免疫抑制酸性蛋白的纯化及抗血清的制备

免疫抑制酸性蛋白(IAP)是存在于肿瘤患者体内的一种具有免疫抑制活性的酸性糖蛋白，作为肿瘤标志物被试用于癌症患者的临床诊断、疗效观察、监测复发和判断预后。本研究应用盐析、层析、制备电泳等免疫生化技术从癌症患者的胸水中提纯IAP，经鉴定与日本IAP参考标准品完全一致，并制备了特异、高效价的抗血清，建立了IAP免疫单扩散检测法，初步应用于临床研究，证实癌症患者的IAP水平明显高于正常人，其阳性率亦高于CEA及AFP。提示在检测AFP，CEA等肿瘤标志物的同时检测IAP的含量，有助于提高肿瘤的早期检出率。     

促甲状腺激素单克隆抗体的制备和应用

目的:获得高效价、高特异性的促甲状腺激素(TSH)单克隆抗体,为建立高灵敏度的促甲状腺激素水平的测定方法奠定基础。方法:采用细胞融合技术,以TSH抗原免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合。通过多次阳性筛选和有限稀释,建立了抗人TSH单克隆抗体杂交瘤细胞株。并对所建立的单抗进行了鉴定。结果:细胞融合率达100%,阳性率15%。共建立了5株杂交瘤细胞株,均属IgG1 类。且与FSH、HCG、LH无交叉反应。McAb腹水效价在1∶5×105 ~1∶1×107。6个月液氮冻存后复苏培养测定细胞株的稳定性好。结论:本实验的融合率高,阳性率较高,所建立的细胞株的特异性高,McAb腹水效价高。为提高TSH检测的灵敏度和简便性提供了重要条件。     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗胰蛋白酶原激活肽单克隆抗体的制备及研究

研究表明 ,血和尿中的胰蛋白酶原激活肽 (TAP)含量 ,能够特异地反映胰蛋白酶的肠外激活和胰腺坏死的程度。这对及时、准确地诊断急性胰腺炎有重要的临床意义。本研究用KLH连接的TAP作免疫原 ,共建立了 4株抗TAP的单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,均属IgG1亚类。单克隆抗体效价达 1:5× 10 5至 1:1× 10 7。效价高 ,稳定性好 ,特异性强 ,与胰蛋白酶原无交叉反应。为建立更敏感、更特异的TAP免疫检测方法 ,并用于探讨胰蛋白酶异位激活的致病机制的研究 ,以及全身性炎症反应在局部损伤作用的研究创造了条件。