丙型肝炎5''''非编码区末端快速基因扩增方法的建立及应用

目的 建立快速获得丙型肝炎（HCV）基因组5’非编码区（5’uTR）真末端序列的分子生物学方法。方法 逆转录后利用末端聚合酶（TOT）进行加尾反应，再利用套式聚合酶链反应（PCR）扩增出目的末端基因的cDNA片段，A-T克隆，用限制性内切酶片段长度多态性分析（RVLP）与PCR鉴定重组子，全自动序列分析仪测定插入子序列。结果 cDNA末端快速扩增技术（RACE）获得5株HCV5’UTR克隆，包括3株全长克隆和2株缺失克隆。2株缺失克隆，一条在5’末端缺失53个碱基，另一条缺失144个碱基。结论 RACE技术快速、有效、实用，可有效获得丙型肝炎病毒基因组的5’非编码区末端序列。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎用药依从性及影响因素分析

采用问卷调查方法对163例使用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者进行用药情况及影响因素调查.22.7%(37/163)的慢性乙型肝炎患者依从性较差,77.3%(126/163)的患者依从性较好,依从性较好患者的HBeAg、HBV DNA阴转率分别达78.6%(99/126)和46.0%(58/126),明显高于依从性差者,其仅为37.8%(14/37)和21.6%(8/37,P<0.01).说明慢性乙型肝炎患者用药依从性与其预后有关.     

异甘草酸镁治疗慢性乙型肝炎50例疗效观察

甘草酸（GL）为甘草的最主要活性成分,甘草酸制剂为肾上腺皮质激素类药,具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用,是临床常用的抗炎保肝药,天然GL中存在18α-GL和18β-GL2种立体异构体。在α、β2种异构体中,α体具有亲脂性好、抗炎活性强、肝脏靶向性高、不良反应少等优点。异甘草酸镁（MgIG）是新一代的甘草酸制剂,其有效成分是单一构型的GLα体,其含量达98％以上,具有更强的抗炎、保护肝细胞膜、解毒、抗生物氧化及改善肝功能作用。现将本科使用异甘草酸镁治疗慢性乙肝报告如下。     

复方甘草酸苷治疗慢性肝炎临床疗效评价

目的观察复方甘草酸苷治疗慢性肝炎患者肝功能及肝纤维化改善的程度,评价其临床疗效。方法将100例慢性肝炎患者随机分为A、B和C组,A组单用复方甘草酸苷,120mg,静脉点滴,1/d,1个月后改口服,疗程3个月;B组用甘草酸二铵注射液,用法同前;C组为对照组。治疗前后观察各组患者肝功能变化及CG、HA、LN、IV-C、PCIII等肝纤维化指标。结果治疗结束后,A组与B组及C组比较,疗效更好,血清ALT复常率明显增高,分别为81.82%、57.58%、35.29%。A、B组与C组比较,!2值分别为14.91(P<0.01)、3.34(P<0.05);而A组与B组比较,!2值为5.22(P<0.05);A、B组患者血清CG、HA、LN、IV-C、PCIII水平均有不同程度下降,与治疗前比较,有显著性差异,A组较B组下降更显著。结论复方甘草酸苷能显著改善慢性肝炎肝功能及肝纤维化程度,临床疗效较好,复发率低。     

苦参素与因特芬联合治疗慢性乙型肝炎61例

20 0 2年 4月 -2 0 0 3年 5月我们联合应用苦参素葡萄糖注射液和干扰素治疗慢性乙型肝炎 61例 ,并与单用干扰素治疗的 5 5例患者作对比观察 ,现总结如下。1　资料和方法1 1　病例选择　全部病例均为本院门诊和住院患者 ,按 2 0 0 0年 (西安 )第 10次全国病毒性肝炎与肝病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案中的诊断标准[1] 诊断为轻、中度慢性乙型肝炎 ,共 116例。联合用药组 61例 ,男 49例 ,女 12例 ,年龄 19～5 4岁 ,平均 (3 2 1± 9 9)岁 ,病程平均 3 5年 ;干扰素组 5 5例 ,男 48例 ,女 7例 ,年龄 18～ 5 6岁 ,平均 (3 3 2± 8 7)岁 ,…     

中国大陆新发现丙型肝炎病毒3'非编码区终止密码子变异

目的获得全长中国大陆1b型丙型肝炎病毒(HCV)3'非编码区(3'UTR)cDNA,并分析一级结构的变异,为进一步研究其在HCV复制、翻译中的调控机制和开发新的抗HCV药物奠定基础.方法利用逆转录套式聚合酶链反应(RT-PCR)限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)初步筛选出1例1b型HCV感染者,采用半套式RT-PCR法扩增出约400bp的cDNA片段,克隆测序.结果获得的全长1b型HCV 3'端序列,由高变区、Poly(u)区、Poly(u/c)区及98碱基区4部分组成;首次发现终止密码子突变由TGA突变为TGG,可导致NS5B的翻译不能及时终止.结论半套式RT-PCR法可有效获得病毒基因组的全长末端序列;首次报道终止密码子突变导致NS5B区延长,3'UTR缩短.该发现对了解HCV的复制和翻译机制可能有一定的理论和实践意义.     

丙型肝炎病毒非结构基因NS5b研究进展

丙型肝炎病毒非结构基因5b(NS5b)区是RNA依赖的RNA聚合酶编码区，与HCV的复制及致病关系密切。同时，它也是设计抗病毒药物的重要分子区，特别是HBV聚合酶抑制剂拉米夫定成功的用于临床，使有关RNA依赖的RNA聚合酶表达、催化活性测定和特异性抑制位点等研究成为热点。本文就丙型肝炎病毒NS5b区有关的研究进展作了综述。     

丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶在大肠埃希菌中的表达

目的 表达具有野生起点的丙型肝炎病毒(HCV)RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)并研究其聚合活性，分析其是否具有逆转录酶活性。方法 构建截短的具有野生起点的HCV RdRp表达质粒，观察不同诱导温度对表达产物可溶性的影响。以多聚腺昔为模板，分别观察在寡聚脱氧胸苷和寡聚尿苷引导下RNA的合成。以互补引物模板评价所表达的HCV RdRp的逆转录酶活性。结果 在16℃诱导温度条件下获得截短具有野生起点的HCV RdRp的可溶性表达。在聚合反应体系中同时具有引物与模板时，获得RNA链的合成，多聚核昔为引物的聚合效率明显高于以多聚脱氧核昔为引物的聚合效率。在表达的HCV RdRp指导下，脱氧核苷掺入到互补引物模板体系中，随着反应时间的延长，10聚的互补引物/模板延伸为13聚的产物，但不能延长至14聚。结论 获得可溶性的HCV RdRp表达，具有RNA依赖的RNA聚合酶活性及有限的逆转录酶活性。其RNA依赖的RNA聚合酶活性有一定的引物依赖性。     

2a型丙型肝炎病毒5’非编码区的RACE护增及二级结构的分析

目的：获得真全长中国大陆2a型丙型肝炎病毒（HCV）5’非编码区（5’UTR）cDNA，并分析其一级结构和二级结构，为进一步研究其在HCR复制、翻译中的调控机制、开发新的抗HCV药物奠定基础。方法：利用逆转录套式聚合酶链反应（RT－PCR）联合限制性内切酶长度多态性分析（RFLP）初步筛选出1例2a型HCV感染者，采用cDNA末端快速扩增技术（RACE）扩增出一条约800bp的cDNA片段，A－T克隆，用RFLP与PCR鉴定重组子，全自动序列分析仪测定插入子序列，RNAdraw预测二级结构。结果：RACE法获得真全长2a型HCV 5’端序列。5个克隆中，3个克隆含全长5’UTR序列，与HCV－1，HC－C2，HC－J6，HC－J8相比，同源性分别为93．6％－94．4％，92．1％－93．0％，98．8％－99．7％，96．2％－96．5％，与2a型标准株HC－J6相比，21，170，222，247，339位不同，分别为G，A，C，C，T,但这些突变不影响其二级结构。另外2个克隆为5’端缺失突变株，分别缺失54bp和144bp。结论：RACE技术快速、有效、实用，可用效获得病毒基因组的末端序列；依此获得中国大陆2a型HCV的5’UTR cDNA；在感染者血液中存在5’端部分缺失的HCV基因片段。     

2a型丙型肝炎病毒5′非编码区的RACE扩增及二级结构的分析

目的获得真全长中国大陆2a型丙型肝炎病毒(HCV)5′非编码区 (5′UTR)cDNA,并分析其一级结构和二级结构,为进一步研究其在HCV复制、翻译中的调控机制、开发新的抗HCV药物奠定基础.方法利用逆转录套式聚合酶链反应(RT-PCR)联合限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)初步筛选出1例2a型HCV感染者,采用cDNA 末端快速扩增技术(RACE)扩增出一条约800 bp的cDNA片段,A-T克隆,用RFLP与PCR鉴定重组子,全自动序列分析仪测定插入子序列,RNAdraw预测二级结构.结果 RACE法获得真全长2a型HCV 5′端序列.5个克隆中,3个克隆含全长5′UTR序列,与HCV-1,HC-C2,HC-J6,HC-J8相比,同源性分别为93.6%～94.4%, 92.1%～93.0%, 98.8%～99.7%,96.2%～96.5%,与2a型标准株HC-J6相比,21,170,222,247,339位不同,分别为G,A,C,C,T,但这些突变不影响其二级结构.另外2个克隆为5′端缺失突变株,分别缺失54 bp和144 bp.结论 RACE技术快速、有效、实用,可有效获得病毒基因组的末端序列;依此获得中国大陆2a型HCV的5′UTR cDNA;在感染者血液中存在5′端部分缺失的HCV基因片段.