诱导大鼠产生抗GBM肾炎。     

Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中的作用

目的 探讨Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗肾小球基底膜(CBM)肾炎中的作用.方法 复制大鼠抗GBM肾炎模型,在实验室的2、7、14、21和28 d,行以下处理:收集24 h尿、血清样本检测大鼠24 h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量;取肾组织经光镜、电镜观察肾组织病理变化;采用KT-PCR法和Western blot法检测肾组织中Fas、FasL和Caspase-3的表达情况;采用分光光度法检测肾组织中Caspase-3活性;采用TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况.结果 与正常对照组大鼠相比,肾炎模型组大鼠24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量均明显升高(P<0.01);肾组织中Fas、FasLmRNA及其蛋白和Caspase-3mRNA及其蛋白活性均明显增加(P<0.01);肾组织中凋亡细胞数明显增多(P<0.01),且与Fas、FasL及Caspase-3表达呈正相关(P<0.01).结论 Fas/FasL诱导的细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中发挥重要作用.     

快速斑点酶标法检测抗核抗体

目的建立一种快速、简便的抗核抗体(ANA)检测方法。方法采用快速斑点酶标法(Rapid-DotELISA,R-Dot-ELISA)检测20份ANA阳性系统性红斑狼疮(SLE)患者血清和20份阴性正常健康者血清的ANA。检测中采用不同浓度的核抗原、不同的封闭液、不同浓度的酶标抗体、不同显色时间,摸索最佳检测条件。确定检测条件后,采用R-Dot-ELISA法、ELISA法和免疫荧光法检测190例系统性自身免疫性疾病患者和50例健康者血清的ANA,比较R-Dot-ELISA法与ELISA法和免疫荧光法检测的一致性。结果核抗原浓度为40~160mg/L、封闭液为含1%牛血清白蛋白和10%~20%小牛血清的PBS,酶标抗体稀释度为1∶80~1∶320,显色时间3~5min。R-Dot-ELISA与ELISA法相比,检测结果一致率为95.4%(r=0.907,P0.05),与免疫荧光法相比,检测结果一致率为96.7%(r=0.932,P0.05)。结论 R-Dot-ELISA检测ANA具有较高的敏感性及特异性,且快速、简便,适用于基层流行病学调查和临床快速诊断。     

开设微生物学与免疫学综合性实验教学的体会

医学微生物学与免疫学是一门重要的医学基础课,具有较强的实践性和应用性。实验教学是其重要的组成部分,是理论联系实际的重要环节。在实验教学中增加综合性实验的内容,有效的提高了学生综合运用理论知识和实验技能分析和解决实际问题的能力、培养学生的创新意识、创新能力和科研思维方式,有助于进一步提高教学质量,培养实用型人才。     

JNK磷酸化14-3-3在大鼠缺血性脑损伤中的作用

【摘要】目的 探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化14-3-3在大鼠缺血性脑损伤中的作用。方法 20只大鼠均分为4组：假手术组、缺血复灌组、SP600125组和溶剂对照组。制作大鼠全脑缺血模型,应用免疫沉淀和免疫印迹法检测4组大鼠脑缺血复灌12h海马CA1区神经元14-3-3磷酸化（p-14-3-3）、14-3-3与Bax结合、Bax在胞浆和线粒体的蛋白表达情况。结果与假手术组相比,缺血复灌组、溶剂对照组及SP600125组胞浆中的p-14-3-3蛋白、线粒体中的Bax蛋白均增高,14-3-3与Bax的结合降低,SP600125组的胞浆p-14-3-3蛋白、线粒体Bax蛋白低于缺血复灌组和溶剂对照组,14-3-3与Bax的结合高于缺血复灌组和溶剂对照组（均P<0.05）。结论JNK磷酸化14-3- 3在大鼠缺血性脑损伤中发挥了重要作用。     

LncRNA Gm13568调控A1型星形胶质细胞活化及在EAE小鼠病变中的作用

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNA)Gm13568对A1型星形胶质细胞活化及实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠疾病进程的影响与分子机制。方法:构建特异性靶向星形胶质细胞的lncRNA ...     

推进免疫学教学改革,迎接临床专业认证?

医学临床专业认证是教育部为提高高校临床专业教学水平，适应医学教育国际化的要求，提升医学生的专业竞争力，使我国医学教育与国际接轨的必然手段。免疫学是非常重要的一门专业基础课程，要总结其教学中的不足之处，采用新的适应专业认证要求的教学方法，着重培养学生实践能力和创新能力，顺利通过临床专业认证。     

CIA大鼠滑膜成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的建立胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜成纤维细胞的培养方法并观察细胞生物学特点。方法收集CIA和正常大鼠的膝关节滑膜组织,采用组织块贴壁法培养滑膜成纤维细胞,观察细胞游出、生长情况;HE染色观察细胞形态;免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度;Masson染色观察细胞分泌胶原蛋白情况;CCK-8法检测细胞增殖情况。结果倒置显微镜及HE染色观察细胞形态及生长特征符合滑膜成纤维细胞,且98%以上的细胞表达Vimentin蛋白。模型组滑膜成纤维细胞较正常组细胞游出时间早且细胞量多;模型组细胞分泌胶原蛋白能力及细胞增殖能力较正常组强。结论本研究确立了CIA大鼠滑膜成纤维细胞原代培养体系,并且证实CIA大鼠滑膜成纤维细胞增殖与分泌功能较正常滑膜成纤维细胞强。