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1.
2.
目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对体外培养神经干细胞(NSCs)分化及分化基因表达的影响,探讨CMV先天感染致神经损伤的机制.方法 体外分离培养和鉴定BALB/c胎鼠NSCs并检测其分化潜能,用感染复数(MOI)为5、1和0.1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,流式细胞术检测分化细胞比率,免疫荧光法观察NSCs及其分化细胞标记物Nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的变化,采用MCMV早期抗原(EA)示踪感染过程(MOI=1),real-time RT-PCR检测分化早期NSCs Wnt信号途径关键分化基因Wnt-3和Wnt-Ta mRNA水平的动态变化.结果 体外培养的NSCs呈球样生长,神经干细胞特异性标记Nestin表达阳性,并可进一步诱导分化为NF-200阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞;分化培养后,感染组NSCs不能贴壁分化生长并逐渐出现肿胀,细胞Nestin表达下调缓慢并显著高于正常对照组,而GFAP和NSE表达显著低于正常对照组(P<0.05),可检测到MCMV EA的阳性表达;分化培养3-9 d,感染组Nestin阳性细胞比率显著高于正常对照组,GFAP和NSE阳性细胞比率显著低于正常对照组(P<0.05);感染组Wnt-3 mRNA水平在分化培养后第1~2天显著低于正常对照组(P<0.05),感染组Wnto-7a mRNA水平在第0.5~2天明显低于正常对照组(P<0.05);感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显.结论 MCMV感染可明显抑制NSCs向神经元和星形胶质细胞方向分化,导致分化细胞比率减少;下调或干扰NSCs wnt信号途径分化基因wnt-3和Wnt-7a的表达;抑制NSCs分化及其分化基因表达的效应与MOI大小存在一定量效依赖关系;MCMV可能通过抑制NSCs分化基因的表达来抑制其分化,这可能是CMV先天感染致脑发育异常的重要机制之一. 相似文献
3.
目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对体外培养神经干细胞(NSCs)分化及分化基因表达的影响,探讨CMV先天感染致神经损伤的机制.方法 体外分离培养和鉴定BALB/c胎鼠NSCs并检测其分化潜能,用感染复数(MOI)为5、1和0.1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,流式细胞术检测分化细胞比率,免疫荧光法观察NSCs及其分化细胞标记物Nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的变化,采用MCMV早期抗原(EA)示踪感染过程(MOI=1),real-time RT-PCR检测分化早期NSCs Wnt信号途径关键分化基因Wnt-3和Wnt-Ta mRNA水平的动态变化.结果 体外培养的NSCs呈球样生长,神经干细胞特异性标记Nestin表达阳性,并可进一步诱导分化为NF-200阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞;分化培养后,感染组NSCs不能贴壁分化生长并逐渐出现肿胀,细胞Nestin表达下调缓慢并显著高于正常对照组,而GFAP和NSE表达显著低于正常对照组(P<0.05),可检测到MCMV EA的阳性表达;分化培养3-9 d,感染组Nestin阳性细胞比率显著高于正常对照组,GFAP和NSE阳性细胞比率显著低于正常对照组(P<0.05);感染组Wnt-3 mRNA水平在分化培养后第1~2天显著低于正常对照组(P<0.05),感染组Wnto-7a mRNA水平在第0.5~2天明显低于正常对照组(P<0.05);感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显.结论 MCMV感染可明显抑制NSCs向神经元和星形胶质细胞方向分化,导致分化细胞比率减少;下调或干扰NSCs wnt信号途径分化基因wnt-3和Wnt-7a的表达;抑制NSCs分化及其分化基因表达的效应与MOI大小存在一定量效依赖关系;MCMV可能通过抑制NSCs分化基因的表达来抑制其分化,这可能是CMV先天感染致脑发育异常的重要机制之一. 相似文献
4.
5.
目的构建小鼠巨细胞病毒(MCMV)即刻早期基因M122的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-M122,并检测其自激活作用及对酵母AH109菌株有无毒性作用,用于筛选小鼠胚胎脑cDNA文库。方法采用反转录(RT)-PCR的方法扩增MCMV的M122基因片段,并将其插入到pMD18-Tsimple vector,构建重组质粒pMD18-T-M122。用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将重组质粒酶切鉴定,并测序。测序正确的pMD18-T-M122重组质粒和载体pGBKT7-BD分别用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ进行双酶切,凝胶回收M122基因片段及pGBKT7-BD载体片段。将回收的M122基因片段和pGBKT7-BD载体片段,用T4 DNA连接酶16℃连接过夜,构建诱饵质粒pGBKT7-M122。对pGBKTT-M122进行酶切鉴定,测序。将测序正确的pGBKT7-M122转化AH109酵母感受态细胞,转化菌液涂布于营养缺陷培养基SD/-Trp平板和SD/-Trp/X-α-Gal平板。空载体质粒pGBKT7-BD和阳性质粒pCL作为对照亦被转入AH109酵母感受态细胞,转化菌液分别涂布于SD/-Trp平板和SD/... 相似文献
6.
田佳 《临床合理用药杂志》2011,(35):44
目的观察噻托溴铵联合福莫特罗治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期的疗效。方法选取我院2008年3月—2011年3月收治的80例慢性阻塞性肺疾病稳定期患者,随机分为治疗组(40例)和对照组(40例),对照组患者应用单药噻托溴铵治疗,治疗组采用噻托溴铵联合福莫特罗治疗,随访3个月,比较两组患者的肺功能改善情况。结果治疗组患者肺功能改善明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论噻托溴铵联合福莫特罗治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期患者,能明显改善患者肺功能,提高生活质量,值得在临床推广。 相似文献
7.
随着我国冠脉支架集采新政的实施,导管顶端血压传感器作为冠脉病变诊断、治疗必不可少的医疗器械之一,将迎来新的行业发展契机,将有一批医疗器械企业积极投入导管顶端血压传感器的研发与注册中;作为有创血压传感器,导管顶端血压传感器应满足现行有效行业标准YY 0781-2010,但是由于其与普通的血管穿刺血压传感器在产品结构、工作方式的不同,导致在按照YY 0781-2010对其进行检测时存在诸多问题。该研究通过对导管顶端血压传感器在执行YY 0781-2010的过程中存在的“使用说明书”“电气性能”“安全要求”等问题进行详细的探讨和分析,希望给更多的导管顶端血压传感器的研发制造企业以及医疗器械检测机构的检验人员提供一些启发,也希望能够为我国导管顶端血压传感器行业的高质量发展贡献一份力量。 相似文献
8.
目的 通过测定机械通气对急性呼吸窘迫综合征(Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS)患者支气管肺泡灌洗液(BronchoAlveolar Lavage Fluid,BALF)与血清中肺损伤标记物的变化,明确气道压力释放通气(Airway Pressure Release Ventilation,APRV)与小潮气量保护性通气(Low Tidal Volume Protective Ventilation,LTV)对ARDS患者呼吸机相关性肺损伤(Ventilator-Induced Lung Injury,VILI)的影响。方法 收集深圳大学总医院及海南省人民医院2018-01至2019-05内ARDS住院患者40例,以随机数字法分为两组:A组21例,B组19例,A组先予APRV通气24 h,随后转为LTV 24 h;B组先予LTV 24 h,再转为APRV 24 h,比较干预治疗0 h、24 h、48 h两组患者氧合指数、呼吸力学、BALF及血清中肺泡表面活性蛋白(Pulmonary Surfactant Protein D,SP-D)、重组... 相似文献
9.
背景:近年来,绝经后骨质疏松症骨骼与免疫系统之间相互作用机制的研究已成为热点,但关键免疫相关因子表达改变对绝经后骨质疏松症的影响尚不明确,仍需进一步探索。目的:通过生物信息学方法探讨绝经后骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞免疫相关因子差异化表达情况。方法:通过卵巢切除手术构建绝经后骨质疏松症小鼠模型,采用全骨髓贴壁法获取骨髓间充质干细胞并稳定传代至第2代,使用RayBio L-Series Mouse Antibody Array 308 Glass Slide Kit免疫相关因子抗体芯片检测卵巢切除组及假手术组小鼠骨髓间充质干细胞中存在差异表达的蛋白,对检测结果进行GO、KEGG富集分析及PPI网络分析,通过MCC、EPC及MNC算法所得值筛选共同的Hub基因。结果与结论:共获得68个差异表达基因。GO分析发现差异表达基因富集于免疫系统过程、胞外区、信号受体结合等条目。KEGG分析发现差异基因主要富集于细胞因子-细胞因子受体的相互作用、肿瘤坏死因子信号通路和趋化因子信号通路等条目。通过对68个差异表达基因构建PPI网络分析进一步筛选得到了8个Hub基因,绘制小提琴图和相关性矩阵发现8个H... 相似文献
10.
目的比较电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测低值乙肝表面抗原(HBsAg)与酶联免疫吸附试验(ELISA)法乙肝五项[HBsAg、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb)]的检测结果,为临床和科研提供一定的科学依据。方法根据ECLIA检测HBsAg的结果,将207例患者分为3组:A组,HBsAg为0.05~5.00IU/mL;B组,HBsAg为0.20~0.50IU/mL;C组,HBsAg为0.05~0.20IU/mL。采用ELISA法对3组进行HBsAg检测,对C组进行乙肝五项检测及6个月追踪HBsAg检测,对测定结果进行比较分析。结果A、B、C组ECLIA法和ELISA法测定HBsAg的阳性符合率分别为100.00%、98.08%、30.43%,C组显著低于A、B组,差异有统计学意义(P0.05)。对C组中ELISA法检测HBsAg为阴性,HBeAb、HBcAb同时阳性或HBcAb单项阳性的患者,进行6个月追踪检测,HBsAg阳性符合率提高至45.65%。结论 ECLIA法检测低值HBsAg的灵敏度明显高于ELISA法,能有效提高检测的准确性。 相似文献